defined following an experiment whe

defined following an experiment where different cell concentrations
(104 CFU/ml, 106 CFU/ml and 108 CFU/ml) of S. cerevisiae were
tested. The influence of medium pH on H. fasciculare activity was
assessed by adjusting the pH value of PDA medium to one unit
below and to one unit above the usual pH value (5.7). After defining
the bioassay culture medium and the inoculum size, the temperature
of the assay was established by studying its effects on fungal
antagonistic activity. In this case, the incubation of the overlaid
plates was performed at 20 ◦C, 25 ◦C, 30 ◦C, 35 ◦C and 40 ◦C.
Unless otherwise stated, all the optimization assays were performed
at least 3 times, each one in triplicate.
Influence of environmental factors on antagonist compound(s)
production
The effect of fungal growth on antimicrobial potential (AP) was
determined culturing H. fasciculare during different periods (2, 4, 6,
8, 10 and 12 days) or at different temperature values (20 ◦C, 25 ◦C,
30 ◦C, 35 ◦C and 40 ◦C) prior to the antimicrobial activity assay. To
evaluate the occurrence of microbial death processes when testing
the effect of growth temperature on fungal antimicrobial activity,
methylene blue (0.0001%, w/v) was added to the yeast overlay
suspensions.
Results
Design of a single cell-based assay to evaluate the antimicrobial
activity of filamentous fungi
To select a suitable assay medium to evaluate fungal antimicrobial
activity, the modified Melin-Norkrans (MMN) and Potato
Dextrose Agar (PDA) media were tested. The assay was performed
by overlaying a suspension of the sensitive indicator microbial
strain (S. cerevisiae; 106 CFU/ml) onto the surface of actively growing
fungal plates (6-days), which were then further incubated for
48 h in the dark, at 25 ◦C. H. fasciculare displayed an improved
growth in MMN than in PDA medium (Fig. 1A). Surrounding
mycelia, a yeast growth inhibition zone (inhibition halo) was
detected in both culture media assays, corresponding to the fungal
antagonistic action over the tested yeast. Considering the
ratio between inhibition halo and fungal growth diameters as
the measure of antimicrobial activity, the antimicrobial potential
(AP) displayed by PDA-grown fungus was 1.4-fold higher than
the one observed for MMN-grown fungus. For this reason, the
following assays were always performed using PDA as the assay
medium.
The observed difference in fungal antimicrobial activity can be
possibly due to the medium composition, but differences in pH values
might also have been responsible for such an AP variation: while
MMN medium has a pH value of 6.6, the pH of PDA is 5.7. To clarify if
pH influences fungal antimicrobial activity, the pH of PDA medium
was adjusted to one unit below (4.7) and to one unit above (6.7) the
usual value and parallel antimicrobial assays were then performed
(results not shown). The highest AP value was found for the lowest
medium pH (AP = 2.92
±
0.16; pH = 4.7), followed by the highest
pH value tested (AP = 2.50 ± 0.09; pH = 6.7) whereas the lowest AP
value was obtained for the common PDA pH value (AP = 1.95
±
0.09;
pH = 5.7), suggesting an effective influence of this parameter on H.
fasciculare antimicrobial activity.
The inoculum of the sensitive indicator strain should also be
defined in order to establish standard and controlled experimental
conditions for a bioassay. To select the best microbial inoculum
size, H. fasciculare cultured for 6 days was covered with overlays
containing 104, 106 or 108 CFU/ml of S. cerevisiae. Growth inhibition
zones became smaller with the increase of inoculum size

