In non-muscle cells, the motor prot

In non-muscle cells, the motor protein myosin IIA is identified as the myosin involved in actomyosin-regulated tension. Its activation state is regulated by phosphorylation (43) of its light chain, which is mediated by the Rho-associated protein kinase (ROCK) pathway (17,44). Downstream of RhoA, ROCK controls the myosin light chain kinase by regulating myosin light chain phosphorylation, which is important for actomyosin-mediated cell contractility (Fig. 1, MLCP). Another important effector of RhoA is mDia1, which when rendered active induces actin polymerization and increases microtubule stabilization. Thus, RhoAplays an important role in the regulation of cell mechanical properties, not only via the ROCK but also via the mDia1pathway (Fig. 1) (38,45). To examine the contribution of ROCK to the stiffness of NIH3T3 cells, we blocked it by adding the protein kinase inhibitor Y-27632 (46). Through blocking of myosin II-mediated tensioning, treatment of cells with this drug led to the complete disassembly of actin stress fibers (Fig. 2, a and b).Fig. 2, c and d, shows SAM images produced from NIH3T3 control cells and cells treated with Y-27632. The mean cell height (5 SD) was 3.84 5 0.68 mm for the control samples and 4.17 5 0.77 mm after treatment with Y-27632, a difference that is statistically significant (p ¼ 0.008). Parallel AFM measurements on a number of cells were carried out to determine cell height and these were consistent with the SAM data. Fig. 2, a and b, shows the corresponding fluorescence microscopy images of cells stained to reveal bundled filamentous actin; here, in the absence of tensioning, the actin is significantly more disorganized. The SAM data can be converted into acoustic wave (sound) velocity according to the procedure of Zhao et al. (37) and are shown in Fig. 2 e. For reference, the acoustic wave velocity in the PBS medium used for acoustic microscopy is 1490 msÀ1 (37), similar to the values of 1495 5 7 msÀ1 and 1483 msÀ1 reported by Rapoport et al. (47) and Baddour et al. (48), respectively. Hence there is a significant difference between the acoustic wave velocity in the cell and that in the surrounding media.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในเซลล์กล้ามเนื้อไม่ใช่ มอเตอร์โปรตีนไมโอซิน IIA เป็น identified เป็นไมโอซินเกี่ยวข้อง actomyosin ควบคุมความตึงเครียด สถานะการเปิดใช้งานถูกควบคุม โดย phosphorylation (43) ของห่วงโซ่ของแสง ที่ส่งต่อ โดยทางเดินเชื่อมโยง Rho โปรตีนไคเนส (หิน) (17,44) ปลายน้ำของ RhoA ร็อคควบคุมไคเนสเชนแสงของไมโอซิน โดยควบคุม phosphorylation โซ่ไฟไมโอซิน ซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับ contractility actomyosin มีเซลล์ (รูปที่ 1, MLCP) อีกสิ่งสำคัญ effector ของ RhoA คือ mDia1 ซึ่งเมื่อแสดงผลใช้งานก่อให้เกิดจำนวนแอกติน และเพิ่มเสถียรภาพของไมโครทิวบูล ดังนั้น RhoAplays มีบทบาทสำคัญในการควบคุมเซลล์สมบัติเชิงกลของ ไม่ผ่านหินแต่ยังผ่านการ mDia1pathway (รูปที่ 1) (38,45) ตรวจสอบจำนวนของหินความแข็งของเซลล์ NIH3T3 เราถูกบล็อกได้ โดยเพิ่มสารยับยั้งไคเนสโปรตีน Y-27632 (46) ผ่านทางบล็อกของไมโอซินมี II ใช้สปริง รักษาเซลล์ด้วยยานี้นำสมบูรณ์ disassembly ของแอกตินความเครียด fibers (รูป 2 แบบ และ b) .Fig 2, c และ d แสดง SAM ภาพจาก NIH3T3 ควบคุมเซลล์และเซลล์รักษา ด้วย Y-27632 ความสูงของเซลล์หมายถึง (5 SD) 5 3.84 0.68 mm สำหรับตัวอย่างควบคุมและ 4.17 5 0.77 มม.หลังจากรักษาด้วย Y-27632 ความแตกต่างที่ทางสถิติงมาก (p ¼ 0.008) ขนานด้านวัดจำนวนเซลล์ได้ดำเนินการตรวจสอบเซลล์สูง และเหล่านี้ได้สอดคล้องกับข้อมูล SAM รูป 2 แบบ และไมโครสโคภาพเซลล์ที่ย้อมจะเปิดเผยแถม filamentous แอกติน b แสดง fluorescence ที่สอดคล้องกัน ที่นี่ ในกรณีที่ไม่ใช้สปริง แอกตินมี significantly เพิ่มเติมระเบียบราว ข้อมูล SAM สามารถแปลงคลื่นเสียง (เสียง) ความเร็วตามขั้นตอนของ Zhao et al. (37) และแสดงในรูป 2 e สำหรับการอ้างอิง ความเร็วของคลื่นเสียงในการใช้สำหรับไมโครสโคเสียง PBS เป็น 1490 msÀ1 (37), คล้ายกับค่า 1495 5 7 msÀ1 และ 1483 msÀ1 รายงาน โดย Rapoport et al. (47) และ Baddour et al. (48), ตามลำดับ จึง มีความแตกต่างงมากระหว่างความเร็วของคลื่นเสียงในเซลล์และในรอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไม่ใช่ในเซลล์กล้ามเนื้อโปรตีนมอเตอร์ myosin ไอไอเอเป็นเอ็ด Fi ระบุเป็น myosin ที่เกี่ยวข้องในความตึงเครียด actomyosin ควบคุม รัฐเปิดใช้งานจะถูกควบคุมโดย phosphorylation (43) ของห่วงโซ่แสงซึ่งเป็นผู้ไกล่เกลี่ยโดยโปรตีนไคเนสโรที่เกี่ยวข้อง (ROCK) ทางเดิน (17,44) ล่อง RhoA, ร็อคควบคุมไคเนสโซ่ myosin แสงโดยการควบคุม myosin phosphorylation ห่วงโซ่แสงซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับ actomyosin พึ่งการหดตัวของเซลล์ (รูป. 1 MLCP) อีกประการหนึ่งที่สำคัญของ effector RhoA เป็น mDia1 ซึ่งเมื่อแสดงผลการใช้งานก่อให้เกิดพอลิเมอโปรตีนและเพิ่มเสถียรภาพ microtubule ดังนั้น RhoAplays มีบทบาทสำคัญในการควบคุมคุณสมบัติทางกลของเซลล์ไม่เพียง แต่ผ่านทางร็อค แต่ยังผ่าน mDia1pathway (รูป. 1) (38,45) เพื่อตรวจสอบการมีส่วนร่วมของหินแข็งของเซลล์ NIH3T3 เราถูกปิดกั้นได้โดยการเพิ่มโปรตีนไคเนสยับยั้ง Y-27632 (46) ผ่านการปิดกั้นของความตึง myosin II-พึ่งการรักษาเซลล์ที่มียานี้จะนำไปสู่​​การถอดชิ้นส่วนที่สมบูรณ์ของ Bers Fi ความเครียดโปรตีน (รูป. 2, A และ B) .Fig 2, C และ D, แสดงให้เห็นภาพของ SAM ที่ผลิตจากเซลล์ควบคุม NIH3T3 และเซลล์รับการรักษาด้วย Y-27632 ความสูงเฉลี่ยของเซลล์ (5 SD) เป็น 3.84 5 0.68 มิลลิเมตรสำหรับตัวอย่างควบคุมและ 4.17 5 0.77 มมหลังการรักษาด้วย Y-27632, ความแตกต่างที่มีนัยสำคัญทางสถิติลาดเท Fi (P ¼ 0.008) วัด AFM