The optimal concentrations of prime

The optimal concentrations of primers and probe were evaluated
by preparing dilution series. To determine the minimum primer
concentrations giving the maximum DRn (the maximum fluorescence
emission intensity and the lowest threshold cycle, Ct), forward
and reverse primer concentrations of 50, 300, 500, and
900 nmol/L were used. All were evaluated at a constant probe concentration
of 50 nmol/L. Subsequently, the probe concentration
was optimised with concentrations of 50–250 nmol/LM (Murray
& Curran, 2005).
The reactions were performed in triplicate on DNA samples in
MicroAmp Optical 96-well reaction plates (Applied Biosystems)
with MicroAmp optical caps (Applied Biosystems) using the ViiA
7 Real-Time PCR System (Applied Biosystems). Amplification was
carried out with the following conditions: 95 C for 20 s and 40 cycles
each of 95 C for 1 s and 60 C for 20 s.
The specificity of the assay was tested with different species of
bivalves, cephalopods, crustaceans, meats, vegetables and spices
amongst which are several potential cross-reacting species; the
species tested are shown in Table 1.
A serial dilution of fish DNA was performed with DNA from
other seafood species at levels ranging from 500 ng to 5 pg, and
the fluorescence signal was used to calculate the limit of detection
(LOD). The samples were prepared by adding fish DNA and DNA
from different species until the final concentration (500 ng) was
achieved. All measurements were performed in triplicate from five
samples independently.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีประเมินความเข้มข้นสูงสุดของไพรเมอร์และโพรบโดยการจัดลำดับการเจือจาง การกำหนดพื้นที่ต่ำสุดความเข้มข้นให้ DRn สูงสุด (ที่สูงสุด fluorescenceมลพิษและความรอบขีดจำกัดต่ำสุด Ct), ไปข้างหน้าและย้อนกลับความเข้มข้นของสีรองพื้น 50, 300, 500 และใช้ 900 nmol/L ทั้งหมดถูกประเมินที่เข้มข้นคงโพรบของ 50 nmol L. ในเวลาต่อมา เข้มข้นของโพรบถูกเหมาะงานกราฟฟิก ด้วยความเข้มข้น 50 – 250 nmol/LM (Murray& Curran, 2005)ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการใน triplicate ในตัวอย่างดีเอ็นเอในแผ่นปฏิกิริยาแสง 96 ด้วยมัลติมิเตอร์ (Biosystems ใช้)ด้วยมัลติมิเตอร์แสงหมวก (Biosystems ใช้) ใช้ ViiAระบบ PCR 7 แบบเรียลไทม์ (Biosystems ใช้) ขยายได้ดำเนินการ ด้วยเงื่อนไขต่อไปนี้: C 95 สำหรับ 20 s และรอบ 40ละ 95 C 1 s และ 60 C สำหรับ 20 sSpecificity ของทดสอบที่ทดสอบกับพันธุ์อื่นbivalves, cephalopods พบ เนื้อสัตว์ ผัก และเครื่องเทศหมู่ซึ่งเป็นพันธุ์เกิด cross-reacting หลาย ที่สายพันธุ์ที่ทดสอบจะแสดงในตารางที่ 1ทำการเจือจางประจำของปลาดีเอ็นเอกับดีเอ็นเอจากชนิดอาหารทะเลอื่น ๆ ในระดับตั้งแต่ 500 ng ให้ 5 pg และใช้ในการคำนวณขีดจำกัดของการตรวจสอบสัญญาณ fluorescence(ลอด) มีเตรียมตัวอย่าง โดยเพิ่มปลาดีเอ็นเอและดีเอ็นเอจากสายพันธุ์ต่าง ๆ จนความเข้มข้นสุดท้าย (500 ng) ได้ประสบความสำเร็จ ดำเนินการประเมินทั้งหมดใน triplicate จากห้าตัวอย่างอิสระ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความเข้มข้นที่เหมาะสมของไพรเมอร์และสอบสวนได้รับการประเมิน
โดยการเตรียมชุดเจือจาง การตรวจสอบไพรเมอร์ขั้นต่ำ
ให้ความเข้มข้นสูงสุด DRN (เรืองแสงสูงสุด
เข้มการปล่อยและวงจรเกณฑ์ต่ำสุดกะรัต), ไปข้างหน้า
และย้อนกลับความเข้มข้นของไพรเมอร์ 50, 300, 500, และ
900 นาโนโมล / ลิตรถูกนำมาใช้ ทั้งหมดได้รับการประเมินที่มีความเข้มข้นสอบสวนอย่างต่อเนื่อง
จาก 50 นาโนโมล / ลิตร ต่อจากนั้นความเข้มข้นสอบสวน
ถูกปรับให้เหมาะสมกับความเข้มข้นของ 50-250 นาโนโมล / LM (เมอเรย์
และเคอร์แร, 2005).
