2.5. Antioxidant enzyme assaysLeave

2.5. Antioxidant enzyme assays
Leaves of both cultivars were sampled on the 0, 7and 14 days
after stress treatments were used for enzyme analysis. Leaves were
frozen in liquid nitrogen immediately after harvesting and stored
at 20 C until enzyme assays. 1 g leaves homogenized in 3 ml
0.05 M Na phosphate buffer (pH 7.8) including 1 mM EDTA and 2%
(w/v) PVPP. The homogenatewere centrifuged at 13,000g for 40 min
at 4 C. Supernatant was used for enzyme activity and protein
content assays. All assays were done at 4 C. Total soluble protein
contents of the enzyme extracts were determined according to
Bradford [27] using BSA as a standard. All spectrophotometric analyses
were conducted on a Shimadzu (UV-1600) spectrophotometer.
Superoxide dismutase (SOD; EC 1.15.1.1) activity assaywas based
on the method of Beauchamp and Fridovich [28] which measures
the inhibition in the photochemical reduction of nitroblue tetrazolium
(NBT) spectrophotometrically at 560 nm. One unit of
enzyme activity was defined as the quantity of SOD required to
produce a 50% inhibition of reduction of NBT and the specific
enzyme activity was expressed as units mg1 protein. The reaction
mixture contained 50 mM Na phosphate buffer (pH 7.8), 33 mM
NBT, 10 mM L-methionine, 0.66 mM EDTA and 0.0033 mM riboflavin.
Reactions were carried out at 25 C, under light intensity of
about 300 mmol1 m1 s1 through 10 min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์ assaysใบของทั้งสองพันธุ์มีตัวอย่างใน 0, 7and 14 วันหลังจากบำบัดความเครียดถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์เอนไซม์ ใบไม้ได้ไนโตรเจนการเหลวแช่แข็งในทันทีหลังจากเก็บเกี่ยว และเก็บไว้ที่ 20 C จนถึง assays เอนไซม์ 1 g ใบ homogenized เป็นกลุ่มใน 3 ml0.05 M นาฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8) EDTA 1 มม.และ 2%(w/v) PVPP Homogenatewere centrifuged ที่ 13000 g ใน 40 นาทีที่ 4 ใช้ C. Supernatant เอนไซม์และโปรตีนเนื้อหา assays ทำทั้งหมด assays ที่ 4 C. โปรตีนละลายน้ำได้ทั้งหมดเนื้อหาของสารสกัดเอนไซม์ถูกกำหนดตามแบรดฟอร์ด [27] โดยใช้บีเอสเอเป็นมาตรฐาน วิเคราะห์ทั้งหมด spectrophotometricได้ดำเนินบนเครื่องทดสอบกรดด่าง Shimadzu (UV-1600)ซูเปอร์ออกไซด์ dismutase (SOD EC 1.15.1.1) assaywas กิจกรรมตามของ Beauchamp และ Fridovich [28] ซึ่งมาตรการยับยั้งในลด photochemical nitroblue tetrazolium(เอ็นบีที) spectrophotometrically ที่ 560 nm หนึ่งหน่วยเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของสดต้องยับยั้ง 50% การลดลงของเอ็นบีทีและการผลิตเอนไซม์ถูกแสดงเป็นหน่วยมิลลิกรัม 1 โปรตีน ปฏิกิริยาผสมอยู่ 50 มม.นาฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8), 33 มม.เอ็นบีที 10 มม. L methionine, 0.66 mM EDTA และไรโบเฟลวิน 0.0033 mMปฏิกิริยาเกิดขึ้นใน 25 C ภายใต้ความเข้มแสงของ300 mmol 1 m 1 s 1 ผ่าน 10 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 สารต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์
