AnimalsWyoming toads were kept in 4

Animals
Wyoming toads were kept in 45 L (10 gallon) glass aquariums
with a 25 cm (1") thick sponge mat and a cork bark
slab for shelter or basking. Standard fluorescent lights
were provided for the aquarium and set on a timer to simulate
natural day light hours, and a water tray (10 cm
diameter × 2 cm depth) was placed at one end. Tanks and
sponge mats were cleaned daily. Four female or six male
toads were housed per aquarium and offered a range of
food items including mealworms, wax-worms and crickets.
The crickets were dusted with Reptivite© powder to
provide a variety of vitamins and minerals.
Hormonal induction of spermiation
The purpose of this experiment was to: 1) collect spermic
urine for IVF; and 2) characterize the spermiation
response induced in male B. baxteri when administered a
single dose of 300 IU hCG. A single dose of 300 IU of hCG
is optimum for sperm production in B. americanus and B.
fowleri when compared to lower concentrations [Kouba et
al., unpublished]. Variables measured in response to hormonal
induction include the number of males producing
spermatozoa, percentage sperm motility, forward progressive motility (PM), sperm concentration and the volume
of urine. Spermatozoa exhibiting beating flagella were
considered motile, even if no forward progression was
observed. Progressive motility (PM) was based on a scale
of 0 to 5, where 0 = no movement and 5 = rapid forward
movement.
To induce spermiation, ten male B. baxteri (56.4 ± 0.9
mm, 39.6 ± 2.4 g; means ± SE) were administered a dose
of 300 IU of hCG (Sigma, St. Louis, C-1063) in 100 μl of
reagent grade water by injection in the intra-peritoneal
cavity. The toads were then placed individually in 3.8 L
plastic boxes with 1 cm of tap water. The water was
changed if soiling was apparent. The male toads were then
sampled for spermic urine hourly from 3 to 13 hrs postadministration
(PA), the period of spermiation when
using hCG with B. americanus and B. fowleri [Kouba et al.,
unpublished]. To test the maximum duration of hormonally
induced spermiation, B. baxteri urine was also sampled
from 20 to 24 hrs PA and evaluated for the presence
of spermatozoa.To collect spermic urine, toads were carefully removed
from their box and excess water was removed with a tissue.
The toads were then held by a thumb and index finger,
anterior and across the pelvic girdle, above a 150 mm
diameter Petri dish. Gentle massaging then promoted urination,
usually within 60 seconds. Urine was removed
from the dish and placed in a 1.5 ml Eppendorf tube. The
volume expressed by each toad at each sampling period
was then measured. A 10 μl aliquot was then placed on a
slide that had been smeared with 0.5 % (w/v) Bovine
