RIDASCREEN® SET A,B,C,D,EBrief info

RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E
Brief information
RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E (Art. No.: R4101) is an enzyme immunoassay for
the identification of staphylococcal enterotoxins A, B, C, D and E in fluid and solid
foods as well as in bacterial cultures.
All reagents required for the enzyme immunoassay are contained in the test kit.
The test kit is sufficient for 12 determinations.
A microtiter plate spectrophotometer is required for determination.
Sample preparation: extraction according to a simplified method for working
up of samples (partly applicable, s. point 9. „Sample
preparation“) by homogenization with buffer and sample
preparation
extraction according to the „Official European
Preparation Method“ (dialysis concentration method,
(see point 9.5.)
Time requirement: sample preparation for 10 samples ...................... ca. 1 h
(simplified working up)
sample preparation for 10 samples .................... ca. 19 h
(official method, dialysis overnight)
test implementation (incubation time) ............. 2 h 45 min
Limits of detection:
Simplified working up liquid samples ...................................... 0.25 ng/ml Toxin
solid samples ....................................... 0.375 ng/g Toxin
supernatants from bacterial cultures .... 0.25 ng/ml Toxin
Dialysis concentration liquid samples ...................................... 0.05 ng/ml Toxin
solid samples ......................................... 0.05 ng/g Toxin
20 RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E 13-11-25
1. Intended use
RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E is a sandwich enzyme immunoassay for the
identification of staphylococcal enterotoxins (SET) A, B, C, D, E in fluid and solid
foods as well as in bacterial cultures. Based on its sensitivity the
RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E test is consequently clear superior to the
immunodiffusion procedure which has a detection limit of 0.1 mg/ml.
2. General
Staphylococci belong to the family of micrococci. Staphylococcus aureus and
Staphylococcus hyicus produce one or more heat stable proteins which behave as
enterotoxins. These are the causative agents for a number of food poisoning
cases.
The main causative agent of food poisoning are enterotoxins of Staphylococcus
aureus next to the Salmonella. Generally, it is assumed that a population of
5 x 105 cells of enterotoxin-producing Staphylococcus aureus strains per gram of
food is required to lead to an intoxication. However, other studies show that only
100 - 200 ng of staphylococcal enterotoxins can lead to symptoms of food
poisoning.
SET intoxications have been frequently associated with pasta, finished meat
products, ham, pies, chicken meat products, fish, fish products, milk, milk
products, ice-cream, egg products, salads, pastries and cake stuffing as well as
preparations from these food products. The enterotoxins of the serological group
A, B, C, D, E are very significant.
3. Test principle
The basis of the test is the antigen-antibody reaction. The wells A - E and H in the
microtiter strips are coated with specific antibodies against staphylococcal
enterotoxins A, B, C, D and E, the wells F and G serve as controls and are coated
with antibodies of non-immunized animals in the following pattern:
RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E 13-11-25 21
A anti – SET – A
B anti – SET – B specific antibodies
C anti – SET – C against
D anti – SET – D staphylococcal enterotoxins A-E
E anti – SET – E
F sheep – IgG negative control
G sheep – IgG negative control
H anti – SET positive control
Microtiter strips of the RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E enzyme immunoassay
This sequence is obtained when the microtiter strips are inserted properly into the
frame (narrow end of the strip
at the top, wide end of the strip
at the bottom).
By adding the sample solution to the wells A to G (see the letters on the left side
of the frame) and the positive control to well H, present toxins will bind to specific
capture antibodies. Sample components not bound by the antibodies are then
removed in a washing step. The immobilized toxins were bound by a mixture of
specific antibodies conjugated to biotin. Any unbound conjugate is then removed
in a washing step. After addition of Streptavidin-POD as well as an additional
washing step the detection is performed by adding the substrate/chromogen
solution. Bound Streptavidin-POD conjugate converts the reddish chromogen into
a blue product. The addition of the stop solution leads to a color change from blue
to yellow. The measurement is made photometrically at 450/630 ±10 nm; the
absorbance is proportional to the SET concentration in the sample.
22 RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E 13-11-25
4. Reagents provided
Each kit contains sufficient materials to analyse 12 samples. Each test kit
contains:
1 x Microtiter plate with 96 wells (12 strips with 8 wells each)
coated with specific anti-SET antibodies
1 x Positive control (2 ml) ......................................................................... red cap
(contains SET A,B,C,D,E; c = 1 - 2 ng/ml of each toxin; depending on
production batch)
red colored, ready-to-use
1 x Conjugate 1 (11 ml) ............................................................................ red cap
marked antibodies against SET
green colored, ready-to-use
1 x Conjugate 2 (11 ml) ......................................................................... black cap
peroxidase conjugated detection molecules
blue colored, ready-to-use
1 x Substrate/Chromogen (13 ml) ....................................................... brown cap
contains tetramethylbenzidine
reddish colored, ready-to-use
1 x Stop solution (13 ml) ..................................................................... yellow cap
contains 1 N sulfuric acid
1 x Washing buffer, pH 7.2 (100 ml) ................................................... brown cap
10fold concentrate
5. Materials required but not provided
5.1. Equipment:
- analytical balance and weighing vessels
- Blender, Mixer or equivalent (for sample homogenization). For whey powder
and all type of food difficult to mix, a turrax is highly recommended in order to
have a homogeneous sample.
