2.5.3. HPLC–ESI-MSn analysisFor the

2.5.3. HPLC–ESI-MSn analysis

For the qualitative analysis of glucosinolates, the HPLC system was coupled to an Agilent 1100 series LC/MSD trap with electrospray ionisation. The HPLC conditions were the same as described above. The nebuliser pressure was 60 psi and the nitrogen flow rate was 10 L/min at a drying temperature of 350 °C. Mass scans were performed from m/z 120 to 1000 in negative ionisation mode. Helium was used as the collision gas for the fragmentation of the isolated compounds in the ion trap. The detection conditions were as follows: capillary voltage, 5000 V; skimmer voltage, −40.0 V; capillary exit, −124.8 V; Oct1DC, −12.00 V; Oct2DC, 1.70 V; trap drive level, 55.2; OctRF, 150.0 Vpp; lens 1, 5.0 V; lens 2, 60.0 V. MSn experiments were carried out by isolation and fragmentation of detected ions.

2.6. Analysis of ABG and I3C

2.6.1. Extraction

For the extraction of ABG and I3C a slightly modified procedure from Ciska et al. was used (Ciska & Pathak, 2004). Approximately 20 g of cabbage and 2 g of NaCl were homogenised in an Ultra-Turrax homogeniser (IKA-T-25 basic). The homogenised sample was extracted with acetone (3 × 20 mL). The excess acetone was removed in vacuo to 10 mL of final volume. The concentrate was extracted with ethyl acetate (3 × 20 mL, instead of two times from the Ciska et al. procedure). The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and the solvent was removed. The residue was dissolved in acetonitrile, filtered (PTFE filter, Chromafil 1.0/0.2 μM) and made up to a final volume of exactly 5 mL. The extracts were stored at −80 °C until analysis.

2.6.2. HPLC-MS analysis

Quantification was carried out with Agilent 1100 Series HPLC/DAD System with Nucleodur 100–5-C18 ec column (250 mm × 4 mm with a guard column) from Macherey–Nagel. An injection volume of 5 μL and flow rate of 0.4 mL/min was used and the column temperature was maintained at 20 °C. The mobile phase consisted of 0.05% TFA in water as eluent A and 100% acetonitrile as eluent B. The gradient elution started with 20% of eluent B for the first 20 min, increasing to 30% eluent B till 25 min and further increasing to 99% eluent B until 27 min and then decreased to 20% eluent B at 32 min. Compounds were detected and quantified by UV absorption at 280 nm. Quantification was achieved by individual calibration curves (external) from the standard compounds mixture containing ABG and I3C (limit of detection 0.002 mg/mL).

2.6.3. HPLC–ESI-MSn analysis

MS conditions were as follows. Nebuliser pressure was 40 psi and the nitrogen flow rate was 8 L/min at a drying temperature of 350 °C. Mass scans were performed from m/z 50 to 2000 in positive ionisation mode. The detection conditions were as follows: capillary voltage, 5000 V; skimmer voltage, −40.0 V; capillary exit, −113.9 V; Oct1DC, −12.00 V; Oct2DC, 1.70 V; trap drive level, 48.3; OctRF, 150.0 Vpp; lens 1, −5.0 V; lens 2, −60.0 V.

2.6.4. Synthesis of ABG

The synthesis was carried out according to Zielinska, Frias, Penas, Valeverde, & Zielinski (2012). Briefly, 880 mg of ascorbic acid (5.0 mmol) were dissolved in 40 mL of Mcllvaine buffer (pH 4). To this 740 mg of I3C (5.0 mmol) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature under nitrogen for 1 h in the dark, filtered, washed three times with 20 mL of ethyl ether and extracted four times with 25 mL of ethyl acetate. The combined ethyl acetate layers were dried over anhydrous Na2SO4. Evaporation of the solvent yielded 793 mg of the final product ABG. 1H NMR (200 MHz, MeOD) δ: 7.61 (d, 1 H), 7.31 (d, 1 H), 7.20 (s, 1 H), 7.06 (t, 1 H), 6.96 (t, 1 H), 4.19–4.00 (m, 3 H), 3.79 (s, 1 H), 3.44–3.18 (m, 2H) ppm.

