Virescence of tenweeks stock associ

Virescence of tenweeks stock associated to phytoplasma
infection in Sicily
Salvatore DAVINO1, Alberto CALARI2, Mario DAVINO1, Matilde TESSITORI1, Assunta BERTACCINI2, Maria
Grazia BELLARDi2
1Dipartimento di Scienze e Tecnologie Fitosanitarie, sez. Patologia vegetale, University of Catania, Catania, Italy
2Dipartimento di Scienze e Tecnologie Agroambientali, Patologia vegetale, University of Bologna, Bologna, Italy
Abstract
In April 2007, a severe disease occurred in Sicily (Italy) in a glasshouse cultivation of tenweeks stock belonging to the cultivar
White-Beach. Plants were stunted and rosetted, and the flowers were of small size and characterized by virescence symptoms.
Phytoplasma presence and identity was detected by applying PCR/RFLP techniques and sequencing of 16S ribosomal gene. Phytoplasmas
were identified as belonging to ribosomal subgroup 16SrII-A, never reported before in Italy and showed 99% of homology
with ‘Candidatus Phytoplasma aurantifolia’ and related phytoplasmas. This is the first report of a phytoplasma disease of
tenweeks stock. Considering that this Brassicaceae ornamental species is widely grown in Italy, it could play an important role in
spreading these phytoplasmas, new for Italy.
Key words: Tenweeks stock, virescence, phytoplasma, PCR, RFLP, epidemiology.
Introduction
Tenweeks stock (Matthiola incana R. Br.; Brassicaceae)
is considered one the most common herbaceous
ornamental species cultivated in Sicily (southern Italy)
for late winter and early spring flower production. This
plant is usually susceptible to attacks by several pathogens.
In Italy, protection measures against Peronospora
matthiolae, Xanthomonas campestris pv. incanae, Turnip
mosaic virus, alone or in mixed infection to Cauliflower
mosaic virus (Alioto et al., 1994) are applied.
In April 2007, a severe disease occurred in Sicily
(southern Italy) in a glasshouse cultivation of tenweeks
stock belonging to the cultivar White-Beach. Plants
were stunted and rosetted, but the main symptoms, appearing
at the flowering stage, were malformation of
white flowers and virescence (figure 1). The incidence
of symptomatic plants was about 65%. To verify phytoplasma
presence, PCR (polymerase chain reaction),
RFLP (restriction fragment length polymorphism) and
sequencing were carried out on 16S ribosomal gene.
Figure 1. Virescence and flower malformation on tenweeks
stock flowers.
Materials and methods
Nucleic acids were extracted from 1 g of flower and leaf
tissues from both symptomatic and asymptomatic tenweeks
stock plants using a chloroform/phenol procedure
(Prince et al., 1993). Nucleic acid (0.8 μL), suspended
in TE buffer and diluted to obtain a final concentration
of 20 ng/μL, was added to a PCR reaction mixture
(25 μL total volume) containing 200 μmol of dNTP,
0.8 U of Taq polymerase (Polymed, Florence, Italy),
0.4 μmol of each primer, 10 mM TRIS buffer (pH 8.3),
50 mM HCl, 1.5 mM MgCl2 and 0.001% (w/v) gelatine
as PCR buffer. The primer pairs employed were P1/P7
followed in nested PCR by F1/B6 under PCR conditions
described (Duduk et al., 2004). The PCR products were
detected by 1% agarose gel electrophoresis followed by
ethidium bromide staining and UV observation.
In RFLP analyses, 100-200 ng of F1/B6 products were
digested with TruI, TaqI, and TaiI restriction enzymes at
65 °C for 16 h. The restriction patterns were compared
with those of selected phytoplasma control strains
(Bertaccini et al., 2000) after electrophoresis on a 5%
polyacrylamide gel, ethidium bromide staining, and
photographed under UV using a transilluminator.
F1/B6 amplified product of sample TS1 (figure 2)
was purified using Qiagen PCR Purification Kit and
then sequenced in both directions. The sequences were
then aligned using BLAST engine for local alignment
(version Blast N 2.2.12). The gene sequence (1,379 bp)
obtained was deposited in the NCBI, Bethesda, MD,
USA under accession No. EF570134.
Results
No amplification was obtained after direct PCR from M.
incana samples, only after nested PCR and only samples
from symptomatic flowers showed expected amplification
bands of about 1,300 bp. RFLP analyses with
280
Figure 2. RFLP patterns on polyacrylamide gels of
F1/B6 amplicons from M. incana and selected phytoplasma
reference strains.
3 restriction enzymes revealed profiles indistinguishable
from control sample belonging to 16SrII-A ribosomal