Serum Albumin (Sigma Aldrich, St. Louis, A-3311) solution
in distilled water to prevent the sperm cells from
sticking to the slide [24] and the percent motility and progressive
motility (PM) of sperm were measured. The percentage
of motile sperm was measured under 1000×
magnification and the PM was categorized under 400 ×
magnification. Only samples showing good motility (>70
%, 3.0 PM) and concentration (>106 ml-1) were used to
fertilize eggs. Depending on its availability, spermic urine
was used fresh or stored for a short time in the refrigerator
on ice (0°C) [25]. The motility of refrigerated sperm was
then re-assessed prior to its use in fertilization as previously
described. The sperm concentration of each sample
was measured using a Neubaeur hemocytometer (to the
nearest 0.1 × 106 ml-1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สัตว์คางคกไวโอมิงถูกเก็บไว้ใน 45 L (10 แกลลอน) พิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำแก้วกับ25 ซม. (1 ") เสื่อฟองน้ำหนาและเปลือกไม้ก๊อกพื้นหาที่กำบังหรืออาบแดด. ไฟเรืองแสงมาตรฐานมีให้สำหรับพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำและตั้งอยู่บนจับเวลาเพื่อจำลองชั่วโมงแสงวันธรรมชาติและถาดน้ำ (10 ซม. เส้นผ่าศูนย์กลาง× 2 ลึกเซนติเมตร) ถูกวางไว้ที่ปลายด้านหนึ่ง. รถถังและเสื่อฟองน้ำทำความสะอาดทุกวัน. สี่หญิงหรือหกชายคางคกถูกเก็บต่อพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำและนำเสนอช่วงของรายการอาหารรวมถึง. mealworms, ขี้ผึ้งเวิร์มและจิ้งหรีดจิ้งหรีดถูกโรยด้วย Reptivite ©ผง. ให้ความหลากหลายของวิตามินและแร่ธาตุเหนี่ยวนำฮอร์โมนของหลั่งน้ำเชื้อวัตถุประสงค์ของการทดลองนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อ 1) เก็บ spermic ปัสสาวะสำหรับผสมเทียมและ 2) ลักษณะ หลั่งน้ำเชื้อการตอบสนองในการเหนี่ยวนำชายบีbaxteri เมื่อผู้ครั้งเดียว300 IU เอชซีจี. ปริมาณเดียว 300 IU ของเอชซีจีเป็นที่เหมาะสมสำหรับการผลิตสเปิร์มในบีบีและamericanus fowleri เมื่อเทียบกับระดับความเข้มข้นต่ำ [Kouba et al., ที่ไม่ได้เผยแพร่]. ​​วัดตัวแปรในการตอบสนองต่อฮอร์โมนเหนี่ยวนำรวมถึงจำนวนของเพศการผลิตตัวอสุจิร้อยละอสุจิเคลื่อนที่ไปข้างหน้าความก้าวหน้าการเคลื่อนที่(PM) ความเข้มข้นของสเปิร์มและปริมาณของปัสสาวะ อสุจิแสดง flagella ตีถูกพิจารณาเคลื่อนที่แม้ว่าจะไม่มีความคืบหน้าไปข้างหน้าได้รับการตั้งข้อสังเกต การเคลื่อนไหวก้าวหน้า (PM) อยู่บนพื้นฐานของระดับของ0-5 ที่ 0 = ไม่มีการเคลื่อนไหวและการ 5 = ไปข้างหน้าอย่างรวดเร็วการเคลื่อนไหว. เพื่อทำให้เกิดการหลั่งน้ำเชื้อสิบ baxteri บีชาย (56.4 ± 0.9 มม 39.6 ± 2.4 กรัม; หมายถึง± SE ) เป็นยาปริมาณ300 IU ของเอชซีจี (ซิกม่าเซนต์หลุยส์ C-1063) 100 ไมโครลิตรของน้ำเกรดสารโดยการฉีดในภายในช่องท้องช่อง คางคกถูกวางไว้แล้วเป็นรายบุคคลใน 3.8 ลิตรกล่องพลาสติก1 ซม. น้ำประปา น้ำที่ได้รับการเปลี่ยนแปลงหากสกปรกก็เห็นได้ชัด คางคกชายจากนั้นก็เก็บตัวอย่างปัสสาวะ spermic ชั่วโมง 3-13 postadministration น (PA) ระยะเวลาของการหลั่งน้ำเชื้อเมื่อใช้กับเอชซีจีบีamericanus