2.7. Analysis of I3A

2.7.1. Extraction

Cabbage (50 g) was placed into 200 mL of boiling water and stirred for 5 min. The mixture was cooled to room temperature and homogenised with Ultra-Turrax. To this mixture 50 mL of dichloromethane were added and stirred for 5 min at room temperature. The sauerkraut was filtered off from the solution and the organic layer was separated. The aqueous layer was extracted four times with 25 mL dichloromethane. The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4. The excess solvent was removed under vacuum and re-dissolved with dichloromethane to make up to a total volume of 5 mL and stored at −80 °C until further analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5.3 การ HPLC – ESI-MSn วิเคราะห์สำหรับการวิเคราะห์คุณภาพของ glucosinolates ระบบ HPLC ได้ควบคู่ไป Agilent 1100 ชุด LC/มือ จับ ด้วยวิธีพ่นละอองไฟฟ้า ionisation เงื่อนไข HPLC ได้เหมือนกับที่อธิบายไว้ข้างต้น ความดัน nebuliser มี 60 psi และอัตราการไหลของไนโตรเจนเป็น 10 L/min อบแห้งอุณหภูมิ 350 องศาเซลเซียส สแกนโดยรวมดำเนินจาก m/z 120-1000 ในโหมด ionisation ลบ มีใช้ฮีเลียมเป็นก๊าซชนสำหรับการกระจายตัวของของสารการแยกจับไอออน ตรวจสอบเงื่อนไขได้ดังนี้: แรงเส้นเลือดฝอย 5000 V แรงดันแหล่ง −40.0 V ออกจากเส้นเลือดฝอย −124.8 V Oct1DC, −12.00 V Oct2DC, 1.70 V ตรวจจับไดรฟ์ระดับ 55.2 OctRF, 150.0 Vpp เลนส์ 1, 5.0 V เลนส์ 2, 60.0 V. MSn ทดลองถูกดำเนินการ โดยแยกและเรียงพบกัน2.6 การวิเคราะห์ของ ABG และ I3C2.6.1 การสกัดการสกัดของ ABG และ I3C กระบวนการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยจาก Ciska et al. ถูกใช้ (Ciska & Pathak, 2004) ประมาณ 20 กรัมของกะหล่ำปลีและ 2 กรัมของ NaCl มี homogenised ในตัวอัลตร้า Turrax homogeniser (basic IKA-T-25) ตัวอย่าง homogenised ที่สกัด ด้วยอะซิโตน (3 × 20 มล.) อะซีโตนส่วนเกินถูกเอาออกใน vacuo ไป 10 mL ของเล่มสุดท้าย เข้มข้นที่สกัด ด้วยเอทิล acetate (3 × 20 mL แทนสองครั้งจากกระบวนการ Ciska et al.) ชั้นอินทรีย์รวมได้แห้งมากกว่า Na2SO4 ได และตัวทำละลายถูกเอาออก สารตกค้างถูกละลายใน acetonitrile กรอง (กรองไฟเบอร์ Chromafil 1.0/0.2 μM) และทำจนถึงเล่มสุดท้ายของตรง 5 mL บางส่วนถูกเก็บไว้ที่ −80 ° C จนถึงการวิเคราะห์2.6.2 การ HPLC-MS วิเคราะห์นับได้ดำเนิน ด้วยระบบ HPLC/พ่อ ชุด Agilent 1100 Nucleodur ec 100 – 5-C18 คอลัมน์ (250 มม. × 4 มม.