- 50 ml tubes
- optional: sterile filter cartridges
- 100 μl micro pipette
- Incubator 35 - 37 °C (95 – 98.6 °F)
- Multi channel pipette or microwell plate washer
- optional: microwell plate spectrophotometer (450/630 ± 10 nm)
RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E 13-11-25 23
Additional equipment for sample preparation according to the European official
screening method (EOSM) Version 5, September 2010:
General remark: it is strictly recommended to use only laboratory vessels
of glass-ware or polypropylene-ware (e.g. tubes, funnels,
beakers, vials), to avoid adsorption of toxins
- Shaker for beakers (room temperature)
- Centrifuge, 3130 to 10 000 g, capable of being refrigerated at 4°C, centrifuge
tubes
- Dialysis membrane, MWCO: 6 – 8 kD, flat width: 23 ± 2 mm (e.g.
Spectra/Por®1, ref: 132 650, Spectrum)
- Closures, sealing width = 35 mm (e.g. Spectra/Por®, ref: 132 736, Spectrum)
- pH-meter
- 50 ml tubes
- Funnel
- Glass-wool
- Tray
- Fridge (5 ± 3 °C/41 ± 5.4 °F) and freezer (≤ -18 °C/≤ -0.4 °F)
- Vortex
- Microwell plate spectrophotometer (450/630 ± 10 nm)
5.2. Reagents:
- PBS buffer, pH 7.4, (0.55 g NaH2PO4 x H2O + 2.85 g Na2HPO4 x 2 H2O + 8.7 g
NaCl, fill up to 1000 ml with distilled water)
- Distilled or osmosed water (optional: sterile water)
- n-heptane (for samples with high fat content)
- Brain-Heart-Infusion (BHI) for the pre-enrichment of potentially toxin forming
Staphylococci strains. Ask your local producer/distributor of culture media for
the supply with BHI
Additional reagents for EOSM:
- Hydrochloric acid (5N and 1N)
- Sodium hydroxide (5N and 1N)
- Polyethylene glycol 20 000 (PEG), quality for synthesis
6. Warnings and precautions for the users
The RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E assay has to be performed by trained
laboratory personal, only. The performance of the test has to be strictly adhered to
24 RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E 13-11-25
the instructions for use. For sample preparation, test performance and waste
disposal the compliance of GLP guidelines is recommended. All samples have to
be treated as they could be potentially toxic.
The positive control contains staphylococcal enterotoxins. They may be hazardous
for laboratory personal. Avoid contact with the skin or ingestion.
All materials as reagents, washing solutions or lab ware coming into contact with
potentially toxic samples or with the positive control have to be treated with
suitable decontaminating agents. Decontamination of the glassware is best
carried out using a sodium hypochlorite (bleach) solution (10 % (v/v)) overnight
(adjust the solution with HCl to pH 7).
The positive control contains sodium azide. Particular care should be taken.
The stop solution contains 1 N sulfuric acid (R36/38, S2-26).
7. Storage instructions
Store the kit at 2 - 8 °C (35 - 46 °F). Do not freeze any test kit components.
Return any unused microwells to their original foil bag, reseal them together with
the desiccant provided and further store at 2 - 8 °C (35 - 46 °F).
The reddish colored substrate/chromogen solution is light sensitive, therefore,
avoid exposure to direct light.
No quality guarantee is accepted after the expiration date on the kit label.
Dilution or contamination of reagents may lead to a loss of sensitivity.
Do not interchange individual reagents between kits of different lot numbers.
8. Indication of instability or deterioration of reagents
- any bluish coloration of the reddish substrate/chromogen solution prior to test
implementation
- a value of less than 1.0 absorbance units (A450/630 ±10 nm < 1.0) for the positive
control
RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E 13-11-25 25
9. Preparation of Samples
The samples have to be stored at 5 ± 3 °C (41 ± 5.4 °F) until extraction. The
samples should be completely defrosted before the extraction step.
