AbstractThe present study aims to p

Abstract
The present study aims to provide new in vitro and in vivo biochemical information about a novel Kunitz trypsin inhibitor purified from Piptadenia moniliformis seeds. The purification process was performed using TCA precipitation, Trypsin–Sepharose and reversed-phase C18 HPLC chromatography. The inhibitor, named PmTKI, showed an apparent molecular mass of around 19 kDa, visualized by SDS-PAGE, which was confirmed by mass spectrometry MALDI-ToF demonstrating a monoisotopic mass of 19.296 Da. The inhibitor was in vitro active against trypsin, chymotrypsin and papain. Moreover, kinetic enzymatic studies were performed aiming to understand the inhibition mode of PmTKI, which competitively inhibits the target enzyme, presenting Ki values of 1.5 × 10−8 and 3.0 × 10−1 M against trypsin and chymotrypsin, respectively. Also, the inhibitory activity was assayed at different pH ranges, temperatures and reduction environments (DTT). The inhibitor was stable in all conditions maintaining an 80% residual activity. N-terminal sequence was obtained by Edman degradation and the primary sequence presented identity with members of Kunitz-type inhibitors from the same subfamily. Finally after biochemical characterization the inhibitory effect was evaluated in vitro on insect digestive enzymes from different orders, PmTKI demonstrated remarkable activity against enzymes from Anthonomus grandis (90%), Plodia interpuncptella (60%), and Ceratitis capitata (70%). Furthermore, in vivo bioinsecticidal assays of C. capitata larvae were also performed and the concentration of PmTKI (w/w) in an artificial diet required to LD50 and ED50 larvae were 0.37 and 0.3% respectively. In summary, data reported here shown the biotechnological potential of PmTKI for insect pest control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่อThe present study aims to provide new in vitro and in vivo biochemical information about a novel Kunitz trypsin inhibitor purified from Piptadenia moniliformis seeds. The purification process was performed using TCA precipitation, Trypsin–Sepharose and reversed-phase C18 HPLC chromatography. The inhibitor, named PmTKI, showed an apparent molecular mass of around 19 kDa, visualized by SDS-PAGE, which was confirmed by mass spectrometry MALDI-ToF demonstrating a monoisotopic mass of 19.296 Da. The inhibitor was in vitro active against trypsin, chymotrypsin and papain. Moreover, kinetic enzymatic studies were performed aiming to understand the inhibition mode of PmTKI, which competitively inhibits the target enzyme, presenting Ki values of 1.5 × 10−8 and 3.0 × 10−1 M against trypsin and chymotrypsin, respectively. Also, the inhibitory activity was assayed at different pH ranges, temperatures and reduction environments (DTT). The inhibitor was stable in all conditions maintaining an 80% residual activity. N-terminal sequence was obtained by Edman degradation and the primary sequence presented identity with members of Kunitz-type inhibitors from the same subfamily. Finally after biochemical characterization the inhibitory effect was evaluated in vitro on insect digestive enzymes from different orders, PmTKI demonstrated remarkable activity against enzymes from Anthonomus grandis (90%), Plodia interpuncptella (60%), and Ceratitis capitata (70%). Furthermore, in vivo bioinsecticidal assays of C. capitata larvae were also performed and the concentration of PmTKI (w/w) in an artificial diet required to LD50 and ED50 larvae were 0.37 and 0.3% respectively. In summary, data reported here shown the biotechnological potential of PmTKI for insect pest control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นามธรรม
มีวัตถุประสงค์ที่จะให้ใหม่ในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลอง ข้อมูลทางชีวเคมีที่เกี่ยวกับนิยาย kunitz ยับยั้งเอนไซม์บริสุทธิ์จาก piptadenia moniliformis เมล็ด กระบวนการบำบัดน้ำเสีย การตกตะกอน และใช้ TCA เกี่ยวข้อง , ทริป reversed-phase c18 HPLC โครมาโตกราฟี และชื่อ pmtki มีมวลโมเลกุลประมาณ 19 ชัดเจนว่าภาพโดย SDS-PAGE ซึ่งได้รับการยืนยันโดยมวลสารมา ดิ tof แสดงมวล monoisotopic ของ 19.296 ดา . และอยู่ในหลอดทดลองใช้งานกับเอนไซม์ไคโมทริปซิน , และนโยบาย จลนศาสตร์เอนไซม์และศึกษาการมุ่งมั่นที่จะเข้าใจและโหมดของ pmtki ซึ่งสามารถยับยั้งเอนไซม์เป้าหมาย เสนอกิค่า 1.5 × 10 − 8 และ 3 .0 × 10 − 1 m ต่อเอนไซม์ไคโมทริปซิน และ ตามลำดับ นอกจากนี้ ยังมีกิจกรรมการเจริญแตกต่างกันอ ซีรั่มที่ช่วงอุณหภูมิและสภาพแวดล้อมที่ลดลง ( DTT ) และมีเสถียรภาพในการรักษาสภาพ 80% ส่วนที่เหลือกิจกรรมลำดับของกรดอะมิโนที่ได้จากงูหัวกระโหลก และลำดับการเสนอเอกลักษณ์กับสมาชิกของ kunitz ประเภทสารยับยั้ง จาก subfamily เดียวกัน ในที่สุดหลังจากที่ทางชีวเคมีสมบัติยับยั้งผลทดสอบในหลอดทดลองเกี่ยวกับแมลงเอนไซม์ย่อยอาหารจากคำสั่งต่าง ๆ pmtki แสดงกิจกรรมที่โดดเด่นกับเอนไซม์จาก anthonomus สัก ( 90% )plodia interpuncptella ( 60% ) และ ceratitis capitata ( 70% ) นอกจากนี้ ในร่างกาย bioinsecticidal ) ของ capitata ตัวอ่อนยังดำเนินการและความเข้มข้นของ pmtki ( w / w ) ในอาหารเทียมและต้อง ld50 ed50 ~ i ) 0.37 และ 0.3% ตามลำดับ ในการสรุปข้อมูลที่รายงานมาแสดงศักยภาพทางเทคโนโลยีของ pmtki เพื่อควบคุมแมลงศัตรูพืช