กับคอลัมน์ยาม) จาก Macherey – Nagel ใช้ปริมาณการฉีดของ 5 μL และกระแสอัตรา 0.4 mL/min และอุณหภูมิคอลัมน์ถูกรักษาไว้ที่ 20 องศาเซลเซียส เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 0.05% TFA น้ำเป็น eluent A และ acetonitrile 100% เป็น eluent B. Elution ไล่ระดับเริ่มต้น 20% ของ eluent B 20 นาทีแรก เพิ่มการ eluent 30% B จนถึงนาทีที่ 25 และเพิ่มเติมการ eluent 99% B จนถึงนาทีที่ 27 แล้ว ลดไป 20% eluent B ที่ 32 นาทีสารถูกตรวจพบ และ quantified โดยการดูดซึมรังสียูวีที่ 280 nm นับสำเร็จ โดยโค้งเทียบแต่ละที่ (ภายนอก) จากส่วนผสมของสารมาตรฐาน ABG และ I3C (ข้อจำกัดของการตรวจหารายการ 0.002 mg/mL)2.6.3 การ HPLC – ESI-MSn วิเคราะห์MS เงื่อนไขได้ดังนี้ Nebuliser ดัน 40 psi และอัตราการไหลของไนโตรเจนคือ 8 L/min อบแห้งอุณหภูมิ 350 องศาเซลเซียส สแกนโดยรวมถูกทำจาก m/z 50-2000 ในโหมด ionisation บวก ตรวจสอบเงื่อนไขได้ดังนี้: แรงเส้นเลือดฝอย 5000 V แรงดันแหล่ง −40.0 V ออกจากเส้นเลือดฝอย −113.9 V Oct1DC, −12.00 V Oct2DC, 1.70 V ตรวจจับไดรฟ์ระดับ 48.3 OctRF, 150.0 Vpp เลนส์ 1, −5.0 V เลนส์ 2, −60.0 V2.6.4 การสังเคราะห์ของ ABGThe synthesis was carried out according to Zielinska, Frias, Penas, Valeverde, & Zielinski (2012). Briefly, 880 mg of ascorbic acid (5.0 mmol) were dissolved in 40 mL of Mcllvaine buffer (pH 4). To this 740 mg of I3C (5.0 mmol) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature under nitrogen for 1 h in the dark, filtered, washed three times with 20 mL of ethyl ether and extracted four times with 25 mL of ethyl acetate. The combined ethyl acetate layers were dried over anhydrous Na2SO4. Evaporation of the solvent yielded 793 mg of the final product ABG. 1H NMR (200 MHz, MeOD) δ: 7.61 (d, 1 H), 7.31 (d, 1 H), 7.20 (s, 1 H), 7.06 (t, 1 H), 6.96 (t, 1 H), 4.19–4.00 (m, 3 H), 3.79 (s, 1 H), 3.44–3.18 (m, 2H) ppm.2.7. Analysis of I3A2.7.1. ExtractionCabbage (50 g) was placed into 200 mL of boiling water and stirred for 5 min. The mixture was cooled to room temperature and homogenised with Ultra-Turrax. To this mixture 50 mL of dichloromethane were added and stirred for 5 min at room temperature. The sauerkraut was filtered off from the solution and the organic layer was separated. The aqueous layer was extracted four times with 25 mL dichloromethane. The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4. The excess solvent was removed under vacuum and re-dissolved with dichloromethane to make up to a total volume of 5 mL and stored at −80 °C until further analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5.3 การวิเคราะห์ HPLC-ESI-MSN สำหรับการวิเคราะห์เชิงคุณภาพของ glucosinolates