Induction of ACC deaminase activity

Induction of ACC deaminase activity:
One litre culture of Pseudomonas pulida was grown on DF were minimal medium
plus (NH4
)2 SO4
for 48hr. The cells were pelleted by centrifugation in a
sorval RC 5C centrifuge at 8300 Xg for l0min, at room temperature, washed
with 500ml of 0.1M phosphate buffer, pll 7.0 and then centrifuged again
under the same condition. The cell pellet was resuspended in 500ml of DF
salts minimal medium and 90ml was distributed into 5 separate sterile 250ml
conical flasks. 10ml of ACC in DF salts minimal medium was added to flask
to give final ACC concentration of 1 .mM, l00µM. l0µM, lµM and l00nM. The
cell suspensions were then incubated at room temperature on an orbital shaker
at 200 - 250 rpm for 24h. The cells were subsequently pelleted by high speed
centrifugation and dialyzed cell free extracts were prepared and assayed for
ACC deaminase activity.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เหนี่ยวนำของ ACC deaminase กิจกรรม:วัฒนธรรมระดับหนึ่งลิตรของ Pseudomonas pulida ถูกปลูกใน DF ได้ปานกลางน้อยที่สุดพลัส (NH4) 2 SO4 48 ชม เซลล์ถูกสัตว์ โดยการหมุนเหวี่ยงในการล้างเครื่องเหวี่ยง sorval RC ที่ 8300 Xg 5C สำหรับ l0min อุณหภูมิห้องด้วย 500 มล.ของ 0.1M ฟอสเฟต บัฟเฟอร์ pll 7.0 และผลิตภัณฑ์อีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน เม็ดเซลล์ถูก resuspended ใน 500 มล.ของ DFเกลือน้อยปานกลางและ 90 มล.กระจายเข้า 5 แยกปลอดเชื้อ 250 มล.ขวดทรงกรวย ขวด 10ml ของ ACC ใน DF เกลือน้อยที่สุดถูกเพื่อให้ ACC เข้มข้นสุดท้าย 1 .mM, l00µM. l0µM, lµM และ l00nM การสารแขวนลอยเซลล์แล้วได้รับการกกที่อุณหภูมิห้องในการปั่นวงที่ 200-250 rpm ใน 24 ชม เซลล์มีต่อสัตว์ ด้วยความเร็วสูงหมุนเหวี่ยง dialyzed เซลล์สารสกัดจากฟรีเตรียม และถูก assayed สำหรับACC deaminase กิจกรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเหนี่ยวนำของกิจกรรม deaminase ACC:
วัฒนธรรมลิตรหนึ่งของ Pseudomonas pulida ถูกปลูกใน DF อยู่กลางน้อยที่สุด
บวก (NH4
) 2 SO4
สำหรับ 48hr เซลล์ถูกเม็ดโดยการหมุนเหวี่ยงใน
sorval RC 5C หมุนเหวี่ยงที่ 8300 Xg สำหรับ l0min ที่อุณหภูมิห้องล้าง
ด้วย 500ml ของ 0.1M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์, PLL 7.0 แล้วปั่นอีกครั้ง
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน เม็ดเซลล์ถูก resuspended ใน 500ml ของ DF
เกลือกลางน้อยที่สุดและ 90ml ถูกแจกจ่ายออกเป็น 5 แยกต่างหากหมัน 250ml
ขวดรูปกรวย 10ml ของแม็กเกลือ DF กลางน้อยที่สุดถูกบันทึกอยู่ในขวด
เพื่อให้ความเข้มข้นของแม็กสุดท้ายของ 1 .mM, l00μM l0μM, lμMและ l00nM
เซลล์แขวนลอยถูกบ่มแล้วที่อุณหภูมิห้องในเครื่องปั่นวงโคจร
ที่ 200-250 รอบต่อนาทีสำหรับ 24 ชั่วโมง เซลล์ที่ได้รับภายหลังจากเม็ดความเร็วสูง
หมุนเหวี่ยงและเซลล์ dialyzed สารสกัดจากฟรีได้จัดทำและ assayed สำหรับ
กิจกรรมแม็ก deaminase

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การทำแผนกิจกรรมบัญชี :วัฒนธรรมของ pulida ลิตรหนึ่งปลูกบน DF อยู่กลางน้อยที่สุดบวกกับ ( NH42 ปาสำหรับ 48hr . เซลล์มีเม็ดโดยการเหวี่ยงแยกในเครื่อง sorval 5C RC ที่ 8300 XG สำหรับ l0min อุณหภูมิห้อง ล้างกับ 500 มล. 0.1m ฟอสเฟต บัฟเฟอร์ PLL 7.0 แล้วไฟฟ้าอีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน เซลล์เม็ดเป็น resuspended ใน df 500 มล.เกลือน้อย ปานกลาง และ 90ml กระจายไป 5 แยกปลอดเชื้อ 250mlที่เป็นรูปทรงกรวยและขวด . ที่มาของบัญชีในเกลือ df minimal medium ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในขวดให้สมาธิบัญชีสุดท้าย 1 - 100 เมตร µµ l0 M , M µ L และ l00nm . ที่เซลล์แขวนลอย แล้วบ่มที่อุณหภูมิห้องในเครื่องปั่นของวงโคจรที่ 200 - 250 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 24 ชั่วโมง เซลล์ จัดการอัดเม็ดด้วยความเร็วสูงปั่นผ่านเซลล์และสารสกัดฟรีถูกเตรียมและปริมาณสำหรับกิจกรรมทำแผนที่ตาม