The cell cytotoxicity derived frommitochondrial dysfunction in
HepG2 cells was measured by (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-
diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay conducted by Kaivalya
and others (2011). Cells were seeded in each well of a 96-well
microplate in a density of 1 × 104 before incubating for 24 h. The
cell medium was suctioned followed by washing with phosphate
buffered saline (PBS). In order to find IC50 (concentration that
inhibits cell growth by 50%) value of nicotine in HepG2 cells,
various concentrations (100 μM, 250 μM, 500 μM, and 1 mM)
were suspended into cells and incubated for 24 h. The 500 μM
concentration was determined as of IC50 of nicotine.
Treatments of resveratrol (RES; 50, 100, and 250 μM),
oxyresveratrol (OXY; 50, 100, and 250 μM), a mixture of resveratrol
and oxyresveratrol (RES+OXY; 50, 100, 250, and 500 μM),
and EESC (0.18, 0.36, 0.9, and 1.8 mg/mL) were suspended into
cells and maintained for 24 h to confirm noncytotoxic concentration
ranges. Concentrations of each treatment observed to have
over 90% of cell viability were used for further studies. RES (50,
100, and 250 μM), OXY (50, 100, and 250 μM), RES+OXY (50
and 100 μM), and EESC (1.8 mg/mL) were treated into cells for
2 h before dispensing with IC50 value of nicotine for 24 h. Then,
the cell medium was removed, and 100 μL of the MTT solution
was added to each well and incubated at 37 °C after wrapping
aluminum foil to avoid light. After 4 h incubation, cell medium
was removed followed by substituting for DMSO. Optical density
of samples was measured at 570 nm wavelength using a microplate
reader (Varioskan Flash, Thermo Fisher Scientific, Vantaa, Finland).
This experiment was repeated 3 times, and the cell viability
was calculated as follows:
Cytotoxicity เซลล์มา frommitochondrial ความผิดปกติในเซลล์ HepG2 โดยวัดจาก (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium โบรไมด์ (MTT) ทดสอบโดย Kaivalyaและผู้อื่น (2011) เซลล์ที่ถูกเตรียมในแต่ละดี 96-ดีmicroplate ในความหนาแน่นของ 1 × 104 ก่อน incubating สำหรับ 24กลางเซลล์เป็น suctioned ตาม ด้วยล้างด้วยฟอสเฟตน้ำเกลือบัฟเฟอร์ (PBS) เพื่อหา IC50 (ความเข้มข้นที่ยับยั้งเจริญเติบโตของเซลล์ 50%) ค่าของนิโคตินในเซลล์ HepG2ความเข้มข้นต่าง ๆ (100 μ m, 250 ไมครอน ไมครอน 500 และ 1 มิลลิเมตร)หยุดลงในเซลล์ และได้รับการกก 24 ชม Μ m 500พิจารณาความเข้มข้น ณ IC50 ของนิโคตินรักษาของ resveratrol (RES, 50, 100 และ 250 ไมครอน),oxyresveratrol (OXY; 50, 100 และ 250 ไมครอน), ส่วนผสมของ resveratrolและ oxyresveratrol (RES + OXY; 50, 100, 250 และ 500 ไมครอน),และ EESC (0.18, 0.36, 0.9 และ 1.8 mg/mL) ได้ถูกระงับไปเซลล์ และรักษาตลอด 24 ชั่วโมงเพื่อยืนยันความเข้มข้น noncytotoxicช่วง ความเข้มข้นของการรักษาแต่ละสังเกตมีกว่า 90% ของชีวิตเซลล์ถูกใช้สำหรับการศึกษาต่อไป ความละเอียด (50100 และ 250 ไมครอน), OXY (50, 100 และ 250 ไมครอน), RES + OXY (50และ 100 ไมครอน), และ EESC (1.8 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) ได้รับการรักษาลงในเซลล์2 ชม.ก่อนจ่ายมีค่า IC50 ของนิโคตินใน 24 h แล้วกลางเซลล์ถูกลบออก และ 100 μL ของ MTTถูกเพิ่มไปแต่ละที่ดี และได้รับการกกที่ 37 ° C หลังจากการตัดaluminum foil to avoid light. After 4 h incubation, cell mediumwas removed followed by substituting for DMSO. Optical densityof samples was measured at 570 nm wavelength using a microplatereader (Varioskan Flash, Thermo Fisher Scientific, Vantaa, Finland).This experiment was repeated 3 times, and the cell viabilitywas calculated as follows:
การแปล กรุณารอสักครู่..
พิษเซลล์ที่ได้รับความผิดปกติของ frommitochondrial
ในเซลล์HepG2 โดยวัดจาก (3 (4,5-dimethylthiazol-2-YL) -2,5-
โบรไมด์ diphenyltetrazolium (MTT) การทดสอบที่ดำเนินการโดย Kaivalya
และคนอื่น ๆ (2011). เซลล์ที่ถูกเมล็ดใน แต่ละดีของ 96 หลุม
microplate ความหนาแน่นของ 1 × 104 ก่อนที่จะฟักเป็นเวลา 24 ชั่วโมง.
