Histology and ImmunohistochemistryO

Histology and Immunohistochemistry

One sheep and one goat were euthanized and submitted to a necropsy procedure on each of dpi 6, 8, and 11.

Tissues were fixed in 10% neutral phosphate-buffered formalin. Sections were stained with haematoxylin and eosin (HE).

For immunohistochemistry, paraffin tissue sections were quenched for 10 minutes in aqueous 3% H2O2, then pretreated with proteinase K for 10 minutes.

Primary antibody, a monoclonal antibody raised against PPRV strain Nigeria 75/1 (generously provided by the USDA, Plum Island, USA), was used at a 1:1000 dilution in 10% normal goat serum and Tris-buffered saline/0.05% Tween 20 (TBST) solution overnight at 4°C.

Labelled tissue sections were then stained using a horseradish peroxidase-labelled polymer (Envision®+system [anti-mouse] [Dako, USA]), reacted with the chromogen, diaminobenzidine (DAB). The sections were then counter-stained with Gill’s hematoxylin.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เนื้อเยื่อและ immunohistochemistry

หนึ่งแกะและลูกแพะตัวหนึ่งถูกฆ่าเพื่อเก็บเนื้อเยื่อและส่งไปยังขั้นตอนการชันสูตรศพในแต่ละ dpi 6, 8, และ 11

เนื้อเยื่อถูกแก้ไขใน 10% ฟอร์มาล​​ินเป็นกลางฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ส่วนที่ถูกย้อมด้วยสี haematoxylin และ eosin (เขา)

เพื่อ immunohistochemistry ส่วนเนื้อเยื่อพาราฟินถูกดับเป็นเวลา 10 นาทีในน้ำ H2O2 3%จากนั้นปรับสภาพด้วยโปร k เป็นเวลา 10 นาที

แอนติบอดีหลักแอนติบอดีขึ้นกับสายพันธุ์ pprv ไนจีเรีย 75/1 (ให้ไม่เห็นแก่ตัวโดย usda, พลัมเกาะ usa) ถูกนำมาใช้ในการเจือจาง 1:1000 ใน 10% ซีรั่มแพะปกติและ tris-บัฟเฟอร์ saline/0.05 20% ทวี (tbst) วิธีการค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส

ข้อความส่วนเนื้อเยื่อถูกย้อมสีแล้วใช้มะรุม peroxidase ติดฉลากลิเมอร์ (จินตนาการ®ระบบ [ป้องกันเมาส์] [dako, usa]) ปฏิกิริยากับสารทำให้เกิดสี, diaminobenzidine (ตบเบา ๆ ) ส่วนที่ถูกแล้วที่เคาน์เตอร์เปื้อน hematoxylin เหงือกของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มิญชวิทยาและ Immunohistochemistry

หนึ่งแกะและแพะหนึ่ง euthanized และส่งไปยังกระบวนงาน necropsy dpi 6, 8 และ 11 แต่ละ

เนื้อเยื่อได้ถาวรใน 10% กลางฟอสเฟต buffered formalin ส่วนที่สี haematoxylin และ eosin (เขา)

สำหรับ immunohistochemistry พาราฟินเนื้อเยื่อส่วนถูก quenched อควี 3% H2O2, 10 นาที แล้ว pretreated ด้วย proteinase K 10 นาที

ใช้แอนติบอดีหลัก แอนติบอดี monoclonal ที่ขึ้นกับต้องใช้ PPRV 75/1 (กว้างโดยจาก เกาะพลัม สหรัฐอเมริกา), ไนจีเรียที่เจือจาง 1:1000 ในซีรั่มแพะปกติ 10% และ saline/0.05% ตรี buffered โซลูชัน Tween 20 (TBST) ค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส

ส่วนเนื้อเยื่อมันได้แล้วสี horseradish peroxidase มันพอลิเมอร์ (Envision ®ระบบ [ป้องกันเมาส์] [Dako สหรัฐอเมริกา]), ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นด้วย chromogen, diaminobenzidine (เล็กน้อย) ส่วนถูกแล้วทวนสีกับ hematoxylin ของเหงือก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิชาฮิซทอล - โอะจิและ แกะ

หนึ่ง immunohistochemistry และแพะเป็นหนึ่ง euthanized และส่งไปยังขั้นตอน necropsy ในแต่ละจุดต่อตารางนิ้วและ 6 , 8 และ 11

เนื้อเยื่อในฟอร์มาลินฟอสเฟต - Buffered เป็นกลาง 10% ส่วนมีแต้มสีพร้อมด้วย haematoxylin และ eosin (เขา)

สำหรับ immunohistochemistry เนื้อเยื่อส่วนน้ำมันก๊าดอยู่ก็ดับลงเป็นเวลา 10 นาทีใน O 2 H 23% ที่เกิดจากน้ำแล้วฆ่าเชื้อโรคมาแล้วพร้อมด้วย proteinase K สำหรับ 10 นาที

หลักแอนทิบอด - อิ, monoclonal แอนทิบอด - อิยกกับ pprv ความเมื่อยล้าไนจีเรีย 75/1 (ขนาดใหญ่จัดให้บริการเนื้อวัว USDA Prime โดย,พลัมเกาะ,สหรัฐอเมริกา),ใช้ที่ 1 : 1000 เจือจางใน 10% ตามปกติแพะเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์และบริษัททริสเรทติ้ง - Buffered น้ำเกลือ/ 0.05% ส่วนกลาง 20 ( tbst )โซลูชันพักค้างคืนที่ 4 ° C

ส่วนเนื้อเยื่อมีป้ายมีแต้มสีจากนั้นก็ใช้หัวไชเท้า peroxidase - ป้ายโพลิเมอร์(ลองหลับตานึกถึง ภาพ ®ระบบ[การป้องกันการ - เมาส์][ dako สหรัฐอเมริกา])ที่ปฏิกิริยากับ chromogen diaminobenzidine ( DAB ) ส่วนที่มีเคาน์เตอร์แต้มสีพร้อมด้วย hematoxylin ของ Gill