Validation of an LDH Assay for Asse

Validation of an LDH Assay for Assessing Nanoparticle Toxicity
We observed LDH stability in different media. We found good stability of LDH in either HBSS (Hank’s Balanced Salt Solution) or RPMI 1640 cell culture medium containing 1% FBS but not in water (Figure 1).
Therefore, LDH inactivation potentials of these NPs were evaluated in RPMI with 1% FBS, finding that TiO2-25 or Ag-40 NPs did not have significant inactivating potential in cell culture medium with 1% FBS while Cu-40 and Ag-35 were able to inactivate LDH in a dose-dependent manner (Figure 2).
The fact that TiO2-25 NPs do not inactivate LDH can help explain the dose-response curve of the released LDH upon exposure of R3/1 cells to TiO2-25. In such a dose-response curve (Figure 3), the LDH response increases over increasing doses and then decreases beyond a certain dose limit (100 μg/ml).
A comparison between Cu-40 NPs and Cu2+ found similar profiles of LDH inactivation of the two at equal molar concentration of Cu NPs and Cu2+ (Figure 4).
Curve fitting assuming one-phase exponential decay suggested that the half lives of LDH in 20 μg/ml of Cu-40 NPs (4.4% per hr) and Cu2+ (4.2% per hr) were very close. To validate that the LDH inactivating potential of CuSO4 was caused by Cu2+ and not by SO 2+4, a comparison between CuSO4 and Na2SO4 was compared at equimolar concentration of SO42+. Results showed that CuSO4 but not Na2SO4 could inactivate LDH, confirming our assumption that the LDH inactivation potential of CuSO4 was indeed due to the presence of Cu2+ but not SO42+ (Figure 5).
The similar profiles of LDH inactivation of Cu-40 and Cu2+ (Figure 4) seem to suggest that Cu-40 mainly inactivates LDH via the release of copper ions (Cu+ and/or Cu2+). To test this hypothesis, we measured the dissolution rate of Cu-40 in simulated lung fluids and found that Cu-40 has a high rate indeed (Figure 6). In clear contrast, Cu-40 NPs had a half life of about 9-10 hr in the fluid with a pH of 7.4 while less than 0.1% of Ag-40 NPs dissolved 30 hr later. However, we do not know whether the dissolved ions are Cu2+ or Cu+.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตรวจสอบวิเคราะห์การ LDH สำหรับการประเมินความเป็นพิษ Nanoparticleเราสังเกตความมั่นคงของ LDH ในสื่อต่าง ๆ เราพบดีเสถียรภาพของ LDH ใน HBSS (แฮงก์ของสมดุลเกลือโซลูชั่น) หรือสื่อวัฒนธรรมเซลล์ RPMI 1640 ประกอบด้วย 1% FBS แต่ไม่ได้อยู่ในน้ำ (รูปที่ 1) ดังนั้น LDH ยกเลิกการเรียกศักยภาพของ NPs เหล่านี้ถูกประเมินใน RPMI 1% FBS หาที่ TiO2 25 หรือ NPs Ag-40 ไม่มีสำคัญยกศักยภาพในวัฒนธรรมเซลล์ 1% FBS ขณะ Cu 40 และ Ag 35 ก็สามารถปิดการทำงานของ LDH ในลักษณะขึ้นอยู่กับปริมาณรังสี (รูปที่ 2)ความจริงที่ว่า NPs TiO2 25 ยก LDH สามารถช่วยอธิบายเกี่ยวกับเส้นโค้งตอบสนองยาของ LDH ออกตามแสงของ R3/1 เซลล์กับ TiO2-25 ในดังกล่าวตอบสนองยาเส้นโค้ง (รูปที่ 3), การตอบสนองของ LDH เพิ่มมากกว่าการเพิ่มปริมาณ และลดแล้ว เกินบางยาจำกัด (100 μg/ml)การเปรียบเทียบระหว่าง NPs Cu 40 และ Cu2 + พบโปรไฟล์คล้ายของ LDH ยกเลิกการเรียกสองที่ความเข้มข้นเท่าที่สบ Cu NPs และ Cu2 + (รูปที่ 4) เส้นโค้งสมมติว่าหนึ่งเฟสเอ็กซ์โพเนนเชียผุแนะนำที่ชีวิตครึ่งหนึ่งของ LDH ใน μg 20 ml ของ Cu 40 NPs (4.4% ต่อชั่วโมง) และ Cu2 + (4.2% ต่อชั่วโมง) ได้ดีขึ้น เพื่อตรวจสอบว่า LDH ยกศักยภาพของ CuSO4 เกิด โดย Cu2 + และไม่อื่น ๆ 2 + 4 การเปรียบเทียบระหว่าง CuSO4 และ Na2SO4 ถูกเปรียบเทียบที่ความเข้มข้น equimolar ของ SO42 + ผลพบว่า CuSO4 แต่ Na2SO4 ไม่สามารถยกเลิกเรียก LDH ยืนยันสมมติฐานของเราที่อาจยกเลิกการเรียก LDH ของ CuSO4 เกิดจริงของ Cu2 + แต่ไม่ SO42 + (รูปที่ 5)โพรไฟล์การยกเลิกการเรียก LDH Cu 40 และ Cu2 + เหมือนกัน (รูปที่ 4) ดูเหมือนจะ แนะนำว่า Cu 40 ส่วนใหญ่ยกเลิกเรียก LDH ได้อย่างง่าย ๆ ด้วยการปล่อยประจุทองแดง (Cu + / Cu2 +) การทดสอบสมมติฐานนี้ เราวัดอัตรายุบ Cu 40 ในของเหลวที่ปอดเลียนแบบ และพบว่า Cu 40 มีราคาสูงอัตราที่แน่นอน (รูปที่ 6) ในความคมชัดชัดเจน Cu 40 NPs ได้ครึ่งชีวิตประมาณ 9-10 ชั่วโมงในน้ำมี pH 7.4 ในขณะที่น้อยกว่า 0.1% ของ NPs Ag-40 ส่วนยุบ 30 ชั่วโมงในภายหลัง อย่างไรก็ตาม เราไม่ทราบว่า ประจุละลายมี Cu2 + หรือ Cu +

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจสอบของ LDH Assay
สำหรับการประเมินความเป็นพิษอนุภาคนาโนเราสังเกตความมั่นคงLDH ในสื่อที่แตกต่างกัน เราพบว่ามีเสถียรภาพที่ดีของ LDH ทั้งใน HBSS (แฮงค์สมดุลโซลูชั่นซอล) หรือ RPMI 1640 อาหารเลี้ยงเซลล์ที่มี FBS 1% แต่ไม่ได้อยู่ในน้ำ (รูปที่ 1).
ดังนั้น LDH ศักยภาพการใช้งานของ NPS เหล่านี้ได้รับการประเมินใน RPMI กับ 1% FBS พบว่า TiO2-25 หรือ Ag-40 NPS ไม่ได้มีศักยภาพในการยับยั้งที่สำคัญในอาหารเลี้ยงเซลล์ที่มี 1% ในขณะที่ FBS Cu-40 และ Ag-35 ก็สามารถที่จะยับยั้ง LDH ในลักษณะปริมาณขึ้นอยู่กับ (รูปที่ 2).
ความจริงที่ว่า TiO2-25 NPS ไม่ยับยั้ง LDH สามารถช่วยอธิบายเส้นโค้งปริมาณการตอบสนองของที่ปล่อยออกมาเมื่อสัมผัส LDH ของ R3 / 1 เซลล์ TiO2-25 เช่นในโค้งปริมาณการตอบสนอง (รูปที่ 3) การเพิ่มการตอบสนอง LDH มากกว่าปริมาณที่เพิ่มขึ้นแล้วลดลงเกินกว่าขีด จำกัด ของยาบางอย่าง (100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร).
การเปรียบเทียบระหว่าง Cu-40 NPS และ Cu2 + A พบรูปแบบที่คล้ายกันของพลัง LDH ของ ทั้งสองที่มีความเข้มข้นกรามที่เท่ากันของ Cu NPS และ Cu2 + (รูปที่ 4).
โค้งกระชับสมมติผุหนึ่งเฟสชี้แจงบอกว่าครึ่งชีวิตของ LDH 20 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร Cu-40 NPS (4.4% ต่อชั่วโมง) และ Cu2 + ( 4.2% ต่อชั่วโมง) เป็นอย่างใกล้ชิด ในการตรวจสอบว่า LDH ยับยั้งศักยภาพของ CuSO 4 เกิดจาก Cu2 + และไม่ได้โดย SO 2 + 4, การเปรียบเทียบระหว่าง CuSO 4 และ Na2SO4 ถูกเมื่อเทียบกับที่มีความเข้มข้นของ equimolar SO42 + ผลการศึกษาพบว่า CuSO 4 แต่ไม่ Na2SO4 สามารถยับยั้ง LDH ยืนยันสมมติฐานของเราที่มีศักยภาพการใช้งาน LDH ของ CuSO 4 เป็นจริงเนื่องจากการปรากฏตัวของ Cu2 + แต่ไม่ SO42 + (รูปที่ 5).
