loss of analyte due to adsorption t

loss of analyte due to adsorption to surfaces
becomes critical when handling sub-picomole
amounts of proteins. Thus, it is required to limit
the number of steps involving lyophilization and
transfer of the sample. The application of proteases
immobilized on a solid support has several
benefits, as has been reported earlier by other
groups [6-81. In this study we show that efficient
tryptic digestion of proteins can be obtained in
seconds, simply by passing the sample through a
self-prepared column of POROS immobilized
trypsin material [9]. Preparation of the column
is quick and simple, and the required column
bed volume is typically less than 0.5 ~1. All
materials used are disposables, which eliminates
the risk of memory effects from previous runs.
The sample is passed over the column and eluted
directly onto the MALDI target in a single step,
which minimizes sample losses due to adsorption
to surfaces. Immobilization of the protease significantly
reduces autoproteolysis [8]. This
allows for an effective protease concentration,
many times higher than in solution.
2. Materials
N-octylglycopyranoside and modified trypsin
were obtained from Boehringer Mannheim
(Germany). Ammonium bicarbonate, iodoacetamide,
a-cyano-4-hydroxycinnamic acid, urea
and bovine serum albumin were purchased

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สูญเสียของ analyte เนื่องจากดูดซับบนพื้นผิวจะสำคัญเมื่อจัดการย่อย picomoleปริมาณของโปรตีน ดังนั้น จะต้องจำกัดจำนวนขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับเป็น ๆ และโอนตัวอย่าง การประยุกต์ใช้โปรตีเอสตรึงบนของแข็งสนับสนุนมีหลายประโยชน์ ตามที่มีการรายงานก่อนหน้าอื่น ๆกลุ่ม [6-81 ในการศึกษานี้ เราแสดงที่มีประสิทธิภาพtryptic ย่อยโปรตีนได้ในวินาที ก็ โดยผ่านตัวอย่างผ่านการพอรอสตรึงคอลัมน์เตรียมด้วยตนเองทริปซินวัสดุ [9] การเตรียมการของคอลัมน์รวดเร็ว และง่าย และคอลัมน์ที่ต้องการเสียงเตียงคือโดยทั่วไปกว่า 0.5 ~ 1 ทั้งหมดวัสดุที่ใช้มี disposables ซึ่งช่วยลดความเสี่ยงของหน่วยความจำผลจากการทำงานก่อนหน้าตัวอย่างผ่านคอลัมน์ และ elutedโดยตรงไปยังเป้าหมาย MALDI ในขั้นตอนเดียวซึ่งช่วยลดการสูญเสียตัวอย่างเนื่องจากการดูดซับกับพื้นผิว ตรึงโปรติเอสมีนัยสำคัญลด autoproteolysis [8] นี้ช่วยให้ความเข้มข้นของโปรติเอสที่มีประสิทธิภาพหลายครั้งสูงกว่าในการแก้ปัญหา2. วัสดุN octylglycopyranoside และปรับเปลี่ยนทริปซินได้รับจาก Boehringer มานไฮม์(เยอรมนี) แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต iodoacetamideยูเรียกรด a-แคทไอออน-4-hydroxycinnamicและซื้อวัว serum albumin

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสูญเสียของ analyte เนื่องจากการดูดซับบนพื้นผิวที่
กลายเป็นสิ่งสำคัญเมื่อการจัดการย่อย picomole
ปริมาณของโปรตีน ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีการ จำกัด
จำนวนของขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับการแห้งแบบเยือกแข็งและ
การถ่ายโอนของกลุ่มตัวอย่าง การประยุกต์ใช้โปรตีเอส
ตรึงบนการสนับสนุนที่มั่นคงมีหลาย
ผลประโยชน์ตามที่ได้รับรายงานก่อนหน้านี้โดยการอื่น ๆ
กลุ่ม [6-81 ในการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเรามีประสิทธิภาพ
ในการย่อยอาหาร tryptic ของโปรตีนที่สามารถหาได้ใน
วินาทีเพียงโดยผ่านตัวอย่างผ่าน
คอลัมน์ตัวเองเตรียมโพตรึง
วัสดุ trypsin [9] การเตรียมความพร้อมของคอลัมน์
มีความรวดเร็วและง่ายและคอลัมน์ที่ต้องการ
ปริมาณเตียงโดยปกติจะน้อยกว่า 0.5 ~ 1 ทั้งหมด
วัสดุที่ใช้แล้วทิ้งอยู่ซึ่งจะช่วยลด
ความเสี่ยงของผลหน่วยความจำจากการทำงานก่อนหน้านี้.
กลุ่มตัวอย่างจะถูกส่งผ่านคอลัมน์และชะ
โดยตรงไปยังเป้าหมาย MALDI ในขั้นตอนเดียว
ซึ่งช่วยลดการสูญเสียตัวอย่างอันเนื่องมาจากการดูดซับ
บนพื้นผิว การตรึงน้ำย่อยอย่างมีนัยสำคัญ
ช่วยลด autoproteolysis [8] นี้
ช่วยให้ความเข้มข้นของน้ำย่อยที่มีประสิทธิภาพ
หลายครั้งสูงกว่าในการแก้ปัญหา.
2 วัสดุ
N-octylglycopyranoside และ trypsin การแก้ไข
ที่ได้รับจาก Boehringer Mannheim
(เยอรมนี) แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต, iodoacetamide,
A-cyano-4-hydroxycinnamic กรดยูเรีย
และซีรั่มอัลบูมิวัวกำลังซื้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสูญเสียเนื่องจากการดูดซับบนพื้นผิวของครูจะกลายเป็นวิกฤตเมื่อจัดการ picomole ย่อยปริมาณของโปรตีน ดังนั้นจึงต้องจำกัดจำนวนของขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับหลักสูตร และการถ่ายโอนของตัวอย่าง การประยุกต์ใช้ทางที่ตรึงบนการสนับสนุนแข็งได้หลาย ๆประโยชน์ที่ได้รับการรายงานก่อนหน้านี้โดยอื่น ๆกลุ่ม [ 6-81 . ในการศึกษาได้แสดงให้เห็นว่ามีประสิทธิภาพย่อยอาหารโปรตีนที่สามารถหาได้ในวินาที โดยผ่านตัวอย่างผ่านตนเองเตรียมคอลัมน์ของ Poros ตรึงวัสดุซิน [ 9 ] การเตรียมการของคอลัมน์เป็นอย่างรวดเร็วและง่ายและเป็นคอลัมน์เสียงเตียงมักจะน้อยกว่า 0.5 ~ 1 ทั้งหมดวัสดุที่ใช้ซึ่งช่วยขจัดทิ้งความเสี่ยงของผลหน่วยความจำ จากเดิมวิ่งตัวอย่างผ่านคอลัมน์ และตัวอย่างโดยตรงบน มา ดิ เป้าหมายในขั้นตอนเดียวซึ่งช่วยลดการสูญเสียเนื่องจากการดูดตัวอย่างกับพื้นผิว ผลของโปรติเอสอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติลด autoproteolysis [ 8 ] นี้ช่วยให้ความเข้มข้นของโปรตีนที่มีประสิทธิภาพหลายๆครั้งสูงกว่าในสารละลาย2 . วัสดุn-octylglycopyranoside และแก้ไขเปลี่ยนแปลงได้จาก Boehringer Mannheim( เยอรมนี ) แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต iodoacetamide , ,a-cyano-4-hydroxycinnamic กรดยูเรียและ อัลบูมินถูกซื้อ