subgroup (SUNHP, Crotalaria juncea witches’ broom
from Thailand) (figure 2). The asymptomatic samples
gave negative results as well as the leaf samples from
symptomatic plants in which flowers resulted positive.
Phylogenetic comparison of the 16S rRNA gene of
TS1 sample confirmed that the phytoplasmas detected
are very closely related to ‘Ca. P. aurantifolia’. The homology
search with blastn on 16S sequence plus spacer
region showed homology values of 99% with several
phytoplasmas belonging to 16SrII ribosomal group.
Discussion
Phytoplasmas are responsible for several hundred of
disease in numerous plant species worldwide and also in
Italy. Their spreading can cause severe losses in many
economical crops and cultivations, especially ornamentals.
Among Brassicaceae, several species of B. oleracea
L. (Botrytis group and Italica group) were described
in Italy to be affected by virescence symptoms
and dwarfing of the inflorescence (Bertaccini et al.,
1983). Moreover, cabbage virescence and phyllody
were described in a high percentage of plants (30-60%).
The molecular characterization of this phytoplasma revealed
that it belonged to 16SrI-B ribosomal subgroup
(Bertaccini et al., 1990; 1992). Later on similar symptoms
on winter oil-seed rape were observed in the
Czech Republic and the molecular identification of involved
phytoplasmas confirmed again association with
16SrI-B ribosomal subgroup (Bertaccini et al., 1998).
Phytoplasmas infecting virescent tenweeks stocks appear
to belong to a ribosomal subgroup (16SrII-A) never
described before in Italy or in Europe and never detected
in Brassicaceae family plants. No other flower
and/or ornamental cultivations were present in the Sicilian
area where M. incana plants were growing; asymptomatic
crops of tomato, pepper and eggplants surrounding
the tenweeks stock greenhouse showed no leafhopper
presence and no leafhoppers were observed inside
this greenhouse. M. incana cultivation was grown from
seeds, 5 cm high plantlets were transplanted in the
greenhouse. Therefore, it is unlikely that the phytoplasma
infection was originated from the environment.
Considering that M. incana is an ornamental species
widely cultivated in Italy, it could play an important role
in spreading these phytoplasmas, new for Italy.
References
ALIOTO D., STAVOLONE L., ALOJ B., 1994.- Gravi alterazioni
indotte da cauliflower mosaic virus (CaMV) e turnip mosaic
virus (TuMV) su Matthiola incana.- Informatore fitopatologico,
44 (6): 43-46.
BERTACCINI A., PISI A., MARANI F., 1983.- Virescenza e fillodia
del cavolfiore e del broccolo.- Informatore Fitopatologico,
33(5): 57-60.
BERTACCINI A., DAVIS R. E., LEE I.-M., 1990.- Distinctions
among mycoplasmalike organisms (MLOs) in Gladiolus,
Ranunculus, Brassica and Hydrangea through detection
with non-radioactive cloned DNA probes.- Phytopathologia
mediterranea, 29: 107-113.
BERTACCINI A., DAVIS R. E., HAMMOND R. W., BELLARDI M.
G., VIBIO M., LEE I.-M., 1992.- Sensitive detection of mycoplasmalike
organisms in field collected and in vitro
propagated plants of Brassica, Hydrangea and Chrysanthemum
by polymerase chain reaction.- Annals of applied Biology,
121: 593-599.
BERTACCINI A., VORACKOVA Z., VIBIO M., FRANOVA J., NAVRATIL
M., SPAK J., NEBESAROVA J., 1998.- Comparison of
phytoplasmas infecting winter oilseed rape in the Czech Republic
with Italian Brassica phytoplasmas and their relationship
to the aster yellows group.- Plant Pathology, 47: 317-
324.
BERTACCINI A., CARRARO L., DAVIES D., LAIMER DA CAMARA
MACHADO M., MARTINI M., PALTRINIERI S., SEEMÜLLER E.,
2000.- Micropropagation of a collection of phytoplasma
strains in periwinkle and other host plants, p. 101. In: 13th
International Congress of IOM, Fukuoka, Japan, 14-19 July.
DUDUK B., BOTTI S., IVANOVIĆ M., KRSTIĆ B., DUKIĆ N.,
BERTACCINI A., 2004.- Identification of phytoplasmas associated
with grapevine yellows in Serbia.- Journal of Phytopathology,
152: 575-579.
PRINCE J. P., DAVIS R. E., WOLF T. K., LEE I.-M., MOGEN B.
D., DALLY E. L., BERTACCINI A., CREDI R., BARBA M.,
1993.- Molecular detection of diverse mycoplasmalike organisms
(MLOs) associated with grapevine yellows and
their classification with aster yellows, X-disease, and elm
yellows MLOs.- Phytopathology, 83: 1130-1137.
Corresponding author: Salvatore DAVINO (e-mail:
[e-mail]), Dipartimento di Scienze e Tecnologie Fitosanitarie,
via S. Sofia 100, 95123 Catania, Italy