โปรไฟล์ที่คล้ายกันของพลัง LDH ของ Cu-40 และ Cu2 + ( รูปที่ 4) ดูเหมือนจะชี้ให้เห็นว่า Cu-40 ส่วนใหญ่ inactivates LDH ผ่านการเปิดตัวของไอออนทองแดง (Cu + และ / หรือ Cu2 +) เพื่อทดสอบสมมติฐานนี้เราวัดอัตราการสลายตัวของ Cu-40 ในของเหลวในปอดจำลองและพบว่า Cu-40 มีอัตราที่สูงแน่นอน (รูปที่ 6) ในทางตรงกันข้ามชัดเจน Cu-40 NPS มีครึ่งชีวิตประมาณ 9-10 ชั่วโมงในน้ำมีค่า pH 7.4 ในขณะที่น้อยกว่า 0.1% ของ Ag-40 NPS ละลาย 30 ชั่วโมงต่อมา แต่เราไม่ทราบว่าไอออนที่ละลายเป็น Cu2 + หรือ Cu +

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจสอบของลีดาเฮ assay เพื่อการประเมินความเป็นพิษของอนุภาคนาโน
เราสังเกต LDH ในสื่อต่าง ๆ เราพบเสถียรภาพที่ดีของลีดาเฮ hbss ( แฮงค์ในสมดุลสารละลายเกลือ RPMI 1640 ) หรือเซลล์วัฒนธรรมอาหารที่ประกอบด้วย 1% FBS แต่ไม่ได้อยู่ในน้ำ ( รูปที่ 1 ) .
ดังนั้น ลีดาเฮทำให้ศักยภาพของเชื้อเพลิงเหล่านี้ ได้แก่ RPMI ด้วย 1% FBSการค้นหาที่ tio2-25 หรือ ag-40 กฟผ. ไม่ได้มีความศักยภาพในเซลล์เพาะเลี้ยง inactivating FBS 1% ในขณะที่ cu-40 ag-35 สามารถยับยั้งและ LDH ในลักษณะปิดกั้น ( รูปที่ 2 ) .
ความจริงที่ว่า tio2-25 โดยไม่ทำให้หลังสามารถช่วยอธิบายความคิดเห็นโค้งออกหลังเมื่อแสงของ R3 / 1 เซลล์ tio2-25 . ในเรื่องความคิดเห็นโค้ง ( รูปที่ 3 )โดยการเพิ่มปริมาณ LDH เพิ่มขึ้นแล้วลดลงเกินขีดจำกัดปริมาณรังสีบางอย่าง ( 100 μ g / ml ) .
เปรียบเทียบระหว่างกฟผ. และ cu-40 CU2 พบโปรไฟล์ที่คล้ายกันของลีดาเฮการยับยั้งของทั้งสองที่กรามสมาธิเท่ากับของ NPS Cu และ CU2 ( รูปที่ 4 )
เส้นโค้งสมมติว่าหนึ่งระยะ exponential ผุชี้ให้เห็นว่าครึ่งชีวิตของลีดาเฮใน 20 μ g / ml cu-40 NPS ( 44 % ต่อชั่วโมง ) และ CU2 ( 4.2 % ต่อชม. ) สนิทกันมาก เพื่อตรวจสอบว่า ลีดาเฮ inactivating ศักยภาพของ CuSO4 เกิดจาก CU2 และไม่โดย 2 4 , การเปรียบเทียบระหว่าง CuSO4 na2so4 เทียบๆและที่ความเข้มข้นของ so42 . พบว่าสามารถยับยั้ง CuSO4 แต่ไม่ na2so4 LDH ,ยืนยันสมมติฐานของเราที่ลีดาเฮทำให้ศักยภาพของ CuSO4 แน่นอนเนื่องจากการแสดงตนของ CU2 แต่ไม่ so42 ( รูปที่ 5 ) .
โปรไฟล์ที่คล้ายกันของ LDH และการยับยั้งของ cu-40 CU2 ( รูปที่ 4 ) ดูเหมือนจะชี้ให้เห็นว่า cu-40 ส่วนใหญ่ inactivates ลีดาเฮผ่านปล่อยไอออนของทองแดง ( Cu ) และ / หรือ CU2 ) เพื่อทดสอบสมมติฐานนี้เราก็วัดอัตราการละลายของ cu-40 จำลองของเหลวในปอด และพบว่า cu-40 มีอัตราสูงจริงๆ ( รูปที่ 6 ) ใสคมชัด cu-40 โดยมีครึ่งชีวิตประมาณ 9-10 ชั่วโมงในของเหลวที่มี pH 7.4 ขณะที่น้อยกว่า 0.1% ของ ag-40 NPS ละลาย 30 ชั่วโมงในภายหลัง แต่เราไม่รู้ว่าละลายไอออนเป็น CU2 หรือลบ .