และ B fowleri [Kouba et al., การตีพิมพ์] ในการทดสอบระยะเวลาสูงสุดของ hormonally หลั่งน้ำเชื้อเทพบีปัสสาวะ baxteri เป็นตัวอย่างยัง20-24 นซิลเวเนียและประเมินผลสำหรับการปรากฏตัวของspermatozoa.To เก็บปัสสาวะ spermic คางคกถูกลบออกอย่างระมัดระวังจากกล่องและน้ำส่วนเกินจะถูกลบออกด้วยเนื้อเยื่อ. คางคกถูกจัดขึ้นแล้วโดยใช้นิ้วหัวแม่มือและนิ้วชี้, ด้านหน้าและทั่วเอวกระดูกเชิงกรานข้างต้น 150 มิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางจานเลี้ยงเชื้อ นวดอ่อนโยนแล้วการเลื่อนปัสสาวะปกติภายใน 60 วินาที ปัสสาวะจะถูกลบออกจากจานและวางไว้ในหลอด 1.5 มล. Eppendorf ปริมาณการแสดงโดยคางคกแต่ละรอบระยะเวลาการสุ่มตัวอย่างวัดแล้ว 10 ไมโครลิตร aliquot ถูกวางไว้แล้วในสไลด์ที่ได้รับป้ายด้วย0.5% (w / v) Bovine Serum Albumin (ซิกม่าดิช, เซนต์หลุยส์, A-3311) สารละลายในน้ำกลั่นเพื่อป้องกันไม่ให้เซลล์สเปิร์มจากการเกาะสไลด์ [24] และการเคลื่อนไหวเปอร์เซ็นต์และความก้าวหน้าการเคลื่อนที่(PM) สเปิร์มของวัด ร้อยละของตัวอสุจิเคลื่อนที่วัดภายใต้ 1,000 ×ขยายและPM ถูกแบ่งตาม 400 ×ขยาย เฉพาะตัวอย่างที่แสดงให้เห็นการเคลื่อนไหวที่ดี (> 70% 03:00) และความเข้มข้น (> 106 ml-1) ถูกนำมาใช้ปุ๋ยไข่ ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับความพร้อมของปัสสาวะ spermic ถูกใช้สดหรือเก็บไว้เป็นเวลาสั้น ๆ ในตู้เย็นบนน้ำแข็ง(0 ° C) [25] การเคลื่อนที่ของตัวอสุจิในตู้เย็นที่ได้รับจากนั้นอีกครั้งก่อนที่จะมีการประเมินการใช้งานในการปฏิสนธิเป็นก่อนหน้านี้อธิบาย ความเข้มข้นของสเปิร์มของแต่ละกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการวัดโดยใช้ hemocytometer Neubaeur (ไปยังที่ใกล้ที่สุด0.1 × 106 ml-1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สัตว์
ไวโอมิงคางคกถูก 45 ลิตร ( 10 แกลลอน ) พิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำแก้ว
กับ 25 เซนติเมตร ( 1 ) เสื่อฟองน้ำหนาและพื้นเห่า
ก๊อกกำบังหรืออาบแดด .
ไฟเรืองแสงมาตรฐานให้ตู้ปลา และตั้งบนตัวจำลอง
ชั่วโมงวันแสงธรรมชาติ และถาดน้ำ ( 10 ซม. เส้นผ่าศูนย์กลาง 2 ซม.
× ) อยู่ที่ปลายด้านหนึ่ง รถถังและ
เสื่อฟองน้ำสะอาดทุกวัน สี่หญิงหรือชาย
6คางคกถูกต่อตู้ปลาและเสนอช่วงของ
รายการอาหารรวมทั้งมีลเวิร์ม เวิร์มขี้ผึ้งและจิ้งหรีด จิ้งหรีดถูกโรยด้วย

reptivite สงวนลิขสิทธิ์ผงเพื่อให้ความหลากหลายของวิตามินและเกลือแร่ ฮอร์โมน การ spermiation

จุดประสงค์ของการทดลองนี้คือ : 1 ) เก็บปัสสาวะ spermic
สำหรับ IVF ; และ 2 ) ลักษณะการเกิดในชาย spermiation
Bbaxteri เมื่อทดสอบ
dose เดียว 300 IU HCG . ขนาดเดียว 300 IU ของ HCG
เป็นที่เหมาะสมสำหรับการผลิตอสุจิในบี มริกานัสและ B .
fowleri เมื่อเทียบกับลดความเข้มข้น [
kouba et al . , พิมพ์ ] ตัวแปรวัดในการตอบสนองต่อฮอร์โมน
เหนี่ยวรวมจํานวนตัวผู้ผลิต
5 เปอร์เซ็นต์อสุจิเคลื่อนไหว , การเคลื่อนที่ , การส่งต่อ ( PM )ความเข้มข้นของสเปิร์มและปริมาณ
ของปัสสาวะ อสุจิที่จัดแสดงเต้นแฟลเจลลัมถูก
ถือว่าเคลื่อนที่ ถ้าไม่ไปข้างหน้า ก้าวหน้าคือ
) ส่วนก้าวหน้า ( PM ) ขึ้นอยู่กับขนาด
0 ถึง 5 , ที่ 0 = ไม่มีการเคลื่อนไหวและการเคลื่อนไหวอย่างรวดเร็วไปข้างหน้า = 5
.