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำหนดวิธีการทดลองแตกต่างความเข้มข้นของเซลล์(104 CFU/ml, 106 CFU/ml และ 108 CFU/ml) ของ S. cerevisiae มีทดสอบ อิทธิพลของค่า pH ปานกลางกิจกรรม H. fasciculare ได้ประเมิน โดยการปรับค่า pH ของ PDA กลางหนึ่งหน่วยด้านล่าง และด้านบนหนึ่งหน่วย pH ปกติค่า (5.7) หลังจากกำหนดสื่อวัฒนธรรม bioassay และขนาด inoculum อุณหภูมิของการวิเคราะห์ถูกตั้งขึ้น โดยศึกษาผลของเชื้อรากิจกรรมต่อต้าน ในกรณีนี้ คณะทันตแพทยศาสตร์ของที่ overlaidทำแผ่นที่ 20 ◦C, 25 ◦C, 30 ◦C, 35 ◦C และ 40 ◦Cเว้นแต่จะระบุเป็นอย่างอื่น ดำเนิน assays เพิ่มประสิทธิภาพทั้งหมดครั้งที่ 3 แต่ละคนใน triplicateอิทธิพลของปัจจัยแวดล้อมเป็นศัตรู compound(s)ผลิตผลของการเจริญเติบโตของเชื้อราบนศักยภาพจุลินทรีย์ (AP) ได้กำหนด culturing H. fasciculare ในระหว่างรอบระยะเวลาที่แตกต่างกัน (2, 4, 6วันที่ 8, 10 และ 12) หรือ ที่อุณหภูมิต่างกันค่า (20 ◦C, 25 ◦C30 ◦C, 35 ◦C และ 40 ◦C) ก่อนการทดสอบกิจกรรมจุลินทรีย์ ถึงประเมินการเกิดขึ้นของกระบวนการจุลินทรีย์ตายเมื่อทดสอบผลของการเจริญเติบโตอุณหภูมิกิจกรรมจุลินทรีย์เชื้อราบลูเมทิลีนได (0.0001%, w/v) ถูกเพิ่มเข้ามากับการซ้อนทับของยีสต์บริการผลลัพธ์ออกแบบทดสอบเดียวเซลล์ตามการประเมินการต้านจุลชีพกิจกรรมของเชื้อรา filamentousการเลือกสื่อเหมาะสมวิเคราะห์ประเมินจุลินทรีย์เชื้อรากิจกรรม Melin Norkrans (MMN) เปลี่ยนแปลงและมันฝรั่งทดสอบสื่อ Agar (PDA) ขึ้น ทำการทดสอบโดยปรากฏตัวบ่งชี้สำคัญที่จุลินทรีย์ระงับต้องใช้ (S. cerevisiae; 106 CFU/ml) ลงบนผิวกำลังเติบโตincubated แผ่นเชื้อรา (6-วัน), ซึ่งถูกแล้วเพิ่มเติมสำหรับh 48 ในมืด ที่ 25 ◦C H. fasciculare แสดงการปรับปรุงเติบโตใน MMN กว่าใน PDA (Fig. 1A) สภาพแวดล้อมmycelia โซนยับยั้งการเจริญเติบโตของยีสต์ (ยับยั้ง halo) ได้พบในทั้ง assays สื่อวัฒนธรรม ที่สอดคล้องกับเชื้อราการกระทำที่ต่อต้านกว่ายีสต์ผ่านการทดสอบ พิจารณาอัตราส่วนระหว่าง halo ยับยั้งและสมมาตรเจริญเติบโตของเชื้อราเป็นการวัดกิจกรรมจุลินทรีย์ จุลินทรีย์เป็น(AP) แสดงโดยเชื้อราโต PDA มี 1.4-fold มากกว่าได้สังเกตสำหรับเชื้อราโต MMN ด้วยเหตุนี้ การต่อไปนี้ assays เสมอดำเนินใช้ PDA เป็นการทดสอบสื่อสามารถสังเกตความแตกต่างในกิจกรรมจุลินทรีย์เชื้อราอาจเป็น เพราะองค์ประกอบกลาง แต่ความแตกต่างของค่า pHอาจยังมีรับผิดชอบเช่นปรับเป็น AP: ในขณะที่MMN กลางมีค่า pH 6.6, pH ของ PDA เป็น 5.7 เพื่อชี้แจงถ้าค่า pH มีผลต่อเชื้อราจุลินทรีย์กิจกรรม pH ของตัวกลาง PDAมีการปรับปรุงหน่วยล่าง (4.7) และหนึ่งหน่วยเหนือ (6.7)ค่าปกติและจุลินทรีย์ assays ขนานแล้วดำเนิน(ผลลัพธ์จากการไม่แสดง) ค่า AP สูงสุดพบในสุดค่า pH ปานกลาง (AP = 2.92±0.16 pH = 4.7), ไปมาแล้ว โดยสูงสุดทดสอบค่า pH (AP = 2.50 ± 0.09; pH = 6.7) ในขณะที่จุดต่ำสุดค่าได้รับสำหรับค่า pH PDA ทั่วไป (AP = 1.95±0.09pH = 5.7), แนะนำการใช้อิทธิพลของพารามิเตอร์นี้ H.fasciculare จุลินทรีย์กิจกรรมนอกจากนี้ยังควร inoculum ของสายพันธุ์ตัวบ่งชี้ที่สำคัญกำหนดเพื่อสร้างมาตรฐาน และควบคุมการทดลองเงื่อนไขสำหรับการ bioassay เลือก inoculum จุลินทรีย์ส่วนขนาด H. fasciculare อ่าง 6 วันถูกปกคลุม ด้วยซ้อนทับประกอบด้วย 104, 106 หรือ 108 CFU/ml ของ S. cerevisiae ยับยั้งการเจริญเติบโตโซนเป็นขนาดเล็ก มีการเพิ่มขึ้นของขนาด inoculum