ขนานกับจำนวนของเซลล์ได้ดำเนินการในการกำหนดความสูงของเซลล์และสิ่งเหล่านี้มีความสอดคล้องกับข้อมูล SAM มะเดื่อ. 2, A และ B แสดงให้เห็นที่สอดคล้องกัน FL uorescence ภาพกล้องจุลทรรศน์ของเซลล์ย้อมสีที่จะเปิดเผย Fi ที่มาพร้อมโปรตีน lamentous; ที่นี่ในกรณีที่ไม่มีความตึงของโปรตีนเป็นอย่างมีนัยสำคัญเป็นระเบียบมากขึ้น ข้อมูล SAM สามารถแปลงเป็นคลื่นอะคูสติก (เสียง) ความเร็วตามขั้นตอนของการ Zhao et al, (37) และมีการแสดงในรูป 2 E สำหรับการอ้างอิงความเร็วคลื่นอะคูสติกในระยะกลางพีบีเอสที่ใช้สำหรับกล้องจุลทรรศน์อะคูสติก 1490 msÀ1 (37) คล้ายกับค่านิยมของ 1495 5 7 msÀ1และ 1483 msÀ1ที่รายงานโดย Rapoport et al, (47) และ Baddour et al, (48) ตามลำดับ จึงมีความแตกต่าง Fi ลาดเทนัยสำคัญระหว่างความเร็วคลื่นอะคูสติกในเซลล์และในสื่อโดยรอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไม่ใช่เซลล์กล้ามเนื้อ , โปรตีนไมโอซินจัดขึ้นเป็น identi มอเตอร์จึงเอ็ดเป็น myosin เกี่ยวข้องล้ควบคุมแรง สถานะการเปิดใช้งานที่ถูกควบคุมโดยฟอสโฟริเลชัน ( 43 ) ของแสงโซ่ ซึ่งเป็นคนกลาง โดย โรโปรตีนไคเนสที่ ( หิน ) ทางเดิน ( 17,44 ) ด้าน rhoa หินควบคุม myosin light chain kinase โดยการควบคุม myosin light chain ปฏิกิริยาฟอสโฟรีเลชัน ซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับโมระดับการหดตัวของเซลล์ ( รูปที่ 1 mlcp ) อื่นที่สำคัญของ rhoa ( เป็น mdia1 ซึ่งเมื่อแสดงผลการใช้งาน ทำให้เกิด actin และเพิ่มเสถียรภาพไมโครทูบูล . ดังนั้น rhoaplays ที่มีบทบาทสำคัญในการควบคุมกลเซลล์ , ไม่เพียง แต่ผ่านหิน แต่ยังผ่าน mdia1pathway ( รูปที่ 1 ) ( 38,45 ) เพื่อศึกษาอิทธิพลของหินแข็งของ nih3t3 เซลล์เราถูกบล็อคได้โดยการเพิ่มโปรตีน kinase inhibitor y-27632 ( 46 ) ผ่านบล็อกของ myosin II ผ่าน tensioning , รักษาเซลล์กับยาเสพติดนี้นำไปสู่การถอดชิ้นส่วนที่สมบูรณ์ของ actin ความเครียดจึง bers ( รูปที่ 2 , A และ B ) . รูปที่ 2 , C และ D แสดงแซมภาพผลิตจาก nih3t3 ควบคุมเซลล์และเซลล์ที่ได้รับการรักษาด้วย y-27632 . ค่าเฉลี่ยความสูงของเซลล์ ( 5 SD ) อยู่ที่ 3.84 5 0.68 mm สำหรับควบคุมตัวอย่างและ 4.17 5 0.77 มิลลิเมตร หลังการรักษาด้วย y-27632 , ความแตกต่างทางสถิติ ( P signi จึงไม่สามารถ¼ 0.008 ) ขนาน AFM วัดในจำนวนเซลล์ ได้ดำเนินการกำหนดความสูงของเซลล์และเหล่านี้สอดคล้องกับแซมข้อมูล รูปที่ 2 , A และ B , แสดงที่fl uorescence กล้องจุลทรรศน์ภาพเซลล์ย้อมเปิดเผยรวมจึง lamentous actin ; ที่นี่ ในกรณีที่ไม่มี tensioning , actin เป็น signi จึงลดลงอย่างมีนัยสําคัญเมื่อขึ้นไม่เป็นระเบียบ แซมข้อมูลสามารถแปลงเป็นคลื่นเสียง ( Sound ) ความเร็วตามขั้นตอนของจ้าว et al . ( 37 ) และจะแสดงในรูปที่ 2 E . อ้างอิงความเร็วคลื่นเสียงใน PBS ขนาดกลาง ใช้สำหรับกล้องจุลทรรศน์อะคูสติกเป็น 1490 MS À 1 ( 37 ) ใกล้เคียงกับค่าของ 1 5 7 และ MS MS À 1 ช้À 1 รายงานโดย Rapoport et al . ( 47 ) และ baddour et al . ( 48 ) , ตามลำดับ ดังนั้นมันจึงไม่สามารถ signi ความแตกต่างระหว่างความเร็วคลื่นอะคูสติกในเซลล์ และในรอบสื่อ