ชวน spermiation สิบ ชาย บี baxteri ( ปัจจัย± 0.9
มม. 65 ± 2.4 กรัม หมายความว่า ±เซ ) ได้รับยา
300 IU ของ HCG ( Sigma , เซนต์ หลุยส์ c-1063 ) 100 μ l
น้ำรีเอเจนต์เกรดโดยการฉีดในภายในช่องท้อง
โพรง คางคกแล้ววางไว้เป็นรายบุคคลใน 3.8 L
กล่องพลาสติก 1 เซนติเมตรน้ำ น้ำ
เปลี่ยนไป ถ้าสกปรกก็ชัดเจน คางคกตัวผู้แล้ว
โดย spermic ปัสสาวะต่อชั่วโมงตั้งแต่ 3 ถึง 13 ชั่วโมง postadministration
( PA ) , ช่วงของ spermiation เมื่อ
การใช้ HCG กับบี มริกานัส และ บี fowleri [ kouba et al . ,
พิมพ์ ] ทดสอบเวลาสูงสุดของการ spermiation hormonally
B baxteri ปัสสาวะยังเก็บตัว
20 PA 24 ชม. และการประเมินสถานะ
ของอสุจิ เพื่อเก็บปัสสาวะ spermic คางคกถูกลบออกอย่างระมัดระวัง
จากกล่องและน้ำส่วนเกินออกด้วยกระดาษทิชชู
คางคกจึงจัดขึ้นโดยนิ้วโป้งและนิ้วชี้
ด้านหน้าและข้ามเอวสะโพกบน ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 150 มม.
จานเพาะเชื้อ นุ่มนวลนวดแล้วเลื่อนปัสสาวะ
โดยปกติภายใน 60 วินาที ปัสสาวะจะถูกลบออก
จากจานและวางไว้ใน 1.5 ml เพนดอร์ฟหลอด
หมวดแสดง โดยแต่ละคางคกที่ตัวอย่างแต่ละระยะเวลา
แล้ววัด 10 μ L ส่วนลงตัวแล้ววางไว้บน
ภาพนิ่งที่ถูกละเลงด้วย 0.5% ( w / v )
) อัลบูมิน ( ซิกม่า Aldrich เซนต์ หลุยส์ a-3311 ) โซลูชั่น
ในน้ำเพื่อป้องกันไม่ให้เซลล์สเปิร์มจาก
ผสานกับภาพนิ่ง [ 24 ] และเปอร์เซ็นต์การเคลื่อนที่การเคลื่อนที่และก้าวหน้า
( PM ) ของสเปิร์มเป็นวัด เปอร์เซ็นต์อสุจิเคลื่อนไหว
วัดภายใต้ 1000 ×
ขยายและ PM คือแบ่งภายใต้ 400 ×
ขยาย .ตัวอย่างการแสดงเฉพาะส่วนดี ( > 70
% , 3.0 pm ) และสมาธิ ( > 106 แน่นอน

) ใช้ปุ๋ยไข่ ขึ้นอยู่กับความพร้อมของ spermic ปัสสาวะ
ใช้สดหรือเก็บไว้สำหรับช่วงเวลาสั้น ๆในตู้เย็น
บนน้ำแข็ง ( 0 ° C ) [ 25 ] การเคลื่อนที่ของอสุจิถูกแช่เย็น
แล้วประเมินก่อนที่จะใช้ในการเป็นก่อนหน้านี้
อธิบาย ความเข้มข้นของอสุจิแต่ละตัวอย่าง
วัดโดยใช้ neubaeur hemocytometer (
ใกล้ 0.1 × 106 แน่นอน )