ระบบ HPLC ได้เป็นคู่กับ Agilent 1100 ชุด LC / กับดักเอ็มเอสที่มี Ionisation electrospray เงื่อนไข HPLC เป็นเช่นเดียวกับที่กล่าวไว้ข้างต้น ความดัน Nebuliser เป็น 60 ปอนด์ต่อตารางนิ้วและอัตราการไหลของไนโตรเจน 10 ลิตร / นาทีที่อุณหภูมิอบแห้ง 350 ° C สแกนมวลได้ดำเนินการจากม. / z 120-1000 ในโหมด Ionisation เชิงลบ ฮีเลียมถูกใช้เป็นก๊าซชนสำหรับการกระจายตัวของสารที่แยกอยู่ในกับดักไอออน เงื่อนไขการตรวจสอบมีดังนี้แรงดันของเส้นเลือดฝอย, 5000 V; แรงดันไฟฟ้าพาย, -40.0 v; ออกจากหลอดเลือดฝอย -124.8 v; Oct1DC, -12.00 v; Oct2DC, 1.70 V; กับดักระดับไดรฟ์ 55.2; OctRF, 150.0 Vpp; เลนส์ 1, 5.0 V; เลนส์ 2 60.0 โวลต์การทดลอง MSN ได้ดำเนินการโดยการแยกและการกระจายตัวของไอออนตรวจพบ. 2.6 การวิเคราะห์และ ABG I3C 2.6.1 สกัดสำหรับการสกัด ABG I3C และขั้นตอนการแก้ไขเล็กน้อยจาก Ciska et al, ถูกนำมาใช้ (Ciska และ Pathak, 2004) ประมาณ 20 กรัมของกะหล่ำปลีและ 2 กรัมโซเดียมคลอไรด์ถูก homogenised ในอัลตร้า Turrax homogeniser (IKA-T-25 พื้นฐาน) ตัวอย่าง homogenised ถูกสกัดด้วยอะซิโตน (3 × 20 มล) อะซีโตนส่วนที่เกินจะถูกลบออกในสุญญากาศ 10 มิลลิลิตรเล่มสุดท้าย สมาธิที่ถูกสกัดด้วยเอทิลอะซิเตท (3 × 20 มลแทนของทั้งสองครั้งจาก Ciska et al, ขั้นตอน.) ชั้นรวมอินทรีย์แห้งไม่มีน้ำมากกว่า Na2SO4 และตัวทำละลายจะถูกลบออก ที่เหลือก็เลือนหายไปใน acetonitrile กรอง (กรอง PTFE, Chromafil 1.0 / 0.2 ไมครอน) และทำขึ้นเป็นเล่มสุดท้ายของว่า 5 มิลลิลิตร สารสกัดถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนถึงการวิเคราะห์. 2.6.2 HPLC-MS การวิเคราะห์ปริมาณได้ดำเนินการกับAgilent 1100 ซีรีส์ HPLC / DAD ระบบด้วย Nucleodur 100-5-C18 ec คอลัมน์ (250 มมมม× 4 กับคอลัมน์ยาม) จาก Macherey-แจคกี้ ปริมาณการฉีด 5 ไมโครลิตรและอัตราการไหล 0.4 มิลลิลิตร / นาทีถูกนำมาใช้และอุณหภูมิคอลัมน์ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 20 ° C เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 0.05% TFA ในน้ำเป็นตัวชะ A และ acetonitrile 100% เป็นตัวชะบีชะลาดเริ่มต้นด้วย 20% ของตัวชะ B สำหรับครั้งแรก 20 นาทีเพิ่มขึ้นถึง 30% B ชะจนถึง 25 นาทีและต่อไปเพิ่มขึ้น 99% ชะ B จนกว่า 27 นาทีแล้วลดลงถึง 20% B ชะที่ 32 นาที สารประกอบที่ถูกตรวจพบและปริมาณรังสียูวีโดยการดูดซึมที่ 280 นาโนเมตร ปริมาณก็ประสบความสำเร็จโดยการสอบเทียบแต่ละเส้นโค้ง (ภายนอก) จากส่วนผสมของสารที่มีมาตรฐานและ ABG I3C (ขีด จำกัด ของการตรวจสอบ 0.002 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร). 