Important notes: For good precipitation of solids and for complete
separation of the phases while centrifugation it is
necessary in some cases to inc

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

RIDASCREEN® SET A,B,C,D,EBrief informationRIDASCREEN® SET A,B,C,D,E (Art. No.: R4101) is an enzyme immunoassay forthe identification of staphylococcal enterotoxins A, B, C, D and E in fluid and solidfoods as well as in bacterial cultures.All reagents required for the enzyme immunoassay are contained in the test kit.The test kit is sufficient for 12 determinations.A microtiter plate spectrophotometer is required for determination.Sample preparation: extraction according to a simplified method for workingup of samples (partly applicable, s. point 9. „Samplepreparation“) by homogenization with buffer and samplepreparationextraction according to the „Official EuropeanPreparation Method“ (dialysis concentration method,(see point 9.5.)Time requirement: sample preparation for 10 samples ...................... ca. 1 h(simplified working up)sample preparation for 10 samples .................... ca. 19 h(official method, dialysis overnight)test implementation (incubation time) ............. 2 h 45 minLimits of detection:Simplified working up liquid samples ...................................... 0.25 ng/ml Toxinsolid samples ....................................... 0.375 ng/g Toxinsupernatants from bacterial cultures .... 0.25 ng/ml ToxinDialysis concentration liquid samples ...................................... 0.05 ng/ml Toxinsolid samples ......................................... 0.05 ng/g Toxin20 RIDASCREEN ®ชุด A, B, C, D, E 13-11-251. ใช้RIDASCREEN ®กำหนด A, B, C, D, E เป็น immunoassay มีเอนไซม์แซนวิชสำหรับการรหัส enterotoxins staphylococcal (ชุด) A, B, C, D, E ในของเหลวและของแข็งอาหารเช่นในวัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรีย ขึ้นอยู่กับความไวของการRIDASCREEN ®กำหนด A, B, C, D, E ทดสอบเป็นดังชัดเจนเหนือกว่าการวิธี immunodiffusion ซึ่งมีการตรวจหาจำนวน 0.1 mg/ml2. ทั่วไปStaphylococci เป็นสมาชิกของ micrococci หมอเทศข้างลาย staphylococcus และStaphylococcus hyicus ผลิต น้อยร้อนเสถียรภาพโปรตีนซึ่งทำงานเป็นenterotoxins เหล่านี้เป็นตัวแทนสาเหตุการสำหรับอาหารเป็นพิษกรณีตัวแทนสาเหตุการหลักของอาหารเป็นพิษมี enterotoxins Staphylococcusหมอเทศข้างลายอยู่ระดับ ทั่วไป จะถือว่าเป็นที่ประชากร5 x 105 เซลล์ผลิต enterotoxin Staphylococcus หมอเทศข้างลายสายพันธุ์ต่อกรัมของอาหารจะต้องนำไปสู่การ intoxication อย่างไรก็ตาม การศึกษาอื่น ๆ แสดงเท่านั้น100 - 200 ng staphylococcal enterotoxins สามารถนำไปสู่อาการอาหารเป็นพิษชุด intoxications มีการมักเกี่ยวข้องกับพาสต้า เสร็จเนื้อผลิตภัณฑ์ แฮม พาย ผลิตภัณฑ์เนื้อไก่ ปลา ผลิตภัณฑ์ปลา นม นมผลิตภัณฑ์ ไอศกรีม ไข่ผลิตภัณฑ์ สลัด ขนมปัง และเค้กบรรจุเป็นเตรียมจากผลิตภัณฑ์อาหารเหล่านี้ Enterotoxins กลุ่มสภาวะA, B, C, D, E มีความสำคัญมากขึ้น3. ทดสอบหลักพื้นฐานของการทดสอบคือ ปฏิกิริยาตรวจหาแอนติบอดี บ่อ A - E และ H ในการแถบ microtiter จะเคลือบ ด้วยแอนตี้เฉพาะกับ staphylococcalenterotoxins A, B, C, D และ E บ่อ F และ G เป็นตัวควบคุม