ปฏิกิริยาได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าในตัวอย่างดีเอ็นเอใน
ไมโครแอ Optical แผ่นปฏิกิริยา 96 หลุม (Applied Biosystems)
กับหมวกแสงไมโครแอมป์ ( Applied Biosystems) โดยใช้ viia
7 Real-Time PCR ระบบ (Applied Biosystems) ขยายได้รับการ
ดำเนินการตามเงื่อนไขดังต่อไปนี้: 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 และ 40 รอบ
แต่ละ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 วินาทีและ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 S?.
ความจำเพาะของการทดสอบได้รับการทดสอบกับสายพันธุ์ที่แตกต่างกันของ
หอยปลาหมึกกุ้ง เนื้อสัตว์ผักและเครื่องเทศ
ในระหว่างที่มีหลายที่มีศักยภาพทำปฏิกิริยาข้ามสายพันธุ์;
สายพันธุ์ที่ผ่านการทดสอบจะถูกแสดงในตารางที่ 1.
เจือจางอนุกรมของดีเอ็นเอปลาได้ดำเนินการกับดีเอ็นเอจาก
อาหารทะเลชนิดอื่น ๆ ในระดับตั้งแต่ 500 ng ถึง 5 pg, และ
สัญญาณการเรืองแสงที่ใช้ในการคำนวณขีด จำกัด ของการตรวจสอบ
(LOD) ตัวอย่างที่ถูกจัดทำขึ้นโดยการเพิ่มดีเอ็นเอปลาและดีเอ็นเอ
จากสายพันธุ์ที่แตกต่างกันจนความเข้มข้นสุดท้าย (500 เส้นทาง) ได้รับการ
ประสบความสำเร็จ วัดทั้งหมดถูกดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าจากห้า
ตัวอย่างอิสระ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความเข้มข้นที่เหมาะสมของไพรเมอร์และตรวจสอบประเมิน
โดยการเตรียมแบบเจือจาง กำหนดขั้นต่ำให้รองพื้น
ความเข้มข้นสูงสุด ( สูงสุด drn เรืองแสง
ปล่อยความเข้มและวงจร , เกณฑ์ต่ำ CT ) , ไปข้างหน้าและย้อนกลับ
รองพื้นความเข้มข้นของ 50 , 300 , 500 และ 900 nmol / L
มาใช้ สำรวจที่คงที่ตรวจสอบความเข้มข้น
50 nmol / Lต่อมาด้วยสมาธิ
คือที่ดีที่สุดที่มีความเข้มข้น 50 - 250 nmol / LM ( เมอร์เรย์
&เคอร์แรน , 2005 ) .
ปฏิกิริยาแสดงทั้งสามใบในดีเอ็นเอในปฏิกิริยาแสงดี
microamp 96 แผ่น ( Applied Biosystems )
microamp แสงกับหมวก ( Applied Biosystems ) ใช้ viia
7 เวลาจริง วิธีระบบ ( Applied Biosystems )
( คือดำเนินการกับเงื่อนไขต่อไปนี้ : 95  C 20 และ 40 รอบ
แต่ละ 95  C 1 และ 60  C 20 S .
ความจำเพาะของวิธีทดสอบกับสายพันธุ์ที่แตกต่างกันของ
น้ำ , หมึก , กุ้ง , เนื้อ , ผักและเครื่องเทศ
ในหมู่ที่หลายอาจเกิดขึ้นข้าม . ชนิด ;
ชนิดทดสอบ แสดงในตารางที่ 1 .
เป็นทากทะเล DNA ของปลาได้ DNA จาก
ชนิดอาหารทะเลอื่นๆในระดับตั้งแต่ 500 นาโน 5 PG และ
สัญญาณการใช้คำนวณขีดจำกัดของการตรวจหา
( LOD ) ตัวอย่างที่เตรียมโดยการเพิ่มดีเอ็นเอและดีเอ็นเอจากปลาชนิดต่าง ๆ จนสมาธิ

สุดท้าย ( 500 ng ) ได้สำเร็จ วัดทั้งหมดมีการปฏิบัติทั้งสามใบ จากห้า
ตัวอย่างอิสระ