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่กำหนดไว้ดังต่อไปนี้การทดลองที่มีความเข้มข้นของเซลล์ที่แตกต่างกัน
(104 CFU / ml 106 CFU / มล. และ 108 CFU / ml) ของเอส cerevisiae ถูก
ทดสอบ อิทธิพลของพีเอชเอชกลางในกิจกรรม fasciculare ได้รับการ
ประเมินโดยการปรับค่าพีเอชของกลาง PDA เพื่อหนึ่งหน่วย
ด้านล่างและด้านบนหนึ่งหน่วยค่าพีเอชปกติ (5.7) หลังจากการกำหนด
อาหารเลี้ยงเชื้อชีวภาพและขนาดหัวเชื้ออุณหภูมิ
ของการทดสอบได้รับการจัดตั้งขึ้นโดยการศึกษาผลกระทบต่อเชื้อรา
ปฏิปักษ์กิจกรรม ในกรณีนี้การบ่มที่วางซ้อน
แผ่นได้รับการดำเนินการที่ 20 ◦C 25 ◦C 30 ◦C 35 ◦Cและ 40 ◦C.
เว้นแต่จะระบุไว้เป็นอย่างอื่นในการเพิ่มประสิทธิภาพการตรวจได้ดำเนินการ
อย่างน้อย 3 ครั้งแต่ละคน ในเพิ่มขึ้นสามเท่า.
อิทธิพลของปัจจัยแวดล้อมในสารประกอบศัตรู (s)
การผลิต
ผลของการเจริญเติบโตของเชื้อราที่มีศักยภาพในการต้านจุลชีพ (AP) ได้รับการ
กำหนดเพาะเลี้ยง H. fasciculare ในช่วงระยะเวลาที่แตกต่างกัน (2, 4, 6,
8, 10 และ 12 วัน) หรือที่ ค่าอุณหภูมิที่แตกต่างกัน (20 ◦C 25 ◦C,
30 ◦C 35 ◦Cและ 40 ◦C) ก่อนที่จะมีการทดสอบฤทธิ์ต้านจุลชีพ เพื่อ
ประเมินการเกิดขึ้นของกระบวนการตายของจุลินทรีย์เมื่อการทดสอบ
ผลของอุณหภูมิในการเจริญเติบโตของเชื้อราฤทธิ์ต้านจุลชีพ,
เมทิลีนสีฟ้า (0.0001% w / v) ถูกบันทึกอยู่ในซ้อนทับยีสต์
สารแขวนลอย.
ผลการ
ออกแบบการทดสอบเซลล์เดียวที่ใช้ในการประเมิน ยาต้านจุลชีพ
กิจกรรมของเชื้อรา
ในการเลือกสื่อการทดสอบที่เหมาะสมในการประเมินยาต้านจุลชีพเชื้อรา
กิจกรรมแก้ไข Melin-Norkrans (MMN) และมันฝรั่ง
Dextrose Agar (PDA) สื่อได้มีการทดสอบ การทดสอบได้ดำเนินการ
โดยการซ้อนทับกันสะเทือนของตัวบ่งชี้ที่มีความสำคัญของจุลินทรีย์
สายพันธุ์ (S. cerevisiae; 106 CFU / ml) ลงบนพื้นผิวของงานการเจริญเติบโต
ของเชื้อราแผ่น (6 วัน) ซึ่งได้รับการบ่มแล้วต่อไปสำหรับ
48 ชั่วโมงในความมืด ที่ 25 ◦CH fasciculare แสดงที่ดีขึ้น
การเจริญเติบโตใน MMN กว่าในกลาง PDA (รูป. 1A) รอบ
เส้นใย, โซนการยับยั้งการเจริญเติบโตของยีสต์ (รัศมีการยับยั้ง) ได้รับการ
ตรวจพบในการตรวจทั้งสื่อวัฒนธรรมที่สอดคล้องกับเชื้อรา
ปฏิปักษ์ในช่วงการดำเนินการทดสอบยีสต์ เมื่อพิจารณาถึง
