The purified DNA was used as the te

The purified DNA was used as the template for amplification of the full-length
16S rDNA using bacterial specific primers BSF8/20 and REVB with DyNAzyme
EXT DNA polymerase (Finnzyme, Espoo, Finland), according to Kanokratana et
al. [17]. The PCR products were gel-purified using a QIAGEN Gel Extraction kit,
ligated to pTZ57R/T vector (Fermentas, Vilnius, Lithuania) and transformed into
Escherichia coli DH5 by the heat-shock method [18]. Transformants were selected
on Luria-Bertani agar plates containing ampicillin (100g/ml), supplemented
with 40g/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl--d-galactopyranoside (X-GAL) and
20g/ml isopropyl--d-thiogalactopyranoside (IPTG). 96 sequences of 16S rDNA
inserts were grouped according to restriction fragment length polymorphisms
(RFLP), determined from the DNA patterns obtained by agarose gel electrophoresis
after RsaI and HhaI digestion.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ใช้เป็นแม่แบบสำหรับการขยายของตัวแบบเต็มตัว16S rDNA ใช้ไพรเมอร์เฉพาะแบคทีเรีย BSF8/20 และ REVB กับ DyNAzymeต่อดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (Finnzyme เอสโป ฟินแลนด์), ตามรัตนา etal. [17] ผลิตภัณฑ์ PCR ได้ใช้ชุดสกัด QIAGEN เจล เจบริสุทธิ์กเดี่ยวกับเวกเตอร์ pTZ57R/T (Fermentas วิลนีอุส ลิธัวเนีย) และเปลี่ยนเป็นEscherichia coli DH5 ด้วยวิธีความร้อน [18] เลือก Transformantsบนแผ่นวุ้น Luria Bertani ที่ประกอบด้วยโกคอ (100 กรัม/มิลลิลิตร), เสริมมี 40 g/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-d-galactopyranoside (X-GAL) และ20 g/ml isopropyl-d-thiogalactopyranoside (IPTG) ลำดับที่ 96 ของ 16S rDNAแทรกได้ตามข้อจำกัดส่วนความยาวหลากหลาย(RFLP), กำหนดเป็นรูปแบบดีเอ็นเอที่ได้รับ โดย agarose เจลอิหลังจากย่อยอาหาร RsaI และ HhaI

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ถูกใช้เป็นแม่แบบสำหรับการขยายของความยาวเต็ม
16S rDNA ใช้ไพรเมอร์โดยเฉพาะแบคทีเรีย BSF8 / 20 และ REVB กับ DyNAzyme
EXT DNA Polymerase (Finnzyme, Espoo, ฟินแลนด์) ตาม Kanokratana et
al, [17] ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ถูกเจลบริสุทธิ์โดยใช้ชุด QIAGEN เจลสกัด,
ligated เพื่อ pTZ57R / T เวกเตอร์ (Fermentas วิลนีอุลิทัวเนีย) และกลายเป็น
เชื้อ Escherichia coli DH5? โดยวิธีความร้อนช็อต [18] Transformants ได้รับการคัดเลือก
ใน Luria-Bertani วุ้นแผ่นที่มี ampicillin (100 g / ml?) ตบท้าย
ด้วย 40 g / ml 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl -? - D-galactopyranoside (X-แกลลอน) และ
20 ? g / ml isopropyl -? - D-thiogalactopyranoside (IPTG) 96 ลำดับของ 16S rDNA
แทรกถูกจัดกลุ่มตามข้อ จำกัด ความยาวหลากหลายชิ้นส่วน
(RFLP) กำหนดจากรูปแบบดีเอ็นเอที่ได้จากข่าวคราว agarose
หลังจาก RsaI และ HhaI การย่อยอาหาร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทำให้ดีเอ็นเอถูกใช้เป็นแม่แบบสำหรับการขยายของเต็มตัวการใช้แบคทีเรียโดยเฉพาะ 16S rDNA bsf8 / 20 และ revb กับ dynazymeดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ( finnzyme Espoo , ประเทศฟินแลนด์ , ext ) ตาม kanokratana และอัล [ 17 ] ที่เพิ่มปริมาณเจลเป็นเจลสกัดบริสุทธิ์ใช้เพิ่มชุดผูกกับ ptz57r / T เวกเตอร์ ( fermentas , Vilnius ลิทัวเนีย ) และแปรสภาพเป็นพบว่ามีแบคทีเรีย Escherichia coli โดยวิธีช็อกความร้อน [ 18 ] คัดเลือก transformantsบนจานวุ้นลุเรียแบร์ตานิที่มีแอมพิซิลลิน ( 100 g / ml ) , อาหารกับ 40g / ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl -- d-galactopyranoside ( x-gal ) และ20 กรัม / มิลลิลิตร isopropyl -- d-thiogalactopyranoside ( โปรตีน ) 96 ลำดับ 16S rDNAแทรกถูกจัดกลุ่มตามขนาดความยาวล จํากัด( RFLP ) พิจารณาจากรูปแบบดีเอ็นเอได้จากเจลอิเลคโตรโฟเรซีสหลังจาก rsai hhai และการย่อยอาหาร