และจะเคลือบผิวมีแอนตี้ immunized ไม่ใช่สัตว์ในรูปแบบต่อไปนี้:RIDASCREEN ®กำหนด A, B, C, D, E 13-11-25 21A anti –ชุด – AB ต่อต้านแอนตี้เฉพาะ –ชุด – Bป้องกัน –ชุด – C กับ Cป้องกัน enterotoxins staphylococcal –ชุด – D A E Dอีแอนตี้ –ชุด – Eแกะ F – IgG ควบคุมลบแกะ G – IgG ควบคุมลบH ป้องกันควบคุมการตั้งค่าเป็นค่าบวกMicrotiter แถบ RIDASCREEN ®กำหนด A, B, C, D, E เอนไซม์ immunoassayลำดับนี้จะได้รับเมื่อแถบ microtiter จะแทรกอย่างเฟรม (แคบสุดของแถบด้านบน สิ้นสุดความกว้างของแถบที่อยู่ด้านล่าง)โดยการเพิ่มตัวอย่างวิธีแก้ไขบ่อ A ถึง G (เห็นตัวอักษรทางด้านซ้ายกรอบ) และการควบคุมบวก H ดี สารพิษอยู่จะผูกเฉพาะจับแอนตี้ ส่วนประกอบตัวอย่างที่ไม่ผูก โดยที่แอนตี้อยู่แล้วเอาออกในขั้นตอนการซักผ้า สารพิษในเอนไซม์ถูกผูก ด้วยส่วนผสมของแอนตี้เฉพาะกลวงกับไบโอติน ค่าสังยุคใด ๆ ไม่ถูกผูกไว้จะถูกลบออกแล้วในขั้นตอนการซักผ้า หลังจากนี้ของ Streptavidin POD เป็นเพิ่มเติมขั้นตอนการซักผ้าการตรวจพบจะดำเนินการ โดยการเพิ่มพื้น ผิว/chromogenการแก้ปัญหา ค่าสังยุคของ Streptavidin POD ผูกแปลง chromogen น้ำตาลในผลิตภัณฑ์ที่มีสีน้ำเงิน แห่งโซลูชั่นครบนำไปสู่การเปลี่ยนสีจากสีน้ำเงินให้สีเหลือง การประเมินจะทำ photometrically ที่ 450/630 nm 〜 ที่absorbance เป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นที่กำหนดจากตัวอย่าง22 RIDASCREEN ®ชุด A, B, C, D, E 13-11-254. ให้ reagentsแต่ละชุดประกอบด้วยวัสดุเพียงพอกับวิเคราะห์ตัวอย่างที่ 12 ชุดทดสอบแต่ละประกอบด้วย:แผ่นที่ 1 x Microtiter มี 96 บ่อ (12 แผ่น มี 8 บ่อ)เคลือบ ด้วยแอนตี้ชุดป้องกันเฉพาะ1 x บวกตัว (2 ml) หมวกสีแดง(ประกอบด้วยชุด A, B, C, D, E; c = 1-2 ng/ml ของแต่ละสารพิษ ขึ้นอยู่กับผลิตชุด)สีแดงสี พร้อมใช้1 x Conjugate 1 (11 ml)...แดงหมวกแอนตี้เครื่องกับชุดสีเขียวสี พร้อมใช้1 x หมวกดำ (11 ml)... 2 Conjugateกลวง peroxidase ตรวจหาโมเลกุลสีฟ้าสี พร้อมใช้1 x พื้น ผิว/Chromogen (13 ml)...หมวกสีน้ำตาลประกอบด้วย tetramethylbenzidineน้ำตาลสี พร้อมใช้1 x โซลูชั่นครบ (13 ml)...หมวกสีเหลืองประกอบด้วยกรดซัลฟิวริก N 11 x ล้างบัฟเฟอร์ pH 7.2 (100 มล.)...หมวกสีน้ำตาลเข้มข้น 10fold5. วัสดุจำเป็น แต่ไม่มี5.1. อุปกรณ์:-เครื่องชั่งวิเคราะห์และชั่งน้ำหนักเรือ-เบลนเดอร์ มิกเซอร์ หรือเทียบเท่า (สำหรับตัวอย่าง homogenization) สำหรับเวย์ผงและยากต่อการผสมอาหารทุกชนิด turrax ที่แนะนำเพื่อมีตัวอย่างเป็นเนื้อเดียวกัน-หลอด 50 ml-เพิ่มเติม: ตลับใส่ตัวกรอง-100 μl ไมโครเปตต์-บ่มเพาะวิสาหกิจ 35-37 ° C (95-98.6 ° F)-หลายช่องเปตต์หรือ microwell จานเครื่องซักผ้า-เพิ่มเติม: เครื่องทดสอบกรดด่างจาน microwell (450/630 ± 10 nm)RIDASCREEN ®กำหนด A, B, C, D, E 13-11-25 23อุปกรณ์เพิ่มเติมสำหรับการเตรียมตัวอย่างตามทางยุโรปตรวจคัดกรองวิธี (EOSM) รุ่น 5, 2553 กันยายน:หมายเหตุทั่วไป: อย่างเคร่งครัดมีการแนะนำให้ใช้เฉพาะห้องปฏิบัติการเรือเครื่องแก้วหรือโพรพิลีนเครื่อง (เช่นท่อ funnelsbeakers, vials), หลีกเลี่ยงการดูดซับสารพิษ-เชคเกอร์ beakers (อุณหภูมิห้อง)-เครื่องหมุนเหวี่ยง 3130-10 000 g สามารถถูก refrigerated ที่ 4 ° C เครื่องหมุนเหวี่ยงหลอด-หน่วยเมมเบรน MWCO: kD แบนกว้าง 6 – 8:23 ± 2 มม. (เช่นSpectra/Por ® 1, ref: 132 650 สเปกตรัม)-ปิด ยาแนวรอยต่อกว้าง = 35 มม. (เช่นแรมสเป็คตรา/ปอ® อ้างอิง: 132 736 สเปกตรัม)-เครื่องวัด pH-หลอด 50 ml-กรวย-กระจกผ้าขนสัตว์-ถาด-ตู้เย็น (5 ±± 3 ° C/41 