IgG, rabbit muscle aldolase, and BS

IgG, rabbit muscle aldolase, and BSA were taken from gel
filtration standard kits (catalog no. 17-0442-01, Amersham
Pharmacia). Hen egg lysozyme (HEL) was purchased from
Worthington, and D1.3 antibody was prepared as described in
ref. 29. A DNA fragment encoding the SH3 domains of phospholipase
C
1 (790–851) (PLC
1) was cloned in the vector
pGEX-4T-1(
) (Novagen) and expressed in Escherichia coli
BL21-CodonPlus(DE3)-RIL cells (Stratagene). The GST–
PLC
1–SH3 fusion protein was purified by using a GSTrap FF
column (Amersham Pharmacia), digested with thrombin protease
(Amersham Pharmacia), and further purified by gel filtration
and anion exchange chromatography. The proline-rich
region of SH2-domain-containing leukocyte protein 76 (SLP-76)
(158–244) was cloned in the vector pET 28a and expressed in E.
coli BL21 cells. His-tagged SLP-76 protein was purified from a
soluble fraction with a HisTrap HP column (Amersham Pharmacia)
followed by gel filtration and anion exchange chromatography.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

IgG, aldolase กล้ามเนื้อกระต่าย และบีเอสเอได้มาจากเจ
กรองชุดมาตรฐาน (แค็ตตาล็อกหมายเลข 17-0442-01, Amersham
Pharmacia) ไก่ไข่ lysozyme (ด้อย) ถูกซื้อจาก
ธธิง และแอนติบอดี D1.3 ถูกเตรียมใน
อ้างอิง 29 ส่วนดีเอ็นเอรหัส SH3 โดเมนของ phospholipase
C 1 (790-851) (PLC 1) ถูกโคลนในเวกเตอร์
pGEX-4 ที-1 () (Novagen) และแสดงใน Escherichia coli
CodonPlus ตัวของ BL21 (DE3) -เหลือเซลล์ (Stratagene) GST –
PLC 1 – SH3 ฟิวชั่นโปรตีนที่บริสุทธิ์โดย GSTrap FF
คอลัมน์ (Amersham Pharmacia), เจ่ากับ thrombin รติเอส
(Amersham Pharmacia) และบริสุทธิ์ต่อไป โดยการกรองเจ
anion exchange chromatography และ ริช proline
ภูมิภาค SH2-โดประกอบด้วย leukocyte โปรตีน 76 (SLP-76)
(158–244) โคลนในสัตว์เวกเตอร์ 28a และแสดงใน E.
coli BL21 เซลล์ พระติดแท็ก SLP-76 โปรตีนที่บริสุทธิ์จากการ
เศษละลายกับคอลัมน์ HisTrap HP (Amersham Pharmacia)
ตาม ด้วยเจลอาบน้ำและ anion exchange chromatography

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

IgG กระต่ายอัลโดกล้ามเนื้อและบีเอสเอถูกนำมาจากเจล
ชุดมาตรฐานการกรอง (แคตตาล็อกไม่มี. 17-0442-01, Amersham
Pharmacia) ไลโซไซม์ไก่ไข่ (HEL) ซื้อมาจาก
วอร์ชิงตันและ D1.3 แอนติบอดีที่เตรียมตามที่อธิบายไว้ใน
การอ้างอิง 29 ชิ้นดีเอ็นเอเข้ารหัสโดเมน SH3 ของ phospholipase
C 1 (790-851) (PLC 1) เป็นโคลนในเวกเตอร์
pGEX-4T-1 (?) (Novagen) และแสดงออกใน Escherichia coli
BL21-CodonPlus (DE3 ) เซลล์ -RIL (Stratagene) GST-
PLC? โปรตีนฟิวชั่น 1 SH3 บริสุทธิ์โดยใช้ GSTrap FF
คอลัมน์ (Amersham Pharmacia) ย่อยด้วยน้ำย่อย thrombin
(Amersham Pharmacia) และต่อไปโดยการกรองบริสุทธิ์เจล
และการแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโต โพรลีนที่อุดมไปด้วย
พื้นที่ของ SH2 โดเมนที่มีเม็ดโลหิตขาวโปรตีน 76 (SLP-76)
(158-244) เป็นโคลนใน 28a pET เวกเตอร์และการแสดงออกใน E.
coli BL21 เซลล์ ของเขาที่ติดแท็ก SLP-76 โปรตีนบริสุทธิ์จาก
ส่วนที่ละลายกับคอลัมน์ HisTrap กับเอชพี (Amersham Pharmacia)
ตามด้วยการกรองเจลและการแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

IgG ลโดเลสกล้ามเนื้อกระต่าย ขนาดถ่ายจากเจล
กรองมาตรฐานชุด ( รายการไม่ 17-0442-01 ที่มุ่งมั่น ,
) แม่ไก่ไข่ไลโซไซม์ ( นรก ) ซื้อมาจาก
Worthington และ d1.3 แอนติบอดีที่เตรียมไว้ใน
29 Ref . เป็นดีเอ็นเอการเข้ารหัสสินค้าโดเมนของ phospholipase
c
1 ( 790 ( 851 ) ( มหาชน
1 ) ถูกโคลนในเวกเตอร์
pgex-4t-1 (
) ( novagen ) และแสดงออกในแบคทีเรีย Escherichia coli BL21 ( DE3 ) -
codonplus ริลเซลล์ ( stratagene ) GST )
( 1 )
สินค้าของโปรตีนบริสุทธิ์โดยใช้ gstrap FF
คอลัมน์ ( ที่ย่อยด้วยเอนไซม์โปรติเอสมุ่งมั่น ) ทรอมบิน
( ที่มุ่งมั่น ) และเพิ่มเติมบริสุทธิ์โดย
กรองเจลและโครมาโตกราฟีแลกเปลี่ยนแอนไอออน . การสะสมโพรลีนรวย
ภูมิภาคของโดเมนที่มีโปรตีน ทั้งนี้สินค้า 76 ( slp-76 )
( 158 ( 244 ) ถูกโคลนในเวกเตอร์สัตว์เลี้ยง และแสดงออกใน E . coli 28A
BL21 เซลล์ เขาติด slp-76 โปรตีนบริสุทธิ์จากส่วนที่ละลายน้ำได้ด้วย
histrap HP คอลัมน์ ( ที่มุ่งมั่น )
ตามด้วย Gel filtration chromatography และแลกเปลี่ยนแอนไอออน .