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นิทรรศการสีเขียวของ tenweeks หุ้นที่เกี่ยวข้องกับ phytoplasmaติดเชื้อในซิซิลีSalvatore DAVINO1, Alberto CALARI2, Mario DAVINO1, Matilde TESSITORI1, BERTACCINI2 แอสซัน มาเรียโป BELLARDi21Dipartimento di Scienze อี Tecnologie Fitosanitarie เดอะเซสบางแสน Patologia vegetale มหาวิทยาลัย Catania, Catania อิตาลีE Scienze di 2Dipartimento Tecnologie Agroambientali, Patologia vegetale มหาวิทยาลัยโบโลญญา โลน่า อิตาลีบทคัดย่อเมษายน 2550 โรครุนแรงเกิดในซิซิลี (ประเทศอิตาลี) ในเรือนกระจกสำหรับปลูกต้นไม้เพาะปลูกของ cultivar ในสต็อก tenweeksหาดขาว พืชได้แคระ และ rosetted และดอกไม้มีขนาดเล็ก และลักษณะอาการนิทรรศการสีเขียวPhytoplasma สถานะและตัวตนถูกตรวจพบ โดยใช้เทคนิค PCR/RFLP และลำดับเบสของยีน ribosomal 16S Phytoplasmasระบุเป็นของกลุ่มย่อย ribosomal 16SrII-A ไม่เคยรายงานในอิตาลีก่อน และพบว่า 99% ของ homology'Candidatus Phytoplasma aurantifolia' และ phytoplasmas ที่เกี่ยวข้อง เป็นรายงานแรกของโรค phytoplasma ของtenweeks หุ้น พิจารณาว่า ได้ปลูกพันธุ์ไม้ประดับ Brassicaceae นี้มากในอิตาลี มันสามารถมีบทบาทสำคัญในแพร่กระจาย phytoplasmas เหล่านี้ ใหม่สำหรับอิตาลีคำสำคัญ: Tenweeks หุ้น นิทรรศการสีเขียว phytoplasma, PCR, RFLP ระบาดวิทยาการแนะนำTenweeks หุ้น (incana Matthiola R. Br. Brassicaceae)ถือเป็นหนึ่งที่สุดร่วม herbaceousพันธุ์ไม้ประดับที่ปลูกในซิซิลี (ประเทศอิตาลี)ในช่วงปลายฤดูหนาวและต้นฤดูใบไม้ผลิดอกไม้ผลิต นี้พืชมักจะไวต่อการโจมตีจากโรคต่าง ๆ ได้ในอิตาลี ป้องกันวัดจาก Peronosporamatthiolae อ้อย campestris pv incanae หัวผักกาดงานโมเสก ไวรัสเพียงอย่างเดียว หรือติดเชื้อผสมในกะหล่ำดอกมีใช้โมเสกไวรัส (Alioto et al., 1994)เมษายน 2550 โรครุนแรงที่เกิดขึ้นในอิตาลี(ประเทศอิตาลี) ในการเพาะปลูกเรือนกระจกสำหรับปลูกต้นไม้ของ tenweeksหุ้นของ cultivar หาดขาว พืชแคระ และ rosetted แต่อาการหลัก ปรากฏในระยะดอก ถูก malformation ของดอกไม้สีขาวและนิทรรศการสีเขียว (รูป 1) อุบัติการณ์ของพืชอาการได้ประมาณ 65% การตรวจสอบ phytoplasmaสถานะ PCR (ปฏิกิริยาพอลิเมอเรสเชน),RFLP (ข้อจำกัดส่วนความยาวโพลิมอร์ฟิซึม) และลำดับถูกดำเนินบนยีน ribosomal 16Sรูปที่ 1 นิทรรศการสีเขียวและดอกไม้ malformation บน tenweeksดอกไม้หุ้นวัสดุและวิธีการกรดนิวคลีอิกมีสกัดจาก g 1 ของดอกไม้และใบไม้เนื้อเยื่อจากอาการ และแสดงอาการ tenweeksใช้กระบวนงานคลอโรฟอร์ม/วางพืชหุ้น(เจ้าชายเอ็ด al., 1993) กรดนิวคลีอิก (0.8 μL), หยุดชั่วคราวในติบัฟเฟอร์ และผสมเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 20 ng/μL ถูกเพิ่มเข้าไปเป็นส่วนผสมของปฏิกิริยา PCRΜmol 200 ที่มี (25 μL ปริมาตรรวม) ของ dNTP0.8 U ของ Taq พอลิเมอเรส (Polymed ฟลอเรนซ์ อิตาลี),Μmol 0.4 แต่ละพื้น 10 มม.ทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์ (pH 8.3),50 มม. HCl, 1.5 มม. MgCl2 และ gelatine 0.001% (w/v)เป็นบัฟเฟอร์ PCR คู่รองพื้นจ้างได้ P1/P7ตามใน PCR ซ้อน F1/B6 สภาวะ PCRอธิบาย (Duduk et al., 2004) ผลิตภัณฑ์ PCRตรวจพบ โดย electrophoresis เจล 1% agarose ตามด้วยย้อมสีโบรไมด์ ethidium และ UV สังเกตในวิเคราะห์ RFLP, 100-200 ng F1/B6 ผลิตภัณฑ์ได้ย่อย ด้วยเอนไซม์จำกัด TruI, TaqI และ TaiI ที่65 ° C สำหรับ 16 h มีการเปรียบเทียบรูปแบบจำกัดกับสายพันธุ์ควบคุม phytoplasma เลือก(Bertaccini et al., 2000) หลังจาก electrophoresis ใน 5%เจ polyacrylamide ย้อมสี โบรไมด์ ethidium และถ่ายภาพภายใต้ UV ที่ใช้กับ transilluminatorF1/B6 เอาต์ผลิตภัณฑ์อย่าง TS1 (รูป 2)ไม่บริสุทธิ์ที่ใช้ชุดฟอก PCR Qiagen และแล้ว เรียงลำดับทั้งสองทิศ ลำดับที่ได้แล้ว จัดตำแหน่งโดยใช้เครื่องยนต์ระเบิดสำหรับการจัดตำแหน่งภายใน(รุ่น N ระเบิด 2.2.12) ลำดับยีน (1,379 bp)รับได้ฝากใน NCBI เบเทสดา MDสหรัฐอเมริกาภายใต้ทะเบียนหมายเลข EF570134ผลลัพธ์ขยายไม่ได้รับหลังจาก PCR โดยตรงจาก Mตัวอย่าง incana หลังจากซ้อน PCR และตัวอย่างเท่านั้นจากดอกไม้อาการแสดงขยายคาดวงประมาณ 1300 bp. RFLP วิเคราะห์ด้วย280รูปที่ 2 รูปแบบ RFLP ใน polyacrylamide gels ของAmplicons F1/B6 incana เมตรและเลือก phytoplasmaสายพันธุ์อ้างอิงโพรไฟล์ที่จำแนกไม่ได้เปิดเผยข้อจำกัด 3 เอนไซม์จากการควบคุมตัวอย่างเป็นสมาชิกของ A 16SrII ถึง ribosomalกลุ่มย่อย (SUNHP, Crotalaria juncea ทวิทช์ส'ไม้กวาดจากประเทศไทย) (รูปที่ 2) ตัวอย่างแสดงอาการให้ผลเชิงลบเช่นเดียวกับตัวอย่างใบจากพืชอาการที่ดอกไม้ผลบวกการเปรียบเทียบยีน rRNA 16S ของ phylogeneticTS1 ตัวอย่างยืนยันว่า phytoplasmas ที่ตรวจพบมีที่เกี่ยวข้องกับ 'Ca P. aurantifolia' อย่างใกล้ชิด Homologyค้นหา blastn ในลำดับ 16S บวกเป็นตัวเว้นวรรคภูมิภาคแสดงให้เห็นว่าค่า homology 99% ด้วยphytoplasmas เป็นสมาชิกของกลุ่ม ribosomal 16SrIIสนทนาPhytoplasmas จะชอบหลายร้อยของโรค ในชนิดพืชจำนวนมากทั่วโลก และในอิตาลี การแพร่กระจายอาจทำให้ขาดทุนอย่างรุนแรงในหลายพืชเศรษฐกิจและ cultivations, ornamentals โดยเฉพาะระหว่าง Brassicaceae เกิดตื่นสายพันธุ์ต่าง ๆL. (Botrytis กลุ่มและกลุ่ม Italica) ได้อธิบายไว้ในอิตาลีได้รับผลกระทบจากอาการนิทรรศการสีเขียวและ dwarfing ของการ inflorescence (Bertaccini et al.,1983) Moreover นิทรรศการสีเขียวกะหล่ำปลี และ phyllodyได้อธิบายไว้ในของพืช (30-60%)คุณสมบัติระดับโมเลกุลของ phytoplasma นี้เปิดเผยเป็นสมาชิกกลุ่มย่อย ribosomal 16SrI B(Bertaccini et al., 1990, 1992) อาการคล้ายกันในภายหลังในฤดูหนาว น้ำมัน–เมล็ดข่มขืนถูกสังเกตในการสาธารณรัฐเช็กและรหัสโมเลกุลของส่วนร่วมphytoplasmas อีกครั้งได้ยืนยันความสัมพันธ์กับ16SrI B ribosomal กลุ่มย่อย (Bertaccini et al., 1998)ติดหุ้น virescent tenweeks Phytoplasmas ปรากฏเป็นสมาชิกของกลุ่มย่อย ribosomal (16SrII-A) ไม่เคยอธิบายก่อน ในอิตาลี หรือยุโรป และไม่เคยพบในพืชตระกูล Brassicaceae ดอกไม้ไม่หรือ cultivations ที่ประดับอยู่ในซิซิลีที่ตั้งที่ม. incana พืชเติบโต แสดงอาการพืชมะเขือเทศ พริกไทย และ eggplants รอบเรือนกระจกหุ้น tenweeks แสดงให้เห็นว่าไม่มีเพลี้ยจักจั่นสถานะและเพลี้ยไม่ถูกตรวจสอบภายในเรือนกระจกนี้ ม. incana ปลูกได้เติบโตมาจากเมล็ด plantlets สูง 5 cm มี transplanted ในการเรือนกระจก ดังนั้น ก็ไม่น่าที่จะ phytoplasmaติดเชื้อได้มาจากสิ่งแวดล้อมพิจารณาว่า incana เมตรเป็นพันธุ์ไม้ประดับปลูกกันอย่างแพร่หลายในอิตาลี มันสามารถมีบทบาทสำคัญในการแพร่กระจาย phytoplasmas เหล่านี้ ใหม่สำหรับอิตาลีการอ้างอิงD. ALIOTO, STAVOLONE L., ALOJ บี 1994. -Gravi alterazioniindotte ดากะหล่ำโมเสกไวรัส (CaMV) อีหัวผักกาดโมเสกไวรัส (TuMV) su incana Matthiola. -Informatore fitopatologico44 (6): 43-46BERTACCINI A., PISI A., MARANI F., 1983. -Virescenza e fillodiaเด cavolfiore อีเดล broccolo. -Informatore Fitopatologico33(5): 57-60A. BERTACCINI, E. อาร์เดวิส ลี I.-M., 1990. -ความระหว่างชีวิต mycoplasmalike (MLOs) ในแกลดิโอลัสบัทเทอร์คัพ ผัก และไฮเดรนเยียผ่านการตรวจสอบด้วยไม่มีกัมมันตรังสีโคลน DNA คลิปปากตะเข้-Phytopathologiamediterranea, 29:107-113BERTACCINI อาร์แฮมมอนด์อ. เดวิส R. E. ปริมาณ BELLARDI Mกรัม M. VIBIO, LEE I. M., 1992. -ตรวจสอบสำคัญของ mycoplasmalikeสิ่งมีชีวิตในการเพาะเลี้ยง และรวบรวมเผยแพร่พืชผัก ไฮเดรนเยีย และเบญจมาศโดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส-พงศาวดารของชีววิทยาประยุกต์121:593-599อ. BERTACCINI, Z. VORACKOVA, VIBIO เมตร เจ FRANOVA, NAVRATILม. SPAK J., NEBESAROVA J., 1998. -เปรียบเทียบphytoplasmas ติดหนาว oilseed rape ในสาธารณรัฐเช็กphytoplasmas ผักอิตาลีและความสัมพันธ์เพื่อกลุ่มสเตอร์ออกแบบ-พยาธิวิทยาพืช 47:317-324อ. BERTACCINI, CARRARO L., D. เดวีส์ LAIMER ดา CAMARAม. มาชาโด มาร์ตินี่ม. PALTRINIERI S., SEEMÜLLER E.2000. -Micropropagation ชุด phytoplasmaสายพันธุ์ periwinkle และพืชอื่น ๆ โฮสต์ p. 101 ใน: 13สภาระหว่างประเทศของ IOM ฟูกูโอกะ ญี่ปุ่น 14-19 กรกฎาคมDUDUK B. บอตตี S ได้ IVANOVIĆ เมตร บี KRSTIĆ, DUKIĆ N.BERTACCINI A., 2004. -รหัสของ phytoplasmas ที่เกี่ยวข้องมีออก grapevine ในเซอร์เบีย-สมุดรายวันของ Phytopathology152:575 579ปริ๊นซ์ J. P. เดวิส R. E. ดาวเคราะห์ต.คุณ LEE I. M., MOGEN B.D., R. E. L., BERTACCINI A., CREDI ฆ่าเวลา BARBA M.,1993. -ตรวจสอบระดับโมเลกุลของสิ่งมีชีวิต mycoplasmalike หลากหลาย(MLOs) ที่เกี่ยวข้องกับ grapevine ออก และการจัดประเภทออก aster, X-disease และเอล์มออก MLOs. -Phytopathology, 83:1130-1137ผู้เขียนที่เกี่ยวข้อง: Salvatore DAVINO (อีเมล์:[e-mail]), Dipartimento di Scienze e Tecnologie Fitosanitarie,via S. Sofia 100, 95123 Catania, Italy

