The detailed procedure for plasma 8

The detailed procedure for plasma 8-isoprostane extraction is shown in Figure 1. One milliliter of ODS gel suspension (80 mg silica gel ODS-Q3 in 0.1 mol/L HCl containing 40 mL/L ethanol) was mixed with 0.5 mL of plasma and allowed to stand at room temperature for 5 min. The gel was collected by centrifugation and washed twice with 1 mL of 0.03 mol/L HCl containing 150 mL/L ethanol and once with 1 mL of petroleum ether to remove proteins and lipids. 8-isoprostane was eluted from the gel twice using 1 mL of ethyl acetate for each elution. The eluates were combined, transferred to another test tube and dried under N2 gas. The residue containing 8-isoprostane was dissolved in 1 mL of solution A (hexane: 2-propanol: acetic acid = 90:10:0.5, V/V/V), and applied to an NH2 Sep-Pak column pre-equilibrated with solution A. The column was washed once with 5 mL of solution A, followed by another wash with 5 mL of solution B (hexane: 2-propanol: acetic acid = 75:25:0.5, V/V/V). Finally, 8-isoprostane was eluted from the column with solution C (hexane: 2-propanol: acetic acid = 45:55:0.5, V/V/V) and dried under N2 gas. The residue was dissolved in 1 mL of the assay buffer included in the 8-isoprostane ELISA kit (Cayman Chemical). The ELISA was performed according to the manufacturer’s instructions without further purification of the samples, and the absorbance was measured with a plate reader (V-Max; Molecular Dynamics, NJ, USA). The 8-isoprostane standards included in the ELISA kit were extracted in the same way as the samples to obtain a calibration curve, which was used to estimate the 8-isoprostane levels in the samples.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขั้นตอนรายละเอียดสกัด 8 isoprostane พลาสม่าจะแสดงในรูปที่ 1 หนึ่ง milliliter ของระงับเจ ODS (80 มิลลิกรัมเจล ODS Q3 ใน 40 mL/L L 0.1 โมล HCl ที่มีเอทานอ) ผสมกับ 0.5 mL ของพลาสมา และอนุญาตให้ยืนใน 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง เจถูกรวบรวม โดย centrifugation และล้างสองครั้ง ด้วย mL 1 โมล/L HCl มี 150 mL/L เอทานอลและเมื่อ 0.03 กับ mL 1 ของปิโตรเลียมอีเทอร์เอาโปรตีนและโครงการ 8-isoprostane ถูก eluted จากเจลใช้ 1 mL ของเอทิล acetate elution แต่ละครั้ง Eluates ได้รวม โอนย้ายไปที่อื่นทดสอบท่อ และแห้งภายใต้ก๊าซ N2 สารตกค้างประกอบด้วย 8 isoprostane ถูกละลายใน 1 mL ของ A (เฮกเซน: 2 อย่างไร propanol: กรดอะซิติก = 90:10:0.5, V/V/V), และใช้คอลัมน์ที่มี NH2 Sep-ปาก equilibrated ก่อน ด้วยโซลูชั่นอ. คอลัมน์ถูกล้างเมื่อ ด้วย 5 mL ของ A ตาม ด้วยล้างอีกด้วย 5 mL ของ B (เฮกเซน: 2 อย่างไร propanol: กรดอะซิติก = 75:25:0.5, V/V/V) สุดท้าย 8 isoprostane ได้ eluted จากคอลัมน์ที่มีโซลูชั่น C (เฮกเซน: 2 อย่างไร propanol: กรดอะซิติก = 45:55:0.5, V/V/V) และแห้งภายใต้ก๊าซ N2 สารตกค้างถูกละลายใน 1 mL ของบัฟเฟอร์วิเคราะห์รวมอยู่ใน 8 isoprostane ชุด ELISA (เคย์เคมี) ELISA ที่ทำตามคำแนะนำของผู้ผลิตโดยทำให้บริสุทธิ์ต่อไปของตัวอย่าง และมีวัด absorbance ที่ มีเครื่องอ่านแผ่น (V-Max โมเลกุล Dynamics, NJ สหรัฐอเมริกา) มาตรฐาน 8 isoprostane ที่รวมอยู่ในชุด ELISA ถูกสกัดในลักษณะเดียวกับตัวอย่างการเทียบเส้นโค้ง ที่ใช้ในการประเมินระดับ 8 isoprostane ในตัวอย่างได้รับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขั้นตอนรายละเอียดสำหรับการสกัด 8-isoprostane พลาสมา แสดงในรูปที่ 1 หนึ่งมิลลิลิตรของ ODS เจลระงับ ( 80 มิลลิกรัมต่อซิลิกาเจล ods-q3 0.1 mol / L HCl ที่มี 40 ml / l เอทานอล ) ผสมกับ 0.5 มิลลิลิตรพลาสมาและอนุญาตให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที เจลเพื่อล้าง 2 ครั้ง และปั่นด้วย 1 มล. 003 mol / L HCL 150 มิลลิลิตร / ลิตร ผสมเอทานอล และอีกครั้งกับ 1 มิลลิลิตร ปิโตรเลียมอีเทอร์ เพื่อเอาโปรตีนและไขมัน . 8-isoprostane คือตัวอย่างจากเจลสองครั้งโดยใช้ 1 มิลลิลิตร เอทิลอะซิเตท สำหรับแต่ละชนิด . การ eluates ร่วมโอนไปยังหลอดทดสอบอื่นและทำแห้งภายใต้ก๊าซไนโตรเจน ก๊าซ ส่วนที่มี 8-isoprostane ละลายใน 1 มิลลิลิตรของสารละลาย ( เฮกเซน : โพรพานอล : กรด = 90 : 10 :0.5 V / V / V ) และใช้กับคอลัมน์ nh2 ก.ย. ปากก่อน equilibrated ด้วยโซลูชั่น . คอลัมน์ ได้ซัดอีกครั้งกับ 5 มิลลิลิตร โซลูชั่น ตามด้วยล้างอีก 5 มิลลิลิตรของสารละลาย B ( เฮกเซน : โพรพานอล : กรด 75:25:0.5 = V / V / V ) ในที่สุด 8-isoprostane คือตัวอย่างจากคอลัมน์ ด้วยโซลูชั่น C ( เฮกเซน : โพรพานอล : กรด 45:55:0.5 = V / v / v ) และอบแห้งภายใต้ก๊าซไนโตรเจน ก๊าซตกค้างที่ละลายใน 1 มิลลิลิตร ( บัฟเฟอร์ รวมอยู่ใน 8-isoprostane ชุด ELISA ( Cayman Chemical ) การ ) ปฏิบัติตามคำแนะนำของผู้ผลิตโดยไม่ต้องบำบัดเพิ่มเติมของกลุ่มตัวอย่าง และค่าวัดด้วยเครื่องอ่านแผ่น ( v-max ; พลศาสตร์โมเลกุล , NJ , USA )การ 8-isoprostane มาตรฐานรวมอยู่ในชุด ELISA ถูกสกัดในแบบเดียวกับตัวอย่างที่ได้รับเป็นรูปโค้งซึ่งถูกใช้ในการประมาณการ 8-isoprostane ระดับในตัวอย่างที่