โดยกลางเซลล์ดูดเสมหะตามด้วยการล้างด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ
(พีบีเอส). เพื่อที่จะหา IC50
(ความเข้มข้นที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์โดย50 %) มูลค่าของนิโคตินในเซลล์ HepG2,
ความเข้มข้นต่างๆ (100 ไมครอน 250 ไมครอน 500 ไมครอนและ 1 มิลลิ)
ถูกระงับเข้าสู่เซลล์และบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง. โดยไมครอน 500
เข้มข้นถูกกำหนด ณ IC50 ของนิโคติน.
การรักษาของ resveratrol (RES; 50, 100 และ 250 ไมครอน)
oxyresveratrol (OXY; 50, 100 และ 250 ไมครอน) ส่วนผสมของ resveratrol
และ oxyresveratrol (RES + OXY 50, 100, 250, และ 500 ไมครอน)
และ EESC ( 0.18, 0.36, 0.9 และ 1.8 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร)
ถูกระงับลงในเซลล์และการบำรุงรักษาเป็นเวลา24 ชั่วโมงเพื่อยืนยันความเข้มข้น noncytotoxic
ช่วง.
ความเข้มข้นของการรักษาแต่ละข้อสังเกตว่าจะมีมากกว่า90% ของเซลล์ที่มีชีวิตถูกนำมาใช้สำหรับการศึกษาต่อไป RES (50,
100 และ 250 ไมครอน) OXY (50, 100 และ 250 ไมครอน) RES + OXY (50
และ 100 ไมครอน) และ EESC (1.8 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ได้รับการรักษาเข้าสู่เซลล์สำหรับ
2 ชั่วโมงก่อนที่จะจ่ายด้วย ค่า IC50 ของนิโคตินเป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้นกลางมือถือจะถูกลบออกและ 100 ไมโครลิตรของการแก้ปัญหา MTT ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดีและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสหลังจากห่อฟอยล์อลูมิเนียมเพื่อหลีกเลี่ยงแสง หลังจากบ่ม 4 ชั่วโมงกลางมือถือจะถูกลบออกตามด้วยแทนDMSO ความหนาแน่นของออปติคอลของกลุ่มตัวอย่างได้รับการวัดที่ความยาวคลื่น 570 นาโนเมตรโดยใช้ไมโคร. อ่าน (Varioskan แฟลช, เทอร์โมฟิชเชอร์วิทยาศาสตร์ Vantaa, ฟินแลนด์) การทดลองนี้ซ้ำ 3 ครั้งและมีชีวิตเซลล์ที่คำนวณได้ดังต่อไปนี้:
การแปล กรุณารอสักครู่..
เซลล์มะเร็งได้ frommitochondrial ความผิดปกติในเซลล์มะเร็งตับได้ ( 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) - 2 , 5 -diphenyltetrazolium โบรไมด์ ( MTT ) โดย kaivalya การทดสอบและคนอื่น ๆ ( 2011 ) ในแต่ละเซลล์มีเมล็ดดีของ 96 ดีในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ความหนาแน่น 1 × 104 ก่อนการแช่ 24 ชั่วโมงเซลล์ปานกลางสมบูรณ์ตามด้วยล้างด้วยฟอสเฟตในน้ำเกลือ ( PBS ) เพื่อหา ic50 ( ความเข้มข้นที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ โดย 50% ) ค่าของนิโคตินในเซลล์มะเร็งตับ ,ความเข้มข้นต่าง ๆ ( 100 μ M 250 μ M 500 μ m และ 1 มม.ถูกระงับในเซลล์ และบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง μ 500 เมตรถูกกำหนดเป็น ic50 ความเข้มข้นของนิโคตินการรักษาของ Resveratrol ( res ; 50 , 100 , 250 μ M )ซิเรสเวอราโทล ( Oxy ; 50 , 100 , 250 μ M ) , ของผสมของ Resveratrolและ ซิเรสเวอราโทล ( RES + ยา คือ 50 , 100 , 250 และ 500 μ M )และ eesc ( 0.18 , 0.36 , 0.9 , และ 1.8 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) ถูกระงับลงเซลล์และการรักษาตลอด 24 ชั่วโมงเพื่อยืนยัน noncytotoxic ความเข้มข้นช่วง ความเข้มข้นของการรักษาแต่ละครั้งสังเกตมีกว่า 90% ของเซลล์ที่ใช้ในการศึกษา RES ( 50100 และ 250 μ M ) , ยา ( 50 , 100 , 250 μ M ) , RES ( 50 + ซีและ 100 μ m ) และ eesc ( 1.8 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรถือว่าเป็นเซลล์สำหรับ2 ชั่วโมงก่อนจ่ายยาที่มีมูลค่า ic50 นิโคติน เป็นเวลา 24 ชั่วโมง แล้วเซลล์ปานกลางจะถูกลบออก , และ 100 μ L ของ MTT โซลูชั่นเพิ่มกันบ่มที่ 37 ° C หลังตัดอลูมิเนียม ฟอยล์ เพื่อหลีกเลี่ยงแสง หลังจาก 4 ชั่วโมง บ่มเพาะเซลล์ปานกลางถูกถอดออก ตามด้วยแทน DMSO . ความหนาแน่นของแสงตัวอย่างถูกวัดที่ 570 nm ความยาวคลื่นโดยใช้พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่าน ( varioskan แฟลช เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ วันทา ฟินแลนด์ )ทดลองซ้ำ 3 ครั้ง และเซลล์คำนวณได้ดังนี้
การแปล กรุณารอสักครู่..