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

virescence ของ tenweeks หุ้นที่เกี่ยวข้องกับเชื้อไฟโตพลาสมา
การติดเชื้อในซิซิลี
ซั DAVINO1 อัล CALARI2 มาริโอ DAVINO1, มาทิล TESSITORI1, อัสซุน BERTACCINI2 เรีย
Grazia BELLARDi2
1Dipartimento ดิ Scienze อี Tecnologie Fitosanitarie, Sez Patologia Vegetale มหาวิทยาลัยคาตาเนีย, คาตาเนีย, อิตาลี
2Dipartimento ดิ Scienze อี Tecnologie Agroambientali, Patologia Vegetale มหาวิทยาลัยโบโลญญา, โบโลญญาประเทศอิตาลี
บทคัดย่อ
ในเดือนเมษายนปี 2007 เป็นโรคที่รุนแรงที่เกิดขึ้นในซิซิลี (อิตาลี) ในการเพาะปลูกเรือนกระจกของ tenweeks หุ้นที่เป็นของ พันธุ์
ขาวบีช พืชมีลักษณะแคระแกรนและ rosetted และดอกไม้ที่มีขนาดเล็กและลักษณะอาการ virescence
ปรากฏ Phytoplasma และเอกลักษณ์ได้รับการตรวจพบโดยใช้เทคนิค PCR / RFLP และลำดับของยีน 16S โซมอล ไฟโตพลาสมา
ถูกระบุว่าเป็นกลุ่มย่อยโซมอล 16SrII-A, ไม่เคยมีรายงานมาก่อนในอิตาลีและแสดงให้เห็นว่า 99% ของผู้ที่คล้ายคลึงกัน
กับ 'Aurantifolia candidatus Phytoplasma และไฟโตพลาสมาที่เกี่ยวข้อง รายงานนี้เป็นรายงานแรกของโรคเชื้อไฟโตพลาสมาของ
tenweeks หุ้น พิจารณาว่าบราพันธุ์ไม้ประดับที่ปลูกกันอย่างแพร่หลายในประเทศอิตาลีก็อาจมีบทบาทสำคัญใน
การแพร่กระจายของไฟโตพลาสมาเหล่านี้ใหม่สำหรับอิตาลี
คำสำคัญ: Tenweeks หุ้น virescence, เชื้อไฟโตพลาสมา, PCR, RFLP ระบาดวิทยา
เบื้องต้น
Tenweeks หุ้น (Matthiola incana R . สาขา .; บราส)
ถือเป็นหนึ่งที่พบมากที่สุดเป็นต้นไม้
พันธุ์ไม้ประดับที่ปลูกในซิซิลี (ทางตอนใต้ของอิตาลี)
สำหรับฤดูหนาวและการผลิตดอกไม้ต้นฤดูใบไม้ผลิปลาย นี้
พืชมักจะอ่อนไหวต่อการโจมตีโดยหลายเชื้อโรค
ในอิตาลีมาตรการป้องกัน Peronospora
matthiolae, Xanthomonas campestris pv incanae, หัวผักกาด
ไวรัส, คนเดียวหรือในการติดเชื้อผสมกะหล่ำ
ไวรัส (Alioto et al., 1994) ถูกนำมาใช้
ในเดือนเมษายนปี 2007 เป็นโรคที่รุนแรงที่เกิดขึ้นในซิซิลี
(ทางใต้ของอิตาลี) ในการเพาะปลูกเรือนกระจกของ tenweeks
หุ้นที่เป็นของ พันธุ์ขาวบีช พืช
มีลักษณะแคระแกรนและ rosetted แต่อาการหลักปรากฏ
ที่ระยะออกดอกเป็นความไม่สมประกอบของ
ดอกไม้สีขาวและ virescence (รูปที่ 1) อุบัติการณ์
ของพืชมีอาการเป็นประมาณ 65% เมื่อต้องการตรวจสอบเชื้อไฟโตพลาสมา
แสดงตน PCR (ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์)
RFLP (ข้อ จำกัด ส่วนระยะเวลาใน polymorphism) และ
การเรียงลำดับได้ดำเนินการเกี่ยวกับยีน 16S โซมอล
รูปที่ 1 virescence และจุกดอกไม้ tenweeks
หุ้นดอกไม้
วัสดุและวิธีการ
กรดนิวคลีอิกถูกสกัดจาก 1 กรัมของดอกไม้และใบ
เนื้อเยื่อจากทั้ง tenweeks อาการและไม่มีอาการ
พืชหุ้นโดยใช้ขั้นตอนคลอโรฟอร์ม / ฟีนอล
(เจ้าชาย et al., 1993) กรดนิวคลีอิก (0.8 ไมโครลิตร) ที่ถูกระงับ
ในบัฟเฟอร์ TE และเจือจางให้ได้ความเข้มข้นสุดท้าย
20 ng / ไมโครลิตร, ถูกบันทึกอยู่ในส่วนผสมปฏิกิริยา PCR
(25 ไมโครลิตรปริมาตรรวม) ที่มี 200 ไมโครโมลของ dNTP,
0.8 U ของ Taq polymerase (Polymed , ฟลอเรนซ์, อิตาลี),
0.4 ไมโครโมลของแต่ละรองพื้น, 10 มิลลิทริสบัฟเฟอร์ (pH 8.3),
50 มิลลิเมตร HCl 1.5 มิลลิ MgCl2 และ 0.001% (w / v) เจลาติน
เป็นกันชน PCR คู่ไพรเมอร์ที่ใช้เป็น P1 / P7
ตามที่ซ้อนกัน PCR โดย F1 / B6 ภายใต้เงื่อนไข PCR
อธิบาย (Duduk et al., 2004) ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ถูก
ตรวจพบโดย 1% agarose gel electrophoresis เมื่อตามด้วย
การย้อมสี ethidium bromide และการสังเกตรังสียูวี
ใน RFLP วิเคราะห์ 100-200 ng ของ F1 ผลิตภัณฑ์ / B6 ถูก
ย่อยด้วยเสื้อ, Taqi และข้อ จำกัด Taii เอนไซม์ที่
65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 16 ชั่วโมง รูปแบบการ จำกัด ถูกนำมาเปรียบเทียบ
กับผู้ที่เลือกสายพันธุ์ควบคุมเชื้อไฟโตพลาสมา
(Bertaccini et al., 2000) หลังจากที่กระแสไฟฟ้า 5%
เจล polyacrylamide, ethidium bromide การย้อมสีและ
ถ่ายภาพภายใต้แสงยูวีโดยใช้ transilluminator
F1 / B6 สินค้าที่ขยายตัวอย่าง TS1 ( รูปที่ 2)
บริสุทธิ์โดยใช้วิธี PCR Qiagen บริสุทธิ์ชุดและ
ติดใจในทั้งสองทิศทางแล้ว ลำดับถูก
จัดชิดแล้วใช้เครื่องยนต์ระเบิดสำหรับการจัดตำแหน่งในท้องถิ่น
(รุ่นระเบิดไม่มี 2.2.12) ยีน (1,379 bp)
ที่ได้มาฝากไว้ในพับสึ้น, MD,
สหรัฐอเมริกาภายใต้หมายเลขภาคยานุวัติ EF570134
ผลการ
ไม่มีเครื่องขยายเสียงที่ได้รับหลังจากโดยตรง PCR จาก M.
ตัวอย่าง incana แต่หลังจากตัวอย่าง PCR และซ้อนกัน
จากดอกไม้อาการแสดงให้เห็นว่า คาดว่าการขยาย
วงประมาณ 1,300 bp วิเคราะห์ RFLP กับ
280
รูปที่ 2 รูปแบบ RFLP ในเจล polyacrylamide ของ
amplicons F1 / B6 จาก M. incana และเลือกเชื้อไฟโตพลาสมา
สายพันธุ์อ้างอิง
3 เอนไซม์ จำกัด เปิดเผยโปรไฟล์แยกไม่ออก
จากการควบคุมตัวอย่างเป็น 16SrII-โซมอล
กลุ่มย่อย (SUNHP, ปอเทืองแม่มด juncea ' ไม้กวาด
จากประเทศไทย) (รูปที่ 2) ตัวอย่างไม่แสดงอาการ
ให้ผลเชิงลบเช่นเดียวกับตัวอย่างใบจาก
พืชอาการที่ดอกผลบวก
การเปรียบเทียบวิวัฒนาการของยีน 16S rRNA ของ
ตัวอย่าง TS1 ยืนยันว่าไฟโตพลาสมาที่ตรวจพบ
มีความเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับ 'แคลิฟอร์เนีย P. Aurantifolia ' ที่คล้ายคลึงกัน
ค้นหาที่มี blastn ลำดับ 16S บวก spacer
ภูมิภาคมีค่าที่คล้ายคลึงกัน 99% กับหลาย
ไฟโตพลาสมาเป็น 16SrII กลุ่มโซม
อภิปราย
ไฟโตพลาสมามีความรับผิดชอบสำหรับหลายร้อยของ
การเกิดโรคในพืชชนิดต่าง ๆ นานาทั่วโลกและยังอยู่ใน
อิตาลี การแพร่กระจายของพวกเขาสามารถก่อให้เกิดการสูญเสียอย่างรุนแรงในหลาย
พืชประหยัดและปลูกโดยเฉพาะอย่างยิ่งประดับ
ในบราหลายสายพันธุ์ของ B. oleracea
L. (กลุ่ม Botrytis และกลุ่ม Italica) ได้รับการอธิบายไว้
ในอิตาลีที่จะได้รับผลกระทบจากอาการ virescence
และสะโอดสะองของช่อดอก (Bertaccini et al.,
1983) นอกจากนี้ virescence กะหล่ำปลีและ phyllody
ถูกอธิบายไว้ในเปอร์เซ็นต์สูงของพืช (30-60%)
ลักษณะโมเลกุลของเชื้อไฟโตพลาสมานี้เผยให้เห็น
ว่ามันเป็น 16SrI-B โซมอลกลุ่มย่อย
(Bertaccini et al, 1990;. 1992) ต่อมาอาการคล้าย
กับฤดูหนาวข่มขืนน้ำมันเมล็ดพบใน
สาธารณรัฐเช็กและบัตรประจำตัวของโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับ
ไฟโตพลาสมาได้รับการยืนยันอีกครั้งร่วมกับ
16SrI-B โซมอลกลุ่มย่อย (Bertaccini et al., 1998)
ไฟโตพลาสมาติดไวรัส tenweeks virescent หุ้นปรากฏ
จะเป็น กลุ่มย่อยโซม (16SrII-) ไม่เคย
