2.1 Hydrolysis of phenolic acidsAci

2.1 Hydrolysis of phenolic acids
Acidic hydrolysis and saponification are the most common
means of releasing the acids, although they may
decompose under these conditions. Enzymatic release is
an alternative but less prevalent technique.
The acidic hydrolysis method involves treating the
plant extract or the food sample itself with inorganic
acid (e.g. HCl) at reflux or above reflux temperatures in
aqueous or alcoholic solvents (methanol being the most
common). Acid ranges from 1 to 2 N HCl and the reaction
times range from 30 min to 1 h. Aqueous HCl is reported
to have destroyed the hydroxycinnamic acids. Krygier et
al. reported that losses under acidic conditions vary with
the form of phenolic acid, ranging from 15 to 95% for ocoumaric
acid and sinapic acid, respectively [44].
Saponification entails treating the sample with a solution
of NaOH at concentrations from 1 to 4 M. Most of
the reactions are left to proceed at room temperature for
15 min up to overnight. Some investigations report that
the reactions are carried out in the dark, as well as under
an inert atmosphere such as argon or nitrogen gas [45].
Enzymatic reactions have been said to release phenolic
acids. Enzymes such as pectinases, cellulases, and amylases
are employed for the degradation of carbohydrate
linkages. The mode of action by which these acids are
released is known. Andreasen et al. discussed and compared
several different enzyme preparations for the
release of phenolic acids from the cell wall of rye grains
[46]. Yu et al. reported that a sequential acid, a-amylase,
and cellulose hydrolysis might be applicable to the
release of phenolic acids from barley [47].
2.2 Hydrolysis of flavonoids
Hydrolysis, frequently used to remove the sugar moieties
from glycosides, may be acidic, basic, or enzymatic.
Numerous papers have been cited in an earlier extensive
i 2007 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.jss-journal.com
Figure 3. Schematic of strategies for the determination of
phenolic acids and flavonoids in biological fluids, beverages,
plants, and food. Abbreviations: SFE, supercritical fluid
extraction; MSPD, matrix solid-phase dispersion; SPME,
solid-phase microextraction; CCC, counter-current chromatography;
FL, fluorescence; FID, flame ionisation detection;
ECD, electron capture detection.
J. Sep. Sci. 2007, 30, 3268 – 3295 Other Techniques 3273
study relating to the hydrolysis conditions for flavonol
glucuronides, flavonol glucosides, and flavone glucosides,
for six food samples [48]. These data proved to be
different indicating the fact that consensus on the conditions
could barely be reached.
Hydrolysis of anthocyanins to anthocyanidins is often
indispensable as anthocyanin standards are scarce.
Hydrolysis of anthocyanin is typically done by refluxing
in MeOH – 2 N HCl (aq) [49] or 2 M HCl [50]. Alkaline
hydrolysis cleaves the acylated portions of acylated
anthocyanins.
Other researchers reported that the phenolic extract
of sunflower honey was hydrolysed in 2 N NaOH [51]
while the glycosides of flavones and flavonols were
hydrolysed by refluxing in 1 – 2 M HCl in 50% MeOH –
H2O v/v [52, 53].
For physiological fluids (bile, plasma, serum, or urine),
flavonoids may first be submitted to enzymatic hydrolysis
with b-glucuronidase and sulfatase, separately or
sequentially [54]. 13C-labeled flavonoid conjugates have
been prepared and are available to ensure that these
enzymes are active in the incubates [55].
2.3 Extraction
As noted earlier, after proper sample handling, the first
steps of a preparation procedure are milling, grinding,
and homogenisation. Extraction is the main step for the
recovery and isolation of bioactive phytochemicals from
plant materials, before analysis. It is influenced by their
chemical nature, the extraction method employed, sample
particle size, as well as the presence of interfering
substances. Additional steps may be called for if the
removal of unwanted phenolics and non-phenolic substances
such as waxes, fats, terpenes, and chlorophylls is
of interest.
Liquid-liquid and solid-liquid extraction are the most
commonly used procedures prior to analysis of polyphenolics
and simple phenolics in natural plants. They are
still the most widely used techniques, mainly because of
their ease of use, efficiency, and wide-ranging applicability.
Commonly used extraction solvents are alcohols
(methanol, ethanol), acetone, diethyl ether, and ethyl
acetate. However, very polar phenolic acids (benzoic, cinnamic
acids) could not be extracted completely with
pure organic solvents, and mixtures of alcohol –water or
acetone –water are recommended. Less polar solvents
(dichloromethane, chloroform, hexane, benzene) are
