2.3. Immunohistochemistry
2.3.1. Immunoperoxidase detection
The CNS (brain or supraesophageal ganglion, subesophageal
ganglion (SEG), thoracic ganglia and abdominal ganglia) and ovaries
were obtained from 16 female prawns at four stages of the ovarian
cycle (stages I–IV as defined by Meeratana and Sobhon, 2007;
n = 4 animals per stage; stage 0 is spawning and was not studied).
The prawns were anesthetized on ice for 15min, and the tissues
were dissected out and fixed in 2.5% glutaraldehyde in phosphatebuffered
saline (PBS) (NaH2PO4·2H2O 5.14g, Na2HPO4·H2O 9.51 g,
NaCl 8.50 g in 1 L of distilled water) containing 1% sodium metabisulfite
at 4 ◦C overnight. After fixation and paraffin embedding,
the tissueswere cut into 5mthick sections, whichweremounted
on slides coated with 3-aminopropyl triethoxy-silane solution
(Sigma Co., St. Louis, MO, USA). The sections were deparaffinized
with xylene and rehydrated through a graded series of ethyl alcohol
(100%, 95%, 90%, 80%, and 70%) for 5 min each. Tissue sections
were then immersed in 1% lithium carbonate in 70% ethanol for
15 min. Subsequently, endogenous peroxidase and free aldehyde
2.3. Immunohistochemistry2.3.1 Immunoperoxidase ตรวจCNS (ganglion สมองหรือ supraesophageal, subesophagealganglion (SEG), ganglia ทรวงอก และช่องท้อง ganglia) และรังไข่ได้รับจากหญิงกุ้ง 16 ที่สี่ขั้นตอนของการรังไข่รอบ (ระยะ i – IV ตามที่กำหนด โดย Meeratana และโศภน 2007n =สัตว์ 4 ต่อเวที ระยะ 0 คือวางไข่ และไม่มีศึกษา)กุ้งได้ด้วยบนน้ำแข็ง 15 นาที และเนื้อเยื่อdissected ออก และถาวรใน 2.5% glutaraldehyde ใน phosphatebufferedน้ำเกลือ (PBS) (NaH2PO4·2H2O 5.14 กรัม Na2HPO4·H2O 9.51 กรัมเป็นโซเดียม 1% ที่มี NaCl ที่ 8.50 g ในน้ำกลั่น 1 L)ที่ 4 ◦C ค้างคืน หลังจากปฏิกิริยาการตรึงและพาราฟินฝังtissueswere ที่ตัดเป็น 5 ส่วน mthick, whichweremountedบนสไลด์ที่เคลือบ ด้วย 3 aminopropyl triethoxy silane โซลูชั่น(ซิกมา จำกัด St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) ส่วนที่ deparaffinizedกับพารา และ rehydrated ผ่านชุดมีการจัดระดับของเอทิลแอลกอฮอล์(100%, 95%, 90%, 80% และ 70%) สำหรับ 5 นาที ส่วนเนื้อเยื่อแล้วดื่มด่ำไปกับใน 1% ลิเทียมคาร์บอเนตในเอทานอล 70% สำหรับ15 นาที ในเวลาต่อมา endogenous peroxidase และแอลดีไฮด์อิสระ
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3 immunohistochemistry
2.3.1 การตรวจสอบ immunoperoxidase
ระบบประสาทส่วนกลาง (สมองหรือ supraesophageal ปมประสาท, subesophageal
ปมประสาท (SEG) ปมประสาททรวงอกและช่องท้องปมประสาท) และรังไข่
ที่ได้รับตั้งแต่วันที่ 16 กุ้งหญิงที่สี่ขั้นตอนของรังไข่
วงจร (ขั้นตอน I-IV ตามที่กำหนดโดย Meeratana และโศภน, 2007 ;
n = 4 ขั้นตอนต่อสัตว์; เวที 0 จะวางไข่และไม่ได้รับการศึกษา).
กุ้งถูกวางยาสลบบนน้ำแข็งสำหรับ 15 นาทีและเนื้อเยื่อ
ที่ถูกชำแหละออกมาและแก้ไขใน glutaraldehyde 2.5% ใน phosphatebuffered
น้ำเกลือ (พีบีเอส) (NaH2PO4 · 2H2O 5.14 กรัม Na2HPO4 · H2O 9.51 กรัม
โซเดียมคลอไรด์ 8.50 กรัมใน 1 ลิตรของน้ำกลั่น) ที่มี metabisulfite โซเดียม 1%
ที่ 4 ◦Cในชั่วข้ามคืน หลังจากการตรึงและพาราฟินฝัง,
tissueswere ตัดออกเป็น 5? mthick ส่วน whichweremounted
บนสไลด์ที่เคลือบด้วย 3 aminopropyl แก้ปัญหา triethoxy-ไซเลน
(Sigma Co. , เซนต์หลุยส์, MO, USA) ส่วนที่ถูก deparaffinized
กับไซลีนและ rehydrated ผ่านชุดอย่างช้า ๆ ของเอทิลแอลกอฮอล์
(100%, 95%, 90%, 80% และ 70%) เป็นเวลา 5 นาทีในแต่ละ ส่วนเนื้อเยื่อ
ถูกแช่อยู่แล้วใน 1% ลิเธียมคาร์บอเนตในเอทานอล 70% สำหรับ
15 นาที ต่อมา peroxidase ภายนอกและลดีไฮด์ฟรี
การแปล กรุณารอสักครู่..