อธิบายไว้ก่อนในอิตาลีหรือในยุโรปและไม่เคยตรวจพบ
ในพืชตระกูลบราส ไม่มีดอกไม้อื่น ๆ
และ / หรือปลูกประดับอยู่ในปัจจุบันในซิซิลี
พื้นที่ที่ M. พืช incana มีการเติบโต; โรค
พืชมะเขือเทศพริกและมะเขือรอบ
เรือนกระจก tenweeks หุ้นไม่พบเพลี้ยจักจั่น
แสดงตนและไม่มีเพลี้ยจักจั่นพบภายใน
เรือนกระจกนี้ การเพาะปลูก M. incana ได้เติบโตขึ้นจาก
เมล็ด 5 เซนติเมตรต้นสูงได้รับการปลูกใน
เรือนกระจก ดังนั้นจึงไม่น่าที่เชื้อไฟโตพลาสมา
การติดเชื้อได้รับมาจากสภาพแวดล้อมในการ
พิจารณาว่าเอ็ม incana เป็นพันธุ์ไม้ประดับ
ที่ปลูกกันอย่างแพร่หลายในประเทศอิตาลีก็อาจมีบทบาทสำคัญ
ในการแพร่กระจายของไฟโตพลาสมาเหล่านี้ใหม่สำหรับอิตาลี
อ้างอิง
Alioto D. , STAVOLONE ลิตรÅlöjบี 1994.- Gravi alterazioni
indotte ไวรัสดากะหล่ำกระเบื้องโมเสค (CaMV) จหัวผักกาดกระเบื้องโมเสค
ไวรัส (TuMV) su Matthiola incana.- Informatore fitopatologico,
44 (6): 43-46
BERTACCINI A. , โดนัท . MARANI F. , 1983.- Virescenza อี fillodia
เด cavolfiore อีเดล broccolo.- Informatore Fitopatologico,
33 (5): 57-60
BERTACCINI A. , DAVIS RE, LEE I. -M. , 1990.- ความแตกต่าง
ระหว่าง ชีวิต mycoplasmalike (พลาสมา) ในพืชไม้ดอก,
Ranunculus, Brassica และไฮเดรนเยียผ่านการตรวจสอบ
ที่ไม่ใช่กัมมันตรังสีโคลนดีเอ็นเอ probes.- Phytopathologia
Mediterranea, 29: 107-113
BERTACCINI A. , DAVIS RE แฮมมอนด์ RW, Bellardi เอ็ม
จี, Vibio M. , I. LEE-M. , 1992.- การตรวจสอบที่มีความสำคัญของ mycoplasmalike
ชีวิตในด้านการเก็บรวบรวมและในหลอดทดลอง
ขยายพันธุ์พืชของ Brassica, ไฮเดรนเยียและดอกเบญจมาศ
โดยวิธี Polymerase chain reaction.- พงศาวดารชีววิทยาประยุกต์,
121: 593-599
BERTACCINI A. , VORACKOVA Z. , Vibio เมตร FRANOVA เจnavrátil
เมตร SPAK เจ NEBESAROVA เจ 1998.- เปรียบเทียบการ
ติดไวรัสไฟโตพลาสมาฤดูหนาวข่มขืนในสาธารณรัฐเช็ก
ที่มีไฟโตพลาสมา Brassica อิตาเลียนและความสัมพันธ์ของพวกเขา
จะ สีเหลืองดอกแอสเตอร์ group.- โรคพืช 47: 317-
324
BERTACCINI A. , CARRARO ลิตร DAVIES D. , Laimer DA CAMARA
MACHADO เอ็ม, มาร์ติเมตร Paltrinieri เอSEEMÜLLER E. ,
2000.- การขยายพันธุ์ คอลเลกชันของเชื้อไฟโตพลาสมา
ในสายพันธุ์หอยขมและพืชอื่น ๆ P 101 ใน: 13
ระหว่างการประชุม IOM, ฟุกุโอกะ, ญี่ปุ่น, 14-19 กรกฎาคม
Duduk บีเอส Botti, Ivanovic เมตรKrstićบี Dukic N. ,
BERTACCINI A. , 2004.- บัตรประจำตัวของไฟโตพลาสมาที่เกี่ยวข้อง
ที่มีสีเหลืององุ่นใน Serbia.- วารสาร Phytopathology,
152: 575-579
PRINCE JP, DAVIS RE หมาป่า TK, LEE I. -เมตร MOGEN บี
ดี, DALLY EL, BERTACCINI A. , Credi หม่อมราชวงศ์ BARBA M. ,
1993.- การตรวจจับโมเลกุลของสิ่งมีชีวิตที่หลากหลาย mycoplasmalike
(พลาสมา) ที่เกี่ยวข้องกับสีเหลืององุ่นและ
การจัดหมวดหมู่ของพวกเขาที่มีสีเหลืองดอกแอสเตอร์, X-โรคและเอล์ม
สีเหลือง MLOs.- Phytopathology, 83: 1130-1137
ผู้เขียนรับผิดชอบ: ซัลวาต DAVINO (E-mail:
[e-mail]) Dipartimento ดิ Scienze อี Tecnologie Fitosanitarie,
ผ่านทางเอโซเฟีย 100, 95123 Catania, อิตาลี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

virescence ของ tenweeks หุ้นที่เกี่ยวข้องกับเชื้อไฟโตพลาสมา

ซัลวาทอร์ davino1 การติดเชื้อในซิซิลี , อัลแบร์โต calari2 , มาริโอ davino1 matilde tessitori1 assunta bertaccini2 , , ,

1dipartimento di Grazia bellardi2 มาเรีย scienze E tecnologie fitosanitarie แซด , . patologia ถั่ว , มหาวิทยาลัยคาตาเนีย Catania , อิตาลี ,
2dipartimento di scienze E tecnologie agroambientali patologia ถั่ว , ,มหาวิทยาลัยโบโลญญา , โบโลญญา , อิตาลี

นามธรรมในเดือนเมษายน 2007 , โรครุนแรงที่เกิดขึ้นในซิซิลี ( อิตาลี ) ในเรือนกระจกเพาะปลูกของหุ้น tenweeks เป็นของพันธุ์
White Beach พืชแคระ และ rosetted และดอกไม้ขนาดเล็ก ลักษณะอาการ virescence .
สถานะไฟโตพลาสมา เอกลักษณ์ และถูกตรวจพบโดยการใช้เทคนิค PCR / RFLP และการหาลำดับเบสของ 16S ไรโบโซมอล ยีน phytoplasmas
ถูกระบุว่าเป็นของ ไรโบโซมอล กลุ่มย่อย 16srii-a ไม่เคยมีมาก่อนในประเทศอิตาลีและพบว่า 99% ของ homology
' candidatus เชื้อไฟโตพลาสมา aurantifolia ' และที่เกี่ยวข้อง phytoplasmas . นี่คือรายงานแรกของโรคไฟโตพลาสมาของหุ้น
tenweeks .นี่ Brassicaceae ประดับชนิดที่นิยมปลูกกันอย่างแพร่หลายใน อิตาลี สามารถมีบทบาทสำคัญในการแพร่กระจาย
phytoplasmas เหล่านี้ใหม่สำหรับอิตาลี .
คำสำคัญ : tenweeks หุ้น virescence เชื้อไฟโตพลาสมา , PCR , : , ,

tenweeks ระบาดวิทยา หุ้นแนะนำ ( matthiola incana R . br . Brassicaceae )
ถือว่าเป็นหนึ่ง
ต้นไม้ที่พบบ่อยที่สุดชนิดที่ปลูกประดับในซิซิลี ( อิตาลีตอนใต้ )
สำหรับปลายฤดูหนาว และการผลิตดอกไม้ต้นฤดูใบไม้ผลิ พืชชนิดนี้มักจะเสี่ยงต่อการถูกโจมตีด้วย

หลายเชื้อโรค ใน อิตาลี การคุ้มครองมาตรการต่อต้าน peronospora
matthiolae Xanthomonas campestris pv , . incanae , หัวผักกาด
โมเสกไวรัสอย่างเดียวหรือผสมการติดเชื้อกะหล่ำดอก
mosaic virus ( อัลลีโอโต้ et al . , 1994 )
ใช้ .ในเดือนเมษายน 2007 , โรครุนแรงที่เกิดขึ้นในซิซิลี
( ภาคใต้ของอิตาลี ) ในเรือนกระจกเพาะปลูกของหุ้น tenweeks
เป็นของพันธุ์ White Beach พืช
เป็นแคระ และ rosetted แต่อาการหลัก ปรากฏ
ที่ระยะออกดอก , ผิดปกติ
ดอกสีขาวและ virescence ( รูปที่ 1 ) การเกิดอาการของพืช
ประมาณ 65% เพื่อตรวจสอบสถานะไฟโตพลาสมา
,PCR ( ปฏิกิริยาลูกโซ่ )
RFLP ( Restriction fragment length polymorphism ) และได้ดำเนินการบน
ลำดับ 16S ไรโบโซมอล ยีน .
1 รูป virescence ผิดปกติและดอกไม้บน tenweeks
หุ้นดอกไม้

กรดนิวคลีอิกวัสดุและวิธีการสกัดจาก 1 กรัมของดอกไม้และเนื้อเยื่อใบ
ทั้งอาการและอาการ tenweeks
หุ้นพืชโดยใช้คลอโรฟอร์มขั้นตอน
/ ฟีนอล( เจ้าชาย et al . , 1993 ) กรดนิวคลีอิก ( 0.8 μ L ) ระงับ
ใน TE บัฟเฟอร์ และเจือจางให้ได้ความเข้มข้นสุดท้าย
20 นาโนกรัม / μล. เพิ่มให้เพื่อตรวจหาส่วนผสม
( เล่ม 25 μผมทั้งหมดที่มี 200 μโมลของ dntp
U ของแท็กใช้ , 0.8 ( polymed , ฟลอเรนซ์ , อิตาลี )
0 μโมล ของแต่ละแนวทาง บัฟเฟอร์หรือ 10 มม. ( pH 8.3 )
hcl 50 มม. และ 1.5 มม. ชุด 0.001 % ( w / v ) วุ้น
เช่น PCR bufferไพรเมอร์คู่ใช้ P1 / p7
ตามด้วย PCR โดยใน F1 / B6 ภายใต้เงื่อนไข PCR
อธิบาย ( นั่งอยู่ et al . , 2004 ) ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกพบโดย % 1 (

เจลตามด้วยคู่ bromide staining และการสังเกต UV .
ในการวิเคราะห์ RFLP 100-200 นาโน , ผลิตภัณฑ์ F1 / B6
ถูกย่อยด้วย taqi ทรุย , สูง , และเอนไซม์ที่ 65 ° C
16 ชั่วโมงจำกัดรูปแบบการเปรียบเทียบกับผู้ที่เลือกสายพันธุ์

( การควบคุมไฟโตพลาสมา bertaccini et al . , 2000 ) หลังไมด์เจลอิเลคใน 5 %
, คู่ bromide staining และถ่ายภาพภายใต้แสงยูวีที่ใช้ transilluminator
.
/ B6 F1 ขยายผลิตภัณฑ์ของตัวอย่าง ts1 ( รูปที่ 2 )
บริสุทธิ์โดยใช้ชุดฟอก โดย QIAGEN และ
แล้วนี้ในทั้งสองทิศทางลำดับถูก
แล้วชิดใช้ระเบิดเครื่องยนต์สำหรับ
แนวท้องถิ่น ( รุ่นระเบิด n 2.2.12 ) ยีน ลำดับ ( 1272 BP )
ได้รับเงินใน ncbi , Bethesda , MD ,
สหรัฐอเมริกาภายใต้การไม่ ef570134 .

ไม่มีผลที่ได้รับโดยตรงจาก ( หลัง ) .
incana ตัวอย่าง หลังจากอยู่วิธี PCR และตัวอย่างจากอาการให้ดอกไม้

คาดว่าจะเพิ่มจำนวน