2.6. Time-kill study of the ethanol

2.6. Time-kill study of the ethanol extract of R. tomentosa and
rhodomyrtone on P. acnes
Time-kill kinetic experiment of the extracts was performed in
supplemented BHI broth. An inoculum of 2  106 CFU/mL of
growing cultures was added to the medium supplemented with
0.5, 1, 2, and 4MIC of the extract and incubated at 37 C under
anaerobic condition. The viable counts were determined by drop
plate method. Briefly, the samples were collected at time intervals
and diluted in serial 10-fold dilution. Each dilution was dropped on
supplemented BHI agar plate. Control tube with 1% DMSO was
incubated under the same condition. The experiment was carried
out in duplicate and the graphs were plotted in log number of the
organisms versus time intervals.
2.7. Cytotoxicity assay of the ethanol extract of R. tomentosa and
rhodomyrtone against human dermal fibroblast
Human dermal fibroblast cells were grown in Dulbecco’s
Modified Eagle’s Medium (DMEM) supplemented with 10% fetal
bovine serum, 2 mM L-glutamine, 100 unit/mL penicillin and
100 ug/ml streptomycin. The cells were incubated at 37 C in a fully
humidified, 5% CO2 atmosphere. The ethanol extract and rhodomyrtone
were dissolved in DMSO to the concentration of 100 and
20 mg/mL, respectively and then serially two-fold diluted in the
culture medium. The extracts were added to the cell culture and
incubated for 24 h at 37 C under 5% CO2 atmosphere. After the
medium with the extracts was removed, the cells were reincubated
in fresh medium for 24 h. The cell viability was determined
using MTT assay in which 3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-
diphenyl tetrazolium bromide (MTT) is reduced to formazan. MTT
(5 mg/mL in PBS) was added to each well and incubated for 4 h. The
formazan crystal was dissolved in DMSO. The optical density was
measured at the wavelength of 570 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การแยกศึกษาฆ่าเวลาเอทานอลของอาร์ tomentosa และrhodomyrtone บนสิว P.ทำการทดลองสารสกัดจากเดิม ๆ ในฆ่าเวลาเสริมซุป BHI การ inoculum 2 106 CFU/mL ของวัฒนธรรมการเจริญเติบโตได้เพิ่มสื่อเสริมด้วย0.5, 1, 2 และ 4MIC ของการดึงข้อมูล และ incubated ที่ 37 C ภายใต้สภาพไม่ใช้ออกซิเจน นับได้ถูกกำหนด โดยหล่นแผ่นวิธีการ ตัวอย่างรวบรวมในช่วงเวลาสั้น ๆและแตกออกในอนุกรม 10-fold เจือจาง เจือจางแต่ละถูกตัดทิ้งในเสริมแผ่น agar BHI ควบคุมหลอด 1% DMSO มีincubated ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน ทำการทดลองออกซ้ำและกราฟที่พล็อตในบันทึกจำนวนสิ่งมีชีวิตเมื่อเทียบกับช่วงเวลา2.7 ทดสอบ cytotoxicity ของสารสกัดเอทานอลของอาร์ tomentosa และrhodomyrtone กับ fibroblast ผิวหนังมนุษย์เซลล์ fibroblast ผิวหนังมนุษย์ได้เติบโตในของดุลเบกโกปรับเปลี่ยนของอีเกิ้ลขนาดกลาง (DMEM) เสริม ด้วย 10% และทารกในครรภ์เซรั่มวัว 2 มม. L glutamine ยาเพนนิซิลลิน 100 หน่วย/มล. และstreptomycin ยูจี 100 ml เซลล์ถูก incubated ที่ 37 C ในตัวอย่างเต็มบรรยากาศ 5% CO2 humidified สารสกัดเอทานอลและ rhodomyrtoneถูกละลายใน DMSO เพื่อความเข้มข้น 100 และ20 mg/mL ตามลำดับแล้ว serially พับสองยกเว้นในการวัฒนธรรมสื่อ เพิ่มสารสกัดที่การเพาะเลี้ยงเซลล์ และincubated ใน 24 ชมที่ 37 C ภายใต้ 5% CO2 บรรยากาศ หลังจากกลางกับบางส่วนถูกลบ เซลล์ถูก reincubatedในกลางสดใน 24 ชม กำหนดชีวิตเซลล์ใช้ MTT assay ใน 3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-ใดฟีนิลได tetrazolium โบรไมด์ (MTT) จะลดลงเป็น formazan MTT(5 mg/mL ใน PBS) ถูกเพิ่มเข้ามาสำหรับ 4 h. incubated และดีแต่ละคริสตัล formazan ถูกละลายใน DMSO มีความหนาแน่นออปติคอลวัดที่ความยาวคลื่นของ 570 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 การศึกษาเวลาฆ่าของสารสกัดเอทานอลของอาร์ tomentosa และ
rhodomyrtone บน P. สิว
ฆ่าเวลาการทดลองเกี่ยวกับการเคลื่อนไหวของสารสกัดที่ได้ดำเนินการใน
การเสริมน้ำซุป BHI หัวเชื้อของ 2 หรือไม่? 106 โคโลนี / มิลลิลิตรของ
วัฒนธรรมที่เจริญเติบโตถูกบันทึกอยู่ในสื่อเสริมที่มี
0.5, 1, 2 และ 4MIC ของสารสกัดและบ่มที่อุณหภูมิ 37 C ภายใต้
สภาวะไร้อากาศ นับทำงานได้ถูกกำหนดโดยการลดลง
วิธีการแผ่น สั้น ๆ เก็บตัวอย่างในช่วงเวลา
และเจือจางในอนุกรมเจือจาง 10 เท่า เจือจางแต่ละคนก็หล่นลงบน
แผ่นเสริมอาหารเลี้ยงเชื้อ BHI หลอดควบคุมด้วย DMSO 1% ได้รับการ
บ่มภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน การทดลองดำเนิน
การในที่ซ้ำกันและกราฟที่ถูกพล็อตในจำนวนเข้าสู่ระบบของ
สิ่งมีชีวิตเมื่อเทียบกับช่วงเวลา.
2.7 การทดสอบความเป็นพิษของสารสกัดเอทานอลของอาร์ tomentosa และ
rhodomyrtone กับ fibroblast ผิวหนังของมนุษย์
เซลล์ fibroblast ผิวหนังมนุษย์ได้รับการปลูกใน Dulbecco ของ
การปรับเปลี่ยนของนกอินทรีขนาดกลาง (DMEM) เสริมด้วย 10% ของทารกในครรภ์
ในซีรั่มวัว 2 มิลลิ L-glutamine 100 หน่วย / penicillin มิลลิลิตรและ
100 ไมโครกรัม / มล streptomycin เซลล์ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสอย่างเต็มที่
ความชื้นบรรยากาศ CO2 5% สารสกัดเอทานอลและ rhodomyrtone
ถูกละลายใน DMSO กับความเข้มข้นของ 100 และ
20 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรตามลำดับแล้วเป็นลำดับสองเท่าเจือจางใน
อาหารเลี้ยงเชื้อ สารสกัดถูกเพิ่มเข้ามาในการเพาะเลี้ยงเซลล์และ
บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 C ภายใต้บรรยากาศ CO2 5% หลังจากที่
สื่อด้วยสารสกัดจากถูกลบออกเซลล์ถูก reincubated
ในสื่อสดเป็นเวลา 24 ชั่วโมง มีชีวิตเซลล์ถูกกำหนด
โดยใช้การทดสอบ MTT ที่ 3 (4,5-dimetylthiazol-2-YL) -2,5-
diphenyl tetrazolium โบรไมด์ (MTT) จะลดลงไป formazan MTT
(5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรในพีบีเอส) ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดีและบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง
คริสตัล formazan ถูกละลายใน DMSO ความหนาแน่นของออปติคอลได้รับการ
วัดที่ความยาวคลื่น 570 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 เวลาฆ่าการศึกษาของสารทั้ง อาร์ และ rhodomyrtone P . acnes บน tomentosa

เวลาฆ่าการทดลองจลนศาสตร์ของการเสริมสารสกัดใน BHI broth
. เป็นเชื้อ 2  106 cfu / ml
เติบโตวัฒนธรรมถูกเพิ่มลงในอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วย
0.5 , 1 , 2 , และ 4mic ของสารสกัดและบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส
ภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจน นับได้ถูกกำหนดโดยปล่อย
แบบแผ่น สั้นจำนวน ในช่วงเวลา และเจือจาง 10 เท่า
แบบเจือจาง แต่ละระดับถูกทิ้งอยู่บน
อาหาร BHI วุ้นแผ่น ควบคุมหลอดด้วย 1% DMSO เป็น
บ่มภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน ทำการ
ออกซ้ำและกราฟกำลังวางแผนในหมายเลขบันทึกของสิ่งมีชีวิตเมื่อเทียบกับช่วงเวลา
.
2.7 .การทดสอบพิษของสารทั้งของ tomentosa rhodomyrtone มนุษย์กับ dermal fibroblast และ

มนุษย์เซลล์เนื้อเยื่อเกี่ยวพันซึ่งปลูกในดัลเบโค่ของ
แก้ไขนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem ) เสริมด้วย 10% fetal bovine serum
2 มม. Glutamine , 100 หน่วย / มล.
เพนนิซิลลิน และ streptomycin 100 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร . เซลล์ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ในอย่างเต็มที่
humidified , 5% CO2 ในชั้นบรรยากาศสารสกัดเอทานอล และ rhodomyrtone
ถูกละลายใน DMSO ที่ความเข้มข้น 100 และ
20 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ และเป็นสองเท่าเจือจางใน
วัฒนธรรมสื่อ สารสกัดถูกเพิ่มไปยังเซลล์วัฒนธรรมและ
บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสภายใต้ 5% CO2 ในชั้นบรรยากาศ หลังจาก
ขนาดกลางด้วยสารสกัดถูกกำจัด เซลล์ก็ reincubated
ปานกลาง สด 24 ชั่วโมงเซลล์สามารถถูกกำหนดโดยใช้วิธี MTT
ที่ 3 - ( 4,5-dimetylthiazol-2-yl ) - 2 , 5 -
อีเธอร์ tetrazolium โบรไมด์ ( MTT ) จะลดลงถึงปฏิบัติการ . MTT
5 mg / ml ใน PBS ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละ และบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง
ปฏิบัติการคริสตัลละลายใน DMSO . ความหนาแน่นของแสง คือ วัดที่ความยาวคลื่น

570 นาโนเมตร