2.4. RIA in milk samplesMeasurement

2.4. RIA in milk samples

Measurement of PAG in the milk samples was adapted from the method previously described for plasma. Briefly, an aliquot of pure stock of ovPAG58+61 solution (25 ng/ml) was diluted with commercial milk to prepare concentrations of 12.5, 6.25, 3.13, 1.56, 0.8, and 0.2 ng/ml. Each standard tube contained 0.1 ml of diluted ovPAG58+61 (0.2–25 ng/ml), 0.4 ml of PAG-free milk, 0.1 ml of diluted antisera (R-780 at 1:35,000; R-805 at 1:25,000), and 0.1 ml of PAG tracer (125I-ovPAG58+61 or 125I-boPAG67). NSB tubes contained 0.5 ml PAG-free milk, 0.1 ml of Tris–BSA buffer, and 0.1 ml tracer. With regard to samples, a volume of 0.5 ml of each milk sample (with or without potassium dichromate) was dispensed in duplicate into polystyrene tubes before the addition of 0.1 ml of appropriate dilution of antisera and 0.1 ml of tracer (25,000 cpm). The total volume of the assay was 0.7 ml. As previously described for plasma samples, an incubation step (16 h, room temperature) was made before the addition of the radiolabeled PAG and the separation of free and bound tracer to all tubes.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การเรียในตัวอย่างนมวัดปลายแห่งในตัวอย่างนมดัดแปลงจากวิธีการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ สำหรับจอพลาสม่า สั้น ๆ เป็นส่วนลงตัวของหุ้นบริสุทธิ์ ovPAG58 + 61 โซลูชัน (25 ng/ml) ที่ผสมกับนมพาณิชย์เตรียมความเข้มข้น 12.5, 6.25, 3.13, 1.56, 0.8 และ 0.2 ng/ml หลอดแต่ละมาตรฐานมีอยู่ 0.1 ml ของ ovPAG58 แตกออก + 61 (0.2 – 25 ng/ml), 0.4 ml ฟรีปลายแห่งนม 0.1 ml ของ antisera แตกออก (R-780 ที่ 1:35, 000 R-805 ที่ 1:25, 000), และ 0.1 ml ของติดตามปลายแห่ง (125I ovPAG58 + 61 หรือ 125I boPAG67) หลอด NSB ประกอบด้วย 0.5 ml ฟรีปลายแห่งนม 0.1 ml ของบัฟเฟอร์ตรี – บีเอสเอ และติดตาม 0.1 มล. ตามตัวอย่าง ปริมาตรของ 0.5 ml ของแต่ละอย่างนม (มี หรือไม่ มีโพแทสเซียม dichromate) ถูกจัดคำสำเนาลงในหลอดโฟมก่อนเพิ่ม 0.1 ml ของเจือจางที่เหมาะสม ของ antisera และ 0.1 ml ของติดตาม (25000 แผ่นต่อนาที) ปริมาณรวมของการทดสอบคือ 0.7 ml ก่อนหน้านี้อธิบายไว้ในตัวอย่างพลาสม่า ขั้นตอนการบ่ม (16 h อุณหภูมิห้อง) ทำการก่อนการเพิ่มที่ radiolabeled ปลายแห่งและการแบ่งแยกติดตามฟรี และถูกผูกไว้กับท่อทั้งหมด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 RIA ในตัวอย่างนมวัดPAG ในตัวอย่างนมดัดแปลงมาจากวิธีการที่อธิบายก่อนหน้านี้สำหรับพลาสม่า สั้น ๆ การหารของหุ้นที่บริสุทธิ์ของ ovPAG58 + 61 การแก้ปัญหา (25 ng / ml) ถูกเจือจางด้วยนมในเชิงพาณิชย์เพื่อเตรียมความเข้มข้น 12.5, 6.25, 3.13, 1.56, 0.8 และ 0.2 ng / ml แต่ละหลอดมีมาตรฐาน 0.1 มิลลิลิตรเจือจาง ovPAG58 + 61 (0.2-25 ng / ml) 0.4 มล. ของนม PAG ฟรี 0.1 มิลลิลิตร antisera เจือจาง (R-780 1: 35,000; R-805 1: 25,000) และ 0.1 มิลลิลิตรตามรอย PAG (125i-ovPAG58 + 61 หรือ 125i-boPAG67) หลอด NSB มี 0.5 มล. นม PAG ฟรี 0.1 มล. ของบัฟเฟอร์ Tris-BSA และ 0.1 มล. ตามรอย ในเรื่องเกี่ยวกับตัวอย่างปริมาณ 0.5 มล. ของแต่ละตัวอย่างนม (มีหรือไม่มีโพแทสเซียม dichromate) ได้รับการยกเว้นในที่ซ้ำกันเข้าไปในท่อไตรีนนอกจากนี้ก่อนที่ 0.1 มิลลิลิตรเจือจางที่เหมาะสมของ antisera และ 0.1 มิลลิลิตรตามรอย (ที่ 25,000 CPM) ปริมาณรวมของการทดสอบคือ 0.7 มล. ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้สำหรับตัวอย่างพลาสมา, ขั้นตอนการบ่ม (16 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง) ก่อนที่จะถูกสร้างขึ้นมานอกเหนือจาก PAG radiolabeled และรอยแยกของฟรีและที่ถูกผูกไว้กับหลอดทั้งหมด