5.4 ° F) และตู้แช่แข็ง (-18 ° C ≤/≤-0.4 ° F)-Vortex-เครื่องทดสอบกรดด่างจาน Microwell (450/630 ± 10 nm)5.2. reagents:-PBS บัฟเฟอร์ pH 7.4, (0.55 g NaH2PO4 x H2O + 2.85 g Na2HPO4 x 2 H2O + 8.7 gNaCl เติมถึง 1000 ml ด้วยน้ำกลั่น)-กลั่น หรือ osmosed น้ำ (เพิ่มเติม: ใส่น้ำ)-n-heptane (สำหรับตัวอย่างที่มีไขมันสูง)-สมองหัวใจคอนกรีต (BHI) สำหรับเติมเต็มก่อนอาจมีสารพิษขึ้นสายพันธุ์ staphylococci ขอให้คุณเฉพาะผู้ผลิต/จำหน่ายสื่อวัฒนธรรมสำหรับอุปทานกับ BHIReagents เพิ่มเติมสำหรับ EOSM:-กรดไฮโดรคลอริก (5N และ 1N)-โซเดียมไฮดรอกไซด์ (5N และ 1N)-Polyethylene glycol 20 000 (PEG), คุณภาพสำหรับการสังเคราะห์6. คำเตือนและข้อควรระวังสำหรับผู้ใช้เดอะ RIDASCREEN ®กำหนด A, B, C, D, E วิเคราะห์ได้ดำเนินการโดยการฝึกอบรมห้องปฏิบัติการส่วนบุคคล เท่านั้น ประสิทธิภาพของการทดสอบได้มีการปฏิบัติตามอย่างเคร่งครัดเพื่อ24 RIDASCREEN ®ชุด A, B, C, D, E 13-11-25คำแนะนำสำหรับการใช้งาน สำหรับการเตรียมตัวอย่าง ทดสอบประสิทธิภาพการทำงาน และเสียขอแนะนำให้ขายทิ้งตามแนวทางของ GLP มีตัวอย่างทั้งหมดจะถือว่าเป็นพวกเขาอาจอาจเป็นพิษควบคุมบวกประกอบด้วย staphylococcal enterotoxins พวกเขาอาจจะเป็นอันตรายส่วนปฏิบัติการส่วนบุคคล หลีกเลี่ยงการสัมผัสกับผิวหนังหรือกินวัสดุทั้งหมดเป็น reagents ซักผ้าโซลูชั่นหรือพัสดุปฏิบัติมาเป็นการติดต่อด้วยอาจเป็นพิษตัวอย่าง หรือควบคุมบวกจะต้องได้รับการdecontaminating ตัวแทนที่เหมาะสม Decontamination ของเครื่องแก้วดีสุดดำเนินการโดยใช้โซลูชันฟอก (เทพมรณะ) (10% (v/v)) ค้างคืน(ปรับปรุงโซลูชันที่ มี HCl pH 7)ควบคุมบวกประกอบด้วยโซเดียม azide ควรดำเนินการดูแลโซลูชั่นครบประกอบด้วย 1 N ซัลฟิวริก (R36/38, S2-26)7. เก็บคำแนะนำเก็บชุดที่ 2-8 ° C (35-46 ° F) ตรึงส่วนประกอบชุดทดสอบใด ๆกลับ microwells ไม่ได้ใช้ใด ๆ ของถุงฟอยล์เดิม ปิดผนึกพร้อมด้วยชื้นจัด และเก็บที่ 2-8 ° C (35-46 ° F) เพิ่มเติมทำสีพื้น ผิว/chromogen เป็นความเบา ดังนั้นหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแสงโดยตรงรับประกันคุณภาพไม่เป็นที่ยอมรับหลังจากวันหมดอายุบนฉลากชุดเจือจางหรือปนเปื้อนของ reagents อาจทำให้สูญเสียความไวแลกเปลี่ยนแต่ละ reagents ระหว่างชุดของหมายเลขล็อตที่แตกต่างกัน8. การบ่งชี้ความไม่แน่นอนหรือความเสียหายของ reagents-การย้อมสีระยับของก่อนแก้ปัญหา chromogen น้ำตาลพื้นผิวการทดสอบนำไปใช้-ค่าน้อยกว่า 1.0 absorbance หน่วย (〜 A450/630 nm < 1.0) ในแง่บวกควบคุมRIDASCREEN ®กำหนด A, B, C, D, E 13-11-25 259. เตรียมตัวอย่างตัวอย่างมีการจัดเก็บที่ 5 ± 3 ° C (41 ± 5.4 ° F) จนถึงแยก ที่ตัวอย่างควรสมบูรณ์ defrosted ก่อนขั้นตอนการสกัดหมายเหตุสำคัญ: ฝนดี ของของแข็ง และการทำแยกระยะขณะ centrifugation เป็นความจำเป็นในบางกรณีถึง inc

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

RIDASCREEN® SET A, B, C, D, E
ข้อมูลโดยย่อRIDASCREEN® SET A, B, C, D, E (ศิลปะ. No .: R4101) เป็น immunoassay เอนไซม์สำหรับการระบุของstaphylococcal Enterotoxins A, B, C, D และ E ในของเหลวและของแข็ง. อาหารเช่นเดียวกับในวัฒนธรรมแบคทีเรียสารเคมีทั้งหมดที่จำเป็นสำหรับการ immunoassay เอนไซม์ที่มีอยู่ในชุดทดสอบ. ชุดทดสอบก็เพียงพอแล้วสำหรับ 12 หาความ. spectrophotometer แผ่นไมโครเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับความมุ่งมั่น. เตรียมตัวอย่าง: สกัดตามวิธีการที่เรียบง่ายสำหรับการทำงานของตัวอย่าง(บังคับส่วนจุด. 9. "ตัวอย่างการจัดทำ") โดยเป็นเนื้อเดียวกันกับกันชนและตัวอย่างการเตรียมการสกัดตาม"อย่างเป็นทางการยุโรปเตรียมวิธี" (วิธีการฟอกเลือดเข้มข้น (ดูจุด 9.5). ต้องการเวลา: การเตรียมสารตัวอย่าง 10 ตัวอย่าง ...................... แคลิฟอร์เนีย 1 ชั่วโมง(จีนทำงานขึ้นไป) การเตรียมสารตัวอย่าง 10 ตัวอย่าง ... ................. 