2.6.3 HPLC-ESI-MSN วิเคราะห์สภาพMS มีดังนี้ Nebuliser ดัน 40 ปอนด์ต่อตารางนิ้วเป็นและอัตราการไหลของไนโตรเจน 8 ลิตร / นาทีที่อุณหภูมิอบแห้ง 350 ° C สแกนมวลได้ดำเนินการจากม. / z 50-2000 ในโหมด Ionisation บวก เงื่อนไขการตรวจสอบมีดังนี้แรงดันของเส้นเลือดฝอย, 5000 V; แรงดันไฟฟ้าพาย, -40.0 v; ออกจากหลอดเลือดฝอย -113.9 v; Oct1DC, -12.00 v; Oct2DC, 1.70 V; กับดักไดรฟ์ระดับ 48.3; OctRF, 150.0 Vpp; เลนส์ 1, -5.0 V; เลนส์ 2 -60.0 V. 2.6.4 การสังเคราะห์ ABG การสังเคราะห์ได้ดำเนินการตาม Zielinska, Frias, Penas, Valeverde และ Zielinski (2012) สั้น ๆ , 880 มิลลิกรัมวิตามินซี (5.0 มิลลิโมล) ถูกกลืนหายไปใน 40 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์ Mcllvaine (pH 4) นี้ 740 มิลลิกรัม I3C (5.0 มิลลิโมล) ถูกเพิ่ม ผสมปฏิกิริยาถูกกวนที่อุณหภูมิห้องภายใต้ไนโตรเจนเป็นเวลา 1 ชั่วโมงในที่มืดกรองล้างสามครั้งมี 20 มิลลิลิตรเอทิลอีเทอร์และสกัดสี่ครั้งมี 25 มิลลิลิตรเอทิลอะซีเต ชั้นเอทิลอะซิเตทรวมแห้งไม่มีน้ำมากกว่า Na2SO4 การระเหยของตัวทำละลายให้ผล 793 mg ของผลิตภัณฑ์สุดท้าย ABG 1H NMR (200 MHz, MeOD) δ: 7.61 (ง 1 H), 7.31 (ง 1 H), 7.20 (s 1 H), 7.06 (t 1 H), 6.96 (t 1 H) 4.19-4.00 (m 3 H), 3.79 (s 1 H), 3.44-3.18 (m, 2H) ppm. 2.7 การวิเคราะห์ I3A 2.7.1 สกัดกะหล่ำปลี (50 กรัม) ถูกวางลงใน 200 มิลลิลิตรของน้ำเดือดและขยับเป็นเวลา 5 นาที ส่วนผสมที่ถูกระบายความร้อนที่อุณหภูมิห้องและ homogenised กับอัลตร้า Turrax ส่วนผสมนี้ 50 มิลลิลิตรไดคลอโรมีเทนมีการเพิ่มและขยับเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง กะหล่ำปลีดองถูกกรองออกจากการแก้ปัญหาและชั้นอินทรีย์ที่ถูกแยกออกจากกัน ชั้นน้ำสกัดสี่ครั้งด้วยไดคลอโรมีเทน 25 มิลลิลิตร ชั้นรวมอินทรีย์แห้งไม่มีน้ำมากกว่า Na2SO4 ตัวทำละลายส่วนเกินจะถูกลบออกภายใต้สูญญากาศและใหม่ละลายด้วยไดคลอโรมีเทนที่จะทำให้ได้ถึงปริมาณ 5 มิลลิลิตรและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนถึงการวิเคราะห์ต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5.3 . การพัฒนาการวิเคราะห์ HPLC และ MSN

สำหรับการวิเคราะห์เชิงคุณภาพของกลูโคซิโนเลต ระบบ HPLC ได้คู่กับ Agilent 1100 ชุด LC / เอ็มเอสกับดักด้วยวิธีพ่นละอองไฟฟ้า ionisation . เงื่อนไขที่ 2 คือเดียวกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้น โดย Nebuliser ความดัน 60 psi และไนโตรเจนอัตราการไหลเท่ากับ 10 ลิตร / นาที ที่อุณหภูมิ 350 องศา อบแห้งสแกนได้จากมวล m / z 120 , 000 ในโหมด ionisation ลบ ฮีเลียมถูกใช้เป็นก๊าซสำหรับการชนกันของของสารประกอบที่แยกได้ในไอออนกับดัก เงื่อนไขการตรวจสอบดังนี้ : capillary แรงดัน 5 V ; Skimmer แรงดันไฟฟ้า , − 40.0 V ; C ออก 124.8 −− oct1dc 12.00 V , V ; ; oct2dc 1.70 V ; ขับ , กับดักระดับ 55.2 ; octrf 150.0 VPP , เลนส์ 1 , 5.0 V ; ;