Here we describe a versatile high-t

Here we describe a versatile high-throughput expression system that permits genome-wide screening of
type 1 membrane and secreted proteins for interactions with glycans and proteins using both cellexpressed
and soluble forms of the expressed proteins. Based on Gateway cloning methodology, we have
engineered a destination vector that directs expression of enhanced green fluorescent protein (EGFP)-
tagged proteins at the cell surface via a glycosylphosphatidylinositol tail. The EGFP fusion proteins can
then be cleaved with PreScission protease to release soluble forms of proteins that can be optionally biotinylated.
We demonstrate the utility of this cloning and expression system for selected low-affinity
membrane lectins from the siglec family of sialic acid-binding immunoglobulin-like lectins, for the glycosaminoglycan-binding
proteins FGF-1 and BACE, and for the heterotypic adhesion molecules JAM-B
and JAM-C. Cell-expressed proteins can be evaluated for glycan interactions using polyvalent soluble glycan
probes and for protein interactions using either cells or soluble proteins. Following cleavage from the
cell surface, proteins were complexed in solution and sufficient avidity was achieved to measure weak
protein–glycan and weak protein–protein interactions using glycan arrays and surface plasmon resonance,
respectively.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ที่นี่เราอธิบายระบบอเนกประสงค์นิพจน์อัตราความเร็วสูงที่อนุญาตให้คัดทั้งจีโนมชนิดเมมเบรน 1 และโปรตีน secreted สำหรับการโต้ตอบกับ glycans และโปรตีนโดยใช้ทั้ง cellexpressedและโปรตีนที่แสดงในรูปแบบละลายน้ำ ตามวิธีการโคลนเกตเวย์ เรามีวิศวกรรมเวกเตอร์ปลายทางที่กำหนดของเพิ่มโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (EGFP) -โปรตีนการติดแท็กที่ผิวเซลล์ผ่านหาง glycosylphosphatidylinositol โปรตีนอาหาร EGFP สามารถแล้ว จะแหวกกับรติเอส PreScission ปล่อยรูปแบบละลายน้ำของโปรตีนที่สามารถหรือ biotinylatedเราแสดงให้เห็นถึงอรรถประโยชน์ของระบบนี้โคลนและต่ำความสัมพันธ์ที่เลือกlectins เยื่อจากครอบครัว siglec ของกรด sialic ผูกเช่น immunoglobulin lectins สำหรับผูก glycosaminoglycanโปรตีน FGF-1 และ BACE และโมเลกุลยึดเกาะ heterotypic แยม-บีและติด c แสดงเซลล์โปรตีนสามารถถูกประเมินสำหรับโต้ตอบ glycan ใช้ glycan polyvalent ละลายprobes สำหรับโต้ตอบโปรตีนโดยใช้เซลล์หรือโปรตีนที่ละลายน้ำ ต่อปริจากการมีโปรตีนที่ผิวเซลล์ complexed ในโซลูชัน และ avidity พอสำเร็จวัดอ่อนโปรตีน – glycan และโต้ตอบอ่อนโปรตีน – โปรตีนโดยใช้อาร์เรย์ glycan และการสั่นพ้อง plasmon ผิวตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่นี่เราจะอธิบายอเนกประสงค์ช่วยการแสดงออกระบบที่อนุญาตให้ genome-wide การคัดเลือก
1 ชนิดเมมเบรนและหลั่งโปรตีนสำหรับการปฏิสัมพันธ์กับ glycans และโปรตีนโดยใช้ทั้ง cellexpressed
ลาย และรูปแบบของการแสดงออกโปรตีน ขึ้นอยู่กับวิธีการโคลนนิ่ง เกตเวย์ เรามี
ปลายทางเวกเตอร์ที่นําการแสดงออกของโปรตีนเรืองแสงสีเขียวได้เพิ่มขึ้น ( egfp ) -
แท็กโปรตีนที่ผิวเซลล์ผ่านทาง glycosylphosphatidylinositol หาง การ egfp ฟิวชันโปรตีนสามารถ
แล้วของ prescission โปรปล่อยรูปแบบปริมาณของโปรตีนที่สามารถเลือก
ไล .เราแสดงให้เห็นถึงประโยชน์ของการโคลนและการแสดงออกของระบบสำหรับเลือกต่ำต่อเยื่อเลคตินจาก siglec
ครอบครัวของอิมมูโนโกลบูลิน เช่น กรดผูกเหล็กสำหรับโชว์มียัวร์เลิฟผูกพัน
โปรตีนและ fgf-1 bace และสำหรับ Heterotypic ยึดเกาะโมเลกุลและเซลล์ jam-b
jam-c. แสดงออกโปรตีนสามารถทำการปฏิสัมพันธ์ใช้ต่อได้ไกลแคน
ไกลแคน) และโปรตีนปฏิสัมพันธ์โดยใช้ทั้งเซลล์หรือโปรตีนที่ละลายน้ำได้ ต่อไปนี้การแยกออกจาก
ของเซลล์ผิว โปรตีนเป็นซับซ้อนในสารละลาย avidity เพียงพอสําเร็จ วัดไกลแคนและอ่อนแอและอ่อนแอ
โปรตีนโปรตีนโปรตีนปฏิสัมพันธ์โดยใช้อาร์เรย์และไกลแคนและสะท้อนผิว

PLASMON , ตามลำดับ