19 ชั่วโมงโดยประมาณ(วิธีการอย่างเป็นทางการในชั่วข้ามคืนฟอกเลือด) การดำเนินการทดสอบ (เวลาฟักตัว) ............. 2 ชั่วโมง 45 นาทีข้อจำกัด ของการตรวจสอบ: เรียบง่ายทำงานขึ้นตัวอย่างของเหลว ...................................... 0.25 นาโนกรัม / มลสารพิษกลุ่มตัวอย่างที่เป็นของแข็ง....................................... 0.375 ng / กรัมสารพิษsupernatants จากวัฒนธรรมแบคทีเรีย .... 0.25 ng / ml พิษไตตัวอย่างของเหลวเข้มข้น.................................. .... 0.05 ng / ml พิษตัวอย่างที่เป็นของแข็ง....................................... .. 0.05 นาโนกรัม / กรัมสารพิษ20 RIDASCREEN® SET A, B, C, D, E 13-11-25 1 ตั้งใจใช้RIDASCREEN® SET A, B, C, D, E เป็น immunoassay เอนไซม์แซนวิชสำหรับบัตรประจำตัวของstaphylococcal Enterotoxins (มหาชน) A, B, C, D, E ในของเหลวและของแข็งอาหารเช่นเดียวกับในวัฒนธรรมของเชื้อแบคทีเรีย ขึ้นอยู่กับความไวของRIDASCREEN® SET A, B, C, D, E เป็นการทดสอบจึงชัดเจนกว่าขั้นตอนimmunodiffusion ซึ่งมีการตรวจสอบวงเงิน 0.1 มก. / มล. 2 ทั่วไปเชื้ออยู่ในครอบครัวของ micrococci เชื้อ Staphylococcus aureus และStaphylococcus hyicus ผลิตหนึ่งหรือมากกว่าโปรตีนที่มีเสถียรภาพความร้อนที่ประพฤติตัวเป็นEnterotoxins เหล่านี้เป็นตัวแทนสาเหตุสำหรับจำนวนของโรคอาหารเป็นพิษกรณี. ตัวแทนสาเหตุหลักของโรคอาหารเป็นพิษเป็น Enterotoxins ของเชื้อ Staphylococcus aureus ถัดจากเชื้อ Salmonella โดยทั่วไปมันจะสันนิษฐานว่าประชากร5 x 105 เซลล์ enterotoxin ผลิตสายพันธุ์เชื้อ Staphylococcus aureus ต่อกรัมของอาหารที่จะต้องนำไปสู่การเป็นพิษ อย่างไรก็ตามการศึกษาอื่น ๆ ที่แสดงให้เห็นว่ามีเพียง100-200 นาโนกรัมของ Enterotoxins staphylococcal สามารถนำไปสู่อาการของอาหาร. พิษSET พิษได้รับมักเกี่ยวข้องกับพาสต้าเสร็จเนื้อผลิตภัณฑ์แฮมพายผลิตภัณฑ์เนื้อไก่, ปลา, ผลิตภัณฑ์ปลานม นมผลิตภัณฑ์ไอศครีม, ผลิตภัณฑ์ไข่, สลัด, ขนมอบและเค้กบรรจุเช่นเดียวกับการเตรียมอาหารจากผลิตภัณฑ์เหล่านี้ enterotoxins ที่ของกลุ่มทางภูมิคุ้มกันA, B, C, D, E มีความสำคัญมาก. 3 หลักการทดสอบพื้นฐานของการทดสอบปฏิกิริยาแอนติเจนแอนติบอดี บ่อเอ - อีและเอชในแถบไมโครเคลือบด้วยแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงกับstaphylococcal Enterotoxins A, B, C, D, E, F หลุมและจีทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุมและมีการเคลือบที่มีภูมิคุ้มกันของสัตว์ที่ไม่ได้รับวัคซีนในต่อไปนี้รูปแบบ: RIDASCREEN® SET A, B, C, D, E 13-11-25 21 ต่อต้าน - ตลาดหลักทรัพย์แห่งประเทศไทย - เป็นต่อต้านB - ตลาดหลักทรัพย์ - B แอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงC ป้องกัน - ตลาดหลักทรัพย์ - C กับD ต่อต้าน - ตลาดหลักทรัพย์แห่งประเทศไทย - D staphylococcal Enterotoxins AE E ต่อต้าน - ตลาดหลักทรัพย์แห่งประเทศไทย - E F แกะ - IgG ควบคุมเชิงลบG แกะ - IgG ควบคุมเชิงลบH ป้องกัน - ควบคุมบวก SET แถบไมโครของRIDASCREEN® SET A, B, C, D, E immunoassay เอนไซม์ลำดับนี้จะได้รับเมื่อแถบไมโครจะใส่อย่างถูกต้องเข้ามาในกรอบ (ปลายแคบของแถบหรือไม่ที่ด้านบนปลายกว้างของแถบหรือไม่ที่ด้านล่าง). โดยการเพิ่มวิธีการแก้ปัญหาตัวอย่างเพื่อหลุม A ถึง G (ดูตัวอักษรบนด้านซ้ายของกรอบ) และการควบคุมในเชิงบวกต่อดีเอชสารพิษในปัจจุบันจะผูกกับเฉพาะแอนติบอดีจับ ส่วนประกอบตัวอย่างไม่ผูกพันตามแอนติบอดีจะถูกลบออกในขั้นตอนที่ซักผ้า สารพิษที่ตรึงกำลังมุ่งหน้าจากส่วนผสมของแอนติบอดี้ที่เฉพาะเจาะจงที่จะผันไบโอติน ใด ๆ ที่ไม่ได้ผูกผันจะถูกลบออกแล้วในขั้นตอนที่ซักผ้า หลังจากที่นอกเหนือจากสเตรุนเช่นเดียวกับการเพิ่มขั้นตอนการซักผ้าการตรวจสอบจะดำเนินการโดยการเพิ่มพื้นผิว / chromogen การแก้ปัญหา ผูกผันสเตรุนแปลง chromogen สีแดงลงไปในผลิตภัณฑ์สีฟ้า นอกเหนือจากโซลูชั่นครบวงจรที่นำไปสู่การเปลี่ยนสีจากสีฟ้าเป็นสีเหลือง วัดที่ทำ photometrically ที่ 450/630 ± 10 นาโนเมตร; การดูดกลืนแสงเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของตลาดหลักทรัพย์ในกลุ่มตัวอย่าง. 22 RIDASCREEN® SET A, B, C, D, E 13-11-25 4 รีเอเจนต์ให้แต่ละชุดที่มีวัสดุเพียงพอที่จะวิเคราะห์ 12 ตัวอย่าง ชุดทดสอบแต่ละประกอบด้วย: 1 x แผ่นไมโคร 96 หลุม (12 แผ่นมี 8 หลุมในแต่ละ) เคลือบด้วยแอนติบอดีต่อต้านตลาดหลักทรัพย์ที่เฉพาะเจาะจง1 x ควบคุมบวก (2 ml) ............... .................................................. ........ หมวกสีแดง(มี SET A, B, C, D, E; c = 1-2 ng / ml ของแต่ละสารพิษ; ขึ้นอยู่กับชุดการผลิต) สีแดงสีพร้อมต่อการใช้งาน1 x คอนจูเกตที่ 1 (11 มล.) ............................................ ................................ หมวกสีแดงทำเครื่องหมายแอนติบอดีต่อSET สีเขียวพร้อมต่อการใช้งาน1 x 2 ผัน (11 มล.) .............................................. ........................... หมวกสีดำperoxidase ผันโมเลกุลของการตรวจจับสีฟ้าสีพร้อมต่อการใช้งาน1 x พื้นผิว / chromogen (13 มล.) .................................................. ..... หมวกสีน้ำตาลมีtetramethylbenzidine สีแดงสีพร้อมต่อการใช้งาน1 x แก้ปัญหาหยุด (13 มล.) ......................... ............................................ หมวกสีเหลืองมี1 N ซัลฟูริก กรด1 x บัฟเฟอร์ซักผ้า, พีเอช 7.2 (100 มล.) ...................................... ............. หมวกสีน้ำตาล10fold สมาธิ5 วัสดุที่จำเป็น แต่ไม่ได้ให้5.1 อุปกรณ์: - การวิเคราะห์ความสมดุลและมีน้ำหนักเรือ- ปั่นผสมหรือเทียบเท่า (สำหรับเนื้อเดียวกันตัวอย่าง) สำหรับเวย์โปรตีนผงและชนิดของอาหารที่ยากลำบากในการผสมเป็น turrax ขอแนะนำเพื่อที่จะได้มีตัวอย่างที่เป็นเนื้อเดียวกัน. - 50 มลหลอด- ตัวเลือก: ไส้กรองฆ่าเชื้อ- 100 ไมโครลิตรปิเปตไมโคร- บ่มเพาะ 35-37 ° C (95 - 98.6 ° F) - ปิเปตหลายช่องทางหรือ microwell จานเครื่องซักผ้า- อุปกรณ์เสริม: microwell spectrophotometer แผ่น (450/630 ± 10 นาโนเมตร) RIDASCREEN® SET A, B, C, D, E 13-11-25 23 อุปกรณ์เพิ่มเติมสำหรับการเตรียมสารตัวอย่างตาม อย่างเป็นทางการยุโรปวิธีการตรวจคัดกรอง(EOSM) รุ่นที่ 5 กันยายน 2010: คำพูดทั่วไป: จะแนะนำอย่างเคร่งครัดที่จะใช้เรือในห้องปฏิบัติการเพียงแก้วเครื่องหรือโพรพิลีนเครื่อง(หลอดเช่นช่องทาง, บีกเกอร์, ขวด) เพื่อหลีกเลี่ยงการดูดซับของ สารพิษ- ปั่นสำหรับบีกเกอร์ (อุณหภูมิห้อง) - เครื่องปั่นเหวี่ยง 3130-10 000 กรัม, ความสามารถในการแช่เย็นที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส centrifuge หลอด- เมมเบรนไต MWCO: 6-8 kD กว้างแบน: 23 ± 2 มิลลิเมตร (เช่นSpectra / Por®1อ้างอิง: 132 650, Spectrum) - ปิด, ปิดผนึกความกว้าง = 35 มิลลิเมตร (เช่น Spectra / Por®อ้างอิง: 132 736 สเปกตรัม) - พีเอชเมตร- 50 มลหลอด- ช่องทาง- แก้วขน- ถาด- ตู้เย็น (5 ± 3 ° C / 41 ± 5.4 ° F) และช่องแช่แข็ง (≤ -18 ° C / ≤ -0.4 ° ​​F) - Vortex - microwell spectrophotometer แผ่น (450/630 ± 10 นาโนเมตร) 5.2 รีเอเจนต์: - บัฟเฟอร์พีบีเอสพีเอช 7.4 (0.55 กรัม NaH2PO4 x H2O + 2.85 กรัม Na2HPO4 x 2 H2O + 8.7 กรัมโซเดียมคลอไรด์เติมได้ถึง1000 มล. น้ำกลั่น) - น้ำกลั่นหรือ osmosed (อุปกรณ์เสริม: น้ำหมัน) - ละลาย heptane (สำหรับตัวอย่างที่มีปริมาณไขมันสูง) - สมองหัวใจ Infusion (BHI) สำหรับการตกแต่งล่วงหน้าของสารพิษที่อาจก่อให้เกิดสายพันธุ์เชื้อ ขอให้ผู้ผลิตในท้องถิ่นของคุณ / ผู้จัดจำหน่ายของสื่อวัฒนธรรมอุปทานที่มีBHI น้ำยาเพิ่มเติมสำหรับ EOSM: - กรดไฮโดรคลอริก (5N และ 1N) - โซเดียมไฮดรอกไซ (5N และ 1N) - เอทิลีนไกลคอล 20 000 (PEG), ที่มีคุณภาพสำหรับการสังเคราะห์6 คำเตือนและข้อควรระวังสำหรับผู้ใช้RIDASCREEN® SET A, B, C, D, E ทดสอบจะต้องมีการดำเนินการโดยผ่านการฝึกอบรมในห้องปฏิบัติการส่วนบุคคลเท่านั้น ผลการดำเนินงานของการทดสอบจะต้องมีการปฏิบัติตามอย่างเคร่งครัด24 RIDASCREEN® SET A, B, C, D, E 13-11-25 คำแนะนำสำหรับการใช้งาน สำหรับตัวอย่างการเตรียมการทดสอบประสิทธิภาพและของเสียการกำจัดการปฏิบัติตามแนวทาง GLP แนะนำ ตัวอย่างทั้งหมดจะต้องได้รับการปฏิบัติที่พวกเขาอาจจะเป็นพิษที่อาจเกิดขึ้น. การควบคุมในเชิงบวกมี staphylococcal Enterotoxins พวกเขาอาจเป็นอันตรายสำหรับบุคคลในห้องปฏิบัติการ หลีกเลี่ยงการสัมผัสกับผิวหนังหรือการบริโภค. วัสดุทั้งหมดเป็นน้ำยาแก้ปัญหาเครื่องซักผ้าหรือห้องปฏิบัติการที่เข้ามาติดต่อกับกลุ่มตัวอย่างที่เป็นพิษที่อาจเกิดขึ้นหรือมีการควบคุมในเชิงบวกที่จะต้องได้รับการรักษาด้วยตัวแทนdecontaminating เหมาะสม การปนเปื้อนของเครื่องแก้วที่ดีที่สุดคือดำเนินการโดยใช้โซเดียมไฮโปคลอไรต์ (การฟอกขาว) วิธีการแก้ปัญหา (10% (v / v)) ในชั่วข้ามคืน (ปรับวิธีการแก้ปัญหาที่มี HCl ค่าพีเอช 7). การควบคุมในเชิงบวกมีโซเดียมเอไซด์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งการดูแลจะต้องดำเนินการ. โซลูชั่นแบบครบวงจรที่มี 1 N กรดกำมะถัน (R36 / 38, S2-26). 7 คำแนะนำการจัดเก็บเก็บชุดที่ 2-8 ° C (35-46 ° F) ไม่หยุดการทดสอบส่วนประกอบชุดใด ๆ . กลับ microwells ที่ไม่ได้ใช้ถุงฟอยล์เดิมของพวกเขา reseal พวกเขาร่วมกันกับสารดูดความชื้นที่ให้บริการและร้านค้าเพิ่มเติมได้ที่2-8 ° C (35-46 ° F). พื้นผิวสีแดง / แก้ปัญหา chromogen คือ แสงจึงหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแสงโดยตรง. รับประกันคุณภาพไม่เป็นที่ยอมรับหลังจากวันหมดอายุบนฉลากชุด. เจือจางหรือปนเปื้อนของสารเคมีอาจนำไปสู่การสูญเสียความไว. อย่าแลกเปลี่ยนน้ำยาแต่ละระหว่างชุดของตัวเลขที่แตกต่างกันมาก8 บ่งชี้ของความไม่แน่นอนหรือการเสื่อมสภาพของสารเคมี- สีฟ้าใด ๆ ของพื้นผิวสีแดง / chromogen แก้ปัญหาก่อนที่จะมีการทดสอบการใช้งาน- ค่าน้อยกว่า 1.0 หน่วยการดูดกลืนแสง (ที่ A450 / 630 ± 10 นาโนเมตร <1.0) สำหรับบวกควบคุมRIDASCREEN®ชุดB, C, D, E 13-11-25 25 9. จัดทำตัวอย่างกลุ่มตัวอย่างที่จะต้องมีการเก็บไว้ที่5 ± 3 ° C (41 ± 5.4 ° F) จนกระทั่งสกัด ตัวอย่างควรจะละลายอย่างสมบูรณ์ก่อนที่จะขั้นตอนการสกัด. หมายเหตุที่สำคัญ: สำหรับการตกตะกอนของของแข็งที่ดีและสมบูรณ์แยกขั้นตอนในขณะที่หมุนเหวี่ยงมันเป็นสิ่งที่จำเป็นในบางกรณีจะinc