ใบพันธุ์ทั้งเก็บตัวอย่างเมื่อวันที่ 0, 7and 14 วัน
หลังจากการรักษาความเครียดถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์การทำงานของเอนไซม์ ใบถูก
แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวทันทีหลังจากเก็บเกี่ยวและเก็บไว้
ที่? 20? C ถึงสมรรถนะของเอนไซม์ 1 กรัมใบหดหายใน 3 มล
0.05 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ M นา (pH 7.8) รวมถึง 1 มิลลิ EDTA และ 2%
(w / v) PVPP homogenatewere หมุนเหวี่ยงที่ 13,000g สำหรับ 40 นาที
ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส สารละลายที่ใช้สำหรับการทำงานของเอนไซม์และโปรตีน
การตรวจเนื้อหา ตรวจทั้งหมดถูกทำที่ 4 องศาเซลเซียส รวมโปรตีนที่ละลายใน
เนื้อหาของสารสกัดเอนไซม์ที่ได้รับการพิจารณาตามที่
แบรด [27] โดยใช้บีเอสเอเป็นมาตรฐาน วิเคราะห์สเปกทั้งหมด
ได้รับการดำเนินการใน Shimadzu (UV-1600) Spectrophotometer
Superoxide dismutase (SOD; อีซี 1.15.1.1) กิจกรรม assaywas ขึ้น
อยู่กับวิธีการและ Beauchamp Fridovich [28] ซึ่งมาตรการ
ยับยั้งในการลดแสงของ nitroblue tetrazolium
( NBT) spectrophotometrically ที่ 560 นาโนเมตร หน่วยหนึ่งใน
กิจกรรมของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของ SOD ที่จำเป็นในการ
ผลิตการยับยั้ง 50% ของการลดลงของ NBT และเฉพาะ
กิจกรรมของเอนไซม์ได้แสดงออกเป็นหน่วย mg? 1 โปรตีน ปฏิกิริยา
ที่มีส่วนผสม 50 บัฟเฟอร์มิลลินาฟอสเฟต (pH 7.8), 33 มิลลิเมตร
NBT, 10 มิลลิ L-methionine, 0.66 มิลลิ EDTA และ 0.0033 มิลลิ riboflavin
ปฏิกิริยาได้ดำเนินการที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสภายใต้ความเข้มแสงของ
ประมาณ 300 มิลลิโมล? 1 M? 1 S? 1 ทั้งหมด 10 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 เอนไซม์สารต้านอนุมูลอิสระ )
ใบทั้ง 2 พันธุ์ จำนวน 10 ด้านบน 0 14 วัน
หลังจากการรักษาความเครียด สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์เอนไซม์ ใบ
แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวทันทีหลังการเก็บเกี่ยว และเก็บไว้
ที่  20  C จนกระทั่งตรวจเอนไซม์ . ใบใน 1 กรัมบด 3 มิลลิลิตร
0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.8 นา ) รวมทั้ง 1 mM EDTA และ 2 %
( w / v ) pvpp . การ homogenatewere ระดับที่ 13000g สำหรับ 40 นาที
ที่ 4  C สูงโดยใช้เอนไซม์และยีนโปรตีน

สามารถทำได้ที่ 4  C ปริมาณโปรตีนของเอนไซม์สกัด
เนื้อหาวิเคราะห์ตาม
แบรดฟอร์ด [ 27 ] ใช้ BSA เป็นมาตรฐาน ทั้งหมดมีวัตถุประสงค์ในการวิเคราะห์ )
Shimadzu ( uv-1600 ) วัสดุ
Superoxide Dismutase ( SOD ; EC 1.15.1 .1 ) กิจกรรมที่ใช้ใน assaywas
วิธี Beauchamp fridovich [ 28 ] และซึ่งมาตรการ
ยับยั้งในการลดแสงของ nitroblue tetrazolium
( NBT ) นี้ที่ 560 นาโนเมตร หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเอนไซม์
หมายถึงปริมาณ SOD ต้อง
ผลิต 50% ลดการยับยั้งของ NBT และกิจกรรมของเอนไซม์ที่เฉพาะเจาะจง
จะแสดงเป็นหน่วยมิลลิกรัม  1 โปรตีนปฏิกิริยา
ส่วนผสมที่มีอยู่ 50 มม. และฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.8 ) 33 mm
ไพรแอล 10 mm 0.66 มม. และ EDTA Riboflavin 0.0033 มม.
ปฏิกิริยาดำเนินการที่ 25  องศาเซลเซียส ภายใต้ความเข้มแสงประมาณ 300 มิลลิโมล 
1 M  1 S  1 ถึง 10 นาที