อัตราส่วนระหว่างรัศมีการยับยั้งและขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางเจริญเติบโตของเชื้อราเป็น
ตัวชี้วัดของฤทธิ์ต้านจุลชีพที่มีศักยภาพต้านจุลชีพ
(AP) ที่แสดงจากเชื้อรา PDA ปลูกเป็น 1.4 เท่าสูงกว่า
หนึ่งตั้งข้อสังเกตสำหรับเชื้อรา MMN ปลูก ด้วยเหตุนี้
การตรวจต่อไปนี้ได้ดำเนินการมักจะใช้เป็น PDA ทดสอบ
กลาง.
ความแตกต่างที่สังเกตได้ในฤทธิ์ต้านจุลชีพเชื้อราสามารถ
อาจจะเป็นเพราะองค์ประกอบกลาง แต่ความแตกต่างในค่าพีเอช
อาจต้องรับผิดชอบกับการเปลี่ยนแปลงดังกล่าว AP: ในขณะที่
กลาง MMN มีค่าพีเอช 6.6, ค่าพีเอชของ PDA คือ 5.7 ชี้แจงหาก
มีอิทธิพลต่อค่า pH ฤทธิ์ต้านจุลชีพเชื้อราค่า pH ของกลาง PDA
ได้รับการปรับให้หน่วยหนึ่งดังต่อไปนี้ (4.7) และหน่วยหนึ่งดังกล่าวข้างต้น (6.7)
ค่าปกติและการตรวจยาต้านจุลชีพขนานได้ดำเนินการแล้ว
(ผลไม่แสดง) ค่า AP ที่สูงที่สุดก็พบว่าต่ำสุด
ค่า pH กลาง (AP = 2.92
±
0.16; ค่า pH = 4.7) ตามด้วยสูงสุด
ค่าพีเอชที่ผ่านการทดสอบ (AP = 2.50 ± 0.09; ค่า pH = 6.7) ในขณะที่ต่ำสุด AP
มูลค่าที่ได้รับสำหรับ ค่าพีเอชพีดีเอที่พบบ่อย (AP = 1.95
±
0.09;
ค่า pH = 5.7) แสดงให้เห็นอิทธิพลที่มีประสิทธิภาพของพารามิเตอร์นี้บนเอช
. fasciculare ฤทธิ์ต้านจุลชีพ
ของเชื้อความเครียดตัวบ่งชี้ที่มีความสำคัญควรที่จะ
กำหนดเพื่อสร้างมาตรฐานและควบคุมการทดลอง
เงื่อนไข สำหรับชีวภาพ ในการเลือกหัวเชื้อจุลินทรีย์ที่ดีที่สุด
ขนาด H. fasciculare เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 6 วันที่ถูกปกคลุมด้วยภาพซ้อนทับ
ที่มี 104, 106 หรือ 108 CFU / ml S. cerevisiae ยับยั้งการเจริญเติบโตของ
โซนกลายเป็นขนาดเล็กที่มีการเพิ่มขึ้นของขนาดหัวเชื้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นิยามต่อไปนี้การทดลองที่ความเข้มข้นเซลล์แตกต่างกัน
( 104 CFU / ml , 106 cfu / ml และ 108 CFU / ml ) ของ S . cerevisiae คือ
ทดสอบ อิทธิพลของความเป็นกรด ( H .
fasciculare กิจกรรมประเมิน โดยการปรับค่าความเป็นกรด - ด่างของ PDA ขนาดหนึ่งหน่วย
ด้านล่างและหนึ่งหน่วยเหนือค่า pH ปกติ ( 5 ) หลังจากกำหนด
ไม่สื่อวัฒนธรรมและเชื้ออุณหภูมิ
ขนาดของแบคทีเรีย ก่อตั้งขึ้นโดยศึกษาผลของเชื้อราปฏิปักษ์ในกิจกรรม

ในกรณีนี้ บ่มเพาะของบุ
แผ่นแสดงที่ 20 ◦ C 25 ◦ C 30 ◦ C , 35 ◦ C และ 40 ◦ C .
) ทั้งหมดยกเว้นที่ระบุเป็นอย่างอื่น การเพิ่มจำนวน
อย่างน้อย 3 ครั้ง แต่ละคนทั้งสามใบ อิทธิพลของปัจจัยทางสิ่งแวดล้อม
สารประกอบ ( ปฏิปักษ์ s )

ผลิตผลกระทบของศักยภาพต้านเชื้อรา ( AP )
. fasciculare ในระหว่างรอบระยะเวลาที่แตกต่างกันการกำหนด ( 2 , 4 , 6 ,
8 , 10 และ 12 วัน ) หรือ ค่าอุณหภูมิที่แตกต่างกัน ( 20 ◦ C 25 ◦ C
30 ◦ C , 35 ◦ C และ 40 ◦ C ) ก่อน วิเคราะห์ฤทธิ์ต้านจุลชีพ . ประเมินการเกิดการตาย


เมื่อจุลินทรีย์กระบวนการทดสอบผลของอุณหภูมิต่อกิจกรรมการต้านเชื้อรา
เมทธิลีนบลู ( 0.0001 % W / V ) คือการเพิ่มยีสต์แขวนลอยซ้อน

.
ผลการออกแบบของการทดสอบปัจจุบันเดียวเพื่อประเมินฤทธิ์ต้านจุลชีพของเส้นใยเชื้อรา

เลือกขนาดกลาง ( เหมาะที่จะประเมินฤทธิ์ต้านจุลชีพ
เชื้อรา , ดัดแปลง เมลิน norkrans ( MMN ) และมันฝรั่ง
Dextrose Agar ( PDA ) สื่อที่ผลิตได้ ( ทำการ
โดยการซ้อนระงับตัวบ่งชี้ที่มีสายพันธุ์จุลินทรีย์
( S . cerevisiae ; 106 cfu / ml ) ลงบนพื้นผิวของแผ่นงานเติบโต
รา ( 6-days ) ซึ่งเป็นอีก 20% โดย
48 ชั่วโมงในความมืด ที่ 25 ◦ C . H . fasciculare แสดงการปรับปรุง
การเจริญเติบโตใน MMN กว่าใน PDA ขนาดกลาง ( รูปที่ 1A ) แต่ละรอบ
,ยีสต์ ( สารยับยั้งการเจริญเติบโตเขตรัศมี ) คือ
ตรวจพบทั้งในด้านวัฒนธรรมสื่อ ) ซึ่งสอดคล้องกับการพบเชื้อรา
ผ่านทดสอบยีสต์ เมื่อพิจารณาจากอัตราส่วนระหว่างเส้นผ่าศูนย์กลางรัศมีการยับยั้ง

และการเจริญเติบโตเป็นวัดที่มีศักยภาพต้านจุลชีพฤทธิ์ต้านจุลชีพ ,
( AP ) แสดงโดย PDA ที่ปลูกเชื้อรา 1.4-fold สูงกว่า
เป็นสังเกตสำหรับ MMN ปลูกเชื้อรา ด้วยเหตุนี้ ,
) เสมอต่อไปนี้โดยใช้ PDA เป็น (

) กลาง ความแตกต่างในกิจกรรมต้านเชื้อราสามารถ
อาจเนื่องจากสื่อองค์ประกอบ แต่ความแตกต่างในค่า pH
ยังอาจได้รับการรับผิดชอบสำหรับเช่น AP รูปแบบ : ในขณะที่
MMN ขนาดกลางมีค่า pH ลดลง , pH ของ PDA คือ 5.7 เพื่อชี้แจงถ้า
อ อิทธิพล ของกิจกรรมต้านเชื้อรา
ขนาดกลาง PDA เชื่อมต่อหนึ่งหน่วยล่าง ( 4.7 ) และหนึ่งหน่วยเหนือ ( 6.7 ) ค่าปกติ และใช้ยาต้านจุลชีพขนาน

( แล้วแสดงผลลัพธ์ไม่แสดง ) ค่า AP สูงสุดพบความเป็นกรดปานกลาง ( AP = 2.92 ค่า

±
0.16 ; pH = 4.7 ) รองลงมา คือ สูงสุด
ค่า pH ทดสอบ ( AP = 2.50 ± 0.09 ; pH = 6.7 ) ในขณะที่
เอพี ถูกที่สุดมูลค่าที่ได้รับ สำหรับ PDA ทั่วไปค่าพีเอช ( AP = 1.95


± 0.09 ; pH = 5.7 ) แนะนำที่มีอิทธิพลของพารามิเตอร์นี้ . fasciculare กิจกรรมการยับยั้ง
.
เชื้อของตัวบ่งชี้ที่ละเอียดอ่อนความเครียดควร
กำหนดเพื่อสร้างมาตรฐานและควบคุมการทดลอง
เงื่อนไขสําหรับทดสอบ . เลือกขนาดเชื้อจุลินทรีย์ที่ดีที่สุด
Hfasciculare เลี้ยง 6 วันถูกปกคลุมด้วยทับ
ที่มี 104 , 106 และ 108 CFU / ml ของ S . cerevisiae . ยับยั้งการเจริญเติบโต
โซนเป็นขนาดเล็กที่มีมากขึ้น โดยขนาด