1. A modified microorganism from t

1. A modified microorganism from the family of Pasteurellaceae having an increased
expression and/or increased activity of the enzyme that is encoded by the a/aD-gene
5 which encodes the alanine ดีไฮโดรจีเนส EC 1.4.1.1,
โดยที่ the increased expression and/or activity of the alaD-gene compared to its
ไวด์ไทป์ is achieved
a) by inserting an expression construct expressing the alaD-gene into the genome
of the modified microorganism,
10 b) by increasing the copy number of the alaD-gene,
c) a stronger promotor compared to the ไวด์ไทป์ of the alaD-gene,
d) by increasing the activity of genes upregulating the activity of the alaD-gene or
by decreasing the activity of genes down-regulating the activity of the alaD-gene.

15 2. Modified microorganism according to ข้อถือสิทธิ 1 having a 16S rDNA of SEQ ID NO: 1 or
a sequence, which shows a ความเหมือนของลำดับ of อย่างน้อย 96% with SEQ ID NO: 1 and/or having a 23S rDNA of SEQ ID NO: 2 or a sequence, which shows a ความเหมือนของลำดับ of อย่างน้อย 96% with SEQ ID NO: 2.

20 3. Modified microorganism according ข้อถือสิทธิ 1 or ข้อถือสิทธิ 2, โดยที่ the the modified
microorganism belongs to the genus Basfia.

4. Modified microorganism according to ข้อถือสิทธิ 3, โดยที่ the the modified microorganism
belongs to the species Basfia succinicproducens.
25
5. Modified microorganism according to ข้อถือสิทธิ 4, โดยที่ the ไวด์ไทป์ from which the
modified microorganism has been derived is Basfia succiniciproducens strain DD1 as deposited under DSM 18541 with the DSMZ, Germany.

30 6. Modified microorganism according to anyone of ข้อถือสิทธิ 1 to 5, โดยที่ the a/aD-gene
ประกอบรวมด้วย a nucleic acid selected from the group consisting of:
a) nucleic acid having the ลำดับนิวคลีโอไทด์ of SEQ ID NO: 3;
b) nucleic acid encoding the ลำดับอะมิโนแอซิด of SEQ ID NO: 4;
c) nucleic acids which are อย่างน้อย 80% identical to the nucleic acid of a) or b), the
35 identy being the identity over the total length of the nucleic acids of a) or b); and
d) nucleic acids encoding an ลำดับอะมิโนแอซิด which is อย่างน้อย 60% identical
to the ลำดับอะมิโนแอซิด encoded by the nucleic acid of a) or b), the identy being the identity over the total length of ลำดับอะมิโนแอซิด encoded by the nucleic acids of a) or b)
7. Modified microorganism according to anyone of ข้อถือสิทธิ 1 to 6, โดยที่ the
microorganism further has
a) a reduced ไพรูเวต ฟอร์เมต ไลเอส activity,
b) a reduced lactate ดีไฮโดรจีเนส activity,
5 c) a reduced phosphenolไพรูเวต คาร์บอกซีlase activity or
d) any combination thereof.

8. Modified microorganism according to anyone of ข้อถือสิทธิ 1 to 7, โดยที่ the
microorganism ประกอบรวมด้วย:
10 a) a deletion of the /dhA-gene or อย่างน้อย a part thereof, a deletion of a regulatory
element of the /dhA-gene or อย่างน้อย a part thereof or an introduction of อย่างน้อย
one deleterious mutation into the /dhA-gene;
b) a deletion of the pflD-gene or อย่างน้อย a part thereof, a deletion of a regulatory
element of the pflD-gene or อย่างน้อย a part thereof or an introduction of อย่างน้อย
15 one deleterious mutation into the pflD-gene;
c) a deletion of the pflA-gene or อย่างน้อย a part thereof, a deletion of a regulatory
element of the pflA-gene or อย่างน้อย a part thereof or an introduction of อย่างน้อย
one deleterious mutation into the pflA-gene;
d) a deletion of the pckA-gene or อย่างน้อย a part thereof, a deletion of a regulatory
20 element of the pckA-gene or อย่างน้อย a part thereof or an introduction of อย่างน้อย
one deleterious mutation into the pckA-gene; or
e) any combination thereof.

9. Modified microorganism according to anyone of ข้อถือสิทธิ 1 to 8, โดยที่ the /dhA-gene
25 ประกอบรวมด้วย a nucleic acid selected from the group consisting of:
a) nucleic acid having the ลำดับนิวคลีโอไทด์ of SEQ ID NO: 5;
b) nucleic acid encoding the ลำดับอะมิโนแอซิด of SEQ ID NO: 6;
c) nucleic acid which are อย่างน้อย 80% identical to the nucleic acid of a) or b), the
identy being the identity over the total length of the nucleic acids of a) or b); and
30 d) nucleic acids encoding an ลำดับอะมิโนแอซิด which is อย่างน้อย 80% identical
to the ลำดับอะมิโนแอซิด encoded by the nucleic acid of a) or b), the identy
being the identity over the total length of ลำดับอะมิโนแอซิด encoded by the
nucleic acids of a) or b).

35 10. Modified microorganism according to anyone of ข้อถือสิทธิ 1 to 9,
โดยที่ the pflD-gene ประกอบรวมด้วย a nucleic acid selected from the group consisting of:
a) nucleic acid having the ลำดับนิวคลีโอไทด์ of SEQ ID NO: 7;
b) nucleic acid encoding the ลำดับอะมิโนแอซิด of SEQ ID NO: 8;
c) nucleic acids which are อย่างน้อย 80% identical to the nucleic acid of a) or b), the
40 identy being the identity over the total length of the nucleic acids of a) or b); and
d) nucleic acids encoding an ลำดับอะมิโนแอซิด which is อย่างน้อย 80% identical
to the ลำดับอะมิโนแอซิด encoded by the nucleic acid of a) or b), the identy
being the identity over the total length of ลำดับอะมิโนแอซิด encoded by the nucleic aci

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1.จุลินทรีย์ที่ปรับเปลี่ยนจากตระกูล Pasteurellaceae ที่มีการเพิ่มขึ้นนิพจน์หรือเพิ่มกิจกรรมของเอนไซม์ที่ถูกเข้ารหัส โดยที่ a/โฆษณา ยีน5 ซึ่งจแมปดีไฮโดรจีเนสอะลานีน EC 1.4.1.1โดยที่การเพิ่มนิพจน์และ/หรือกิจกรรมของยีน alaD เปรียบเทียบกับของทำไวด์ไทป์) โดยการใส่ นิพจน์สร้างแสดงยีน alaD เป็นกลุ่มของจุลินทรีย์เพื่อแก้ไข10 b) โดยการเพิ่มจำนวนสำเนา alaD-ยีนc) promotor ที่แข็งแกร่งเมื่อเทียบกับไวด์ไทป์ของ alaD-ยีนd) โดยเพิ่มกิจกรรมของยีน upregulating กิจกรรมของยีน alaD หรือโดยการลดกิจกรรมของยีนลงควบคุมกิจกรรมของยีน alaD15 2 จุลินทรีย์แก้ไขตามข้อถือสิทธิมี rDNA 16S ของเลขรหัสลำดับ 1:1 หรือลำดับ ซึ่งแสดงความเหมือนของลำดับของอย่างน้อย 96% ที่ไม่มีรหัสลำดับ: 1 / มี rDNA 23S ของลำดับ ID ไม่: 2 หรือลำดับ ซึ่งแสดงความเหมือนของลำดับของอย่างน้อย 96% ที่ไม่มีรหัสลำดับ: 220 3 จุลินทรีย์แก้ไขตามข้อถือสิทธิ 1 หรือข้อถือสิทธิ 2 โดยที่ในการปรับเปลี่ยนจุลินทรีย์เป็นพืชสกุล Basfia4. แก้ไขจุลินทรีย์ตามข้อถือสิทธิ 3 โดยที่ยังแก้ไขเป็นพันธุ์ Basfia succinicproducens255. ปรับเปลี่ยนจุลินทรีย์ตามข้อถือสิทธิ 4 โดยที่ไวด์ไทป์ซึ่งจะได้รับมาแก้ไขยังเป็นสายพันธุ์ Basfia succiniciproducens DD1 เป็นฝากใต้ DSM 18541 ด้วย DSMZ เยอรมนี30 6 จุลินทรีย์ปรับเปลี่ยนตามคนข้อถือสิทธิ 1-5 โดยที่ที่เป็น/โฆษณายีนกรดนิวคลีอิกที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยประกอบรวมด้วย:ก) กรดนิวคลีอิกมีลำดับนิวคลีโอไทด์ของเลขลำดับ ID: 3ขกรดนิวคลีอิกเข้าลำดับอะมิโนแอซิดของเลขลำดับ ID: 4c) กรดนิวคลีอิกซึ่งเป็นอย่างน้อยเหมือนกับกรดนิวคลีอิกของ) หรือ b 80%), การ35 identy ถูกรหัสผ่านความยาวรวมของกรดนิวคลีอิกของ) หรือ b); และd) กรดนิวคลีอิกรหัสลำดับอะมิโนแอซิดซึ่งเป็นอย่างน้อย 60% เหมือนกันไปลำดับอะมิโนแอซิดเข้ารหัส โดยกรดนิวคลีอิกของ) หรือ b), identy ถูกรหัสผ่านความยาวรวมของลำดับอะมิโนแอซิดถูกเข้ารหัส โดยกรดนิวคลีอิกของตัว) หรือ b)7. แก้ไขจุลินทรีย์ตามข้อถือสิทธิ 1 กับ 6 โดยที่ทุกคนจุลินทรีย์เพิ่มเติมได้ก) การลดไพรูเวตฟอร์เมตไลเอสกิจกรรมขเป็น lactate ลดดีไฮโดรจีเนสกิจกรรมซี 5) กิจกรรมการ คาร์บอกซีlase phosphenolไพรูเวต ที่ลดลง หรือd) ชุดคำดังกล่าว8. จุลินทรีย์แก้ไขตามข้อถือสิทธิ 1 ถึง 7 โดยที่ทุกคนจุลินทรีย์ประกอบรวมด้วย:10 เป็น) ลบ /dhA-gene หรืออย่างน้อยส่วนใด การลบของการกำกับดูแลองค์ประกอบ /dhA-gene หรืออย่างน้อยส่วนดังกล่าว หรือแนะนำอย่างน้อยการกลายพันธุ์ร้ายหนึ่งใน /dhA-geneขการลบของยีน pflD หรืออย่างน้อยส่วนใด การลบของการกำกับดูแลองค์ประกอบของ ยีน pflD หรืออย่างน้อยส่วนดังกล่าว หรือแนะนำอย่างน้อย15 การกลายพันธุ์ร้ายหนึ่งใน pflD-ยีนค) ลบของยีน pflA หรืออย่างน้อยส่วนใด การลบของการกำกับดูแลองค์ประกอบของ ยีน pflA หรืออย่างน้อยส่วนดังกล่าว หรือแนะนำอย่างน้อยการกลายพันธุ์ร้ายหนึ่งใน pflA-ยีนd) การลบของยีน pckA หรืออย่างน้อยส่วนใด การลบของการกำกับดูแล20 องค์ประกอบของ ยีน pckA หรืออย่างน้อยส่วนดังกล่าว หรือแนะนำอย่างน้อยการกลายพันธุ์ร้ายหนึ่งใน pckA-ยีน หรืออี) หมาย9. แก้ไขจุลินทรีย์ตามข้อถือสิทธิ 1 8 โดยที่ /dhA-gene ทุกคนประกอบรวมด้วย 25 กรดนิวคลีอิกที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย:ก) กรดนิวคลีอิกมีลำดับนิวคลีโอไทด์ของลำดับ ID ไม่: 5ขกรดนิวคลีอิกเข้าลำดับอะมิโนแอซิดของเลขลำดับ ID: 6c) กรดนิวคลีอิกซึ่งเป็นอย่างน้อยเหมือนกับกรดนิวคลีอิกของ) หรือ b 80%), การidenty ถูกรหัสผ่านความยาวรวมของกรดนิวคลีอิกของ) หรือ b); และ30 d) กรดนิวคลีอิกรหัสลำดับอะมิโนแอซิดซึ่งเป็นอย่างน้อย 80% เหมือนกันไปลำดับอะมิโนแอซิดเข้ารหัส โดยกรดนิวคลีอิกของ) หรือ b), identyมีรหัสผ่านความยาวรวมของลำดับอะมิโนแอซิดที่ถูกเข้ารหัสโดยกรดนิวคลีอิกของ) หรือ b)35 10 จุลินทรีย์ปรับเปลี่ยนตามคนข้อถือสิทธิ 1 ถึง 9ประกอบรวมด้วยโดยที่ยีน pflD กรดนิวคลีอิกที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย:ก) กรดนิวคลีอิกมีลำดับนิวคลีโอไทด์ของเลขลำดับ ID: 7ขกรดนิวคลีอิกเข้าลำดับอะมิโนแอซิดของเลขลำดับ ID: 8c) กรดนิวคลีอิกซึ่งเป็นอย่างน้อยเหมือนกับกรดนิวคลีอิกของ) หรือ b 80%), การ40 identy ถูกรหัสผ่านความยาวรวมของกรดนิวคลีอิกของ) หรือ b); และd) กรดนิวคลีอิกรหัสลำดับอะมิโนแอซิดซึ่งเป็นอย่างน้อย 80% เหมือนกันไปลำดับอะมิโนแอซิดเข้ารหัส โดยกรดนิวคลีอิกของ) หรือ b), identyมีรหัสผ่านความยาวรวมของลำดับอะมิโนแอซิดที่ถูกเข้ารหัส โดย nucleic aci

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1. การปรับเปลี่ยนจุลินทรีย์จากครอบครัวของ Pasteurellaceae
ซึ่งมีเพิ่มขึ้นการแสดงออกและ/ หรือกิจกรรมที่เพิ่มขึ้นของเอนไซม์ที่ถูกเข้ารหัสโดยการ / โฆษณายีน
5 ซึ่ง encodes อะลานีนดีไฮโดรจีเนส EC 1.4.1.1,
โดยที่ การแสดงออกที่เพิ่มขึ้นและ / หรือกิจกรรมของ alaD
ยีนเมื่อเทียบกับของไวด์ไทป์คือความสำเร็จก)
โดยการใส่สร้างการแสดงออกแสดง alaD
ยีนเข้าไปในจีโนมของจุลินทรีย์แก้ไข
10 ข) โดยการเพิ่มจำนวนสำเนาของ alaD-ยีน
c) โปรโมเตอร์แข็งแกร่งเมื่อเทียบกับไวด์ไทป์ของ
alaD-ยีนง) โดยการเพิ่มกิจกรรมของยีน upregulating กิจกรรมของ alaD ยีนหรือโดยการลดกิจกรรมของยีนลงควบคุม กิจกรรมของ alaD ยีน. 15 2. จุลินทรีย์ดัดแปลงตามข้อถือสิทธิ 1 มี 16S rDNA ของ SEQ ID NO: 1 หรือลำดับซึ่งแสดงให้เห็นความเหมือนของลำดับของอย่างน้อย96% ด้วย SEQ ID NO: 1 และ / หรือมี 23S rDNA ของ SEQ ID NO: 2 หรือลำดับซึ่งแสดงให้เห็นความเหมือนของลำดับของอย่างน้อย 96% ด้วย SEQ ID NO: 2. 20 3. จุลินทรีย์ดัดแปลงตามข้อถือสิทธิ 1 หรือข้อถือสิทธิ 2 โดยที่การปรับเปลี่ยนจุลินทรีย์ที่เป็นสกุลBasfia ได้. 4 จุลินทรีย์ดัดแปลงตามข้อถือสิทธิที่ 3 โดยที่จุลินทรีย์ปรับเปลี่ยนเป็นสายพันธุ์Basfia succinicproducens. 25 5 จุลินทรีย์ดัดแปลงตามข้อถือสิทธิที่ 4 โดยที่ไวด์ไทป์จากการที่จุลินทรีย์ที่มีการปรับเปลี่ยนได้รับมาเป็นBasfia succiniciproducens ความเครียด DD1 เป็นที่วางไว้ตาม DSM 18541 กับ DSMZ เยอรมนี. 30 6. จุลินทรีย์ดัดแปลงตามคนของข้อ ถือสิทธิ 1 ถึง 5 โดยที่การ / โฆษณายีนประกอบรวมด้วยกรดนิวคลีอิกเลือกจากกลุ่มประกอบด้วยก) กรดนิวคลีอิกที่มีลำดับนิวคลีโอไทด์ของ SEQ ID NO: 3; ข) นิวคลีอิก กรดเข้ารหัสลำดับอะมิโนแอซิดของ SEQ ID NO: 4; c) กรดนิวคลีอิกที่มีอย่างน้อย 80% เหมือนกันกับกรดนิวคลีอิกของ) หรือข) ที่35 identy เป็นตัวตนมากกว่าความยาวทั้งหมดของ กรดนิวคลีอิกของ) หรือข); และง) กรดนิวคลีอิกเข้ารหัสลำดับอะมิโนแอซิดซึ่งเป็นอย่างน้อย 60% เหมือนกันกับลำดับอะมิโนแอซิดเข้ารหัสโดยกรดนิวคลีอิกของ) หรือข), identy เป็นตัวตนมากกว่ารวมที่ ความยาวของลำดับอะมิโนแอซิดเข้ารหัสโดยนิวคลีอิกของกรด) หรือข) 7 ดัดแปลงจุลินทรีย์ตามคนของข้อถือสิทธิ 1-6, โดยที่จุลินทรีย์ต่อไปมีก) ลดลงไพรูเวตฟอร์เมตไลเอสกิจกรรมข) ให้น้ำนมลดลงดีไฮโดรจีเนสกิจกรรม 5 c) ลดลง phosphenol ไพรูเวตคาร์บอกซีกิจกรรม Lase หรือง) รวมกันดังกล่าวใด ๆ . 8 จุลินทรีย์ดัดแปลงตามคนของข้อถือสิทธิ 1-7, โดยที่จุลินทรีย์ที่ประกอบรวมด้วย: 10 ก) ลบ / DHA ยีนหรืออย่างน้อยส่วนหนึ่งส่วนที่เป็นลบของการกำกับดูแลองค์ประกอบของ/ dhA- ยีนหรืออย่างน้อยส่วนหนึ่งของมันหรือการแนะนำของอย่างน้อยหนึ่งกลายพันธุ์อันตรายเข้าไปใน/ DHA-ยีนข) ลบ pflD ยีนหรืออย่างน้อยส่วนหนึ่งส่วนที่เป็นลบของการกำกับดูแลองค์ประกอบของpflD ยีน หรืออย่างน้อยบางส่วนหรือการแนะนำของอย่างน้อยต์15 หนึ่งกลายพันธุ์อันตรายเข้ามาใน pflD ยีน; c) ลบ pflA ยีนหรืออย่างน้อยส่วนหนึ่งส่วนที่เป็นลบของการกำกับดูแลองค์ประกอบของpflA ยีนหรือ อย่างน้อยบางส่วนหรือการแนะนำของอย่างน้อยหนึ่งกลายพันธุ์อันตรายเข้ามาในpflA-ยีนง) ลบ pckA ยีนหรืออย่างน้อยส่วนหนึ่งของมันลบของการกำกับดูแลองค์ประกอบ20 ของ pckA ยีนหรืออย่าง น้อยส่วนหนึ่งของมันหรือการแนะนำของอย่างน้อยหนึ่งกลายพันธุ์อันตรายเข้ามาในpckA ยีน; หรือจ) การรวมกันใด. 9 ดัดแปลงจุลินทรีย์ตามคนของข้อถือสิทธิ 1-8, โดยที่ / การ DHA ยีน25 ประกอบรวมด้วยกรดนิวคลีอิกเลือกจากกลุ่มประกอบด้วยก) กรดนิวคลีอิกที่มีลำดับนิวคลีโอไทด์ของ ID SEQ NO: 5; ข) กรดนิวคลีอิกเข้ารหัสลำดับอะมิโนแอซิดของ SEQ ID NO: 6; c) กรดนิวคลีอิกที่มีอย่างน้อย 80% เหมือนกันกับกรดนิวคลีอิกของ) หรือข) ที่identy เป็น ตัวตนมากกว่าความยาวทั้งหมดของนิวคลีอิกของกรด) หรือข); และวันที่ 30 ง) กรดนิวคลีอิกเข้ารหัสลำดับอะมิโนแอซิดซึ่งเป็นอย่างน้อย 80% เหมือนกันกับลำดับอะมิโนแอซิดเข้ารหัสโดยกรดนิวคลีอิกของ) หรือข), identy เป็นตัวตนในช่วงที่ ความยาวรวมของลำดับอะมิโนแอซิดเข้ารหัสโดยกรดนิวคลีอิกของ) หรือข). 35 10. จุลินทรีย์ดัดแปลงตามคนของข้อถือสิทธิ 1-9, โดยที่ pflD ยีนประกอบรวมด้วยกรดนิวคลีอิก เลือกจากกลุ่มประกอบด้วย: ก) กรดนิวคลีอิกที่มีลำดับนิวคลีโอไทด์ของ SEQ ID NO: 7; ข) การเข้ารหัสกรดนิวคลีอิกลำดับอะมิโนแอซิดของ SEQ ID NO: 8; c) นิวคลีอิก กรดที่มีอย่างน้อย 80% เหมือนของกรดนิวคลี) หรือข) ที่40 identy เป็นตัวตนมากกว่าความยาวทั้งหมดของนิวคลีอิกของกรด) หรือข); และง) กรดนิวคลีอิกเข้ารหัสลำดับอะมิโนแอซิดซึ่งเป็นอย่างน้อย 80% เหมือนกันกับลำดับอะมิโนแอซิดเข้ารหัสโดยกรดนิวคลีอิกของ) หรือข), identy เป็นตัวตนมากกว่ารวมที่ ความยาวของลำดับอะมิโนแอซิดเข้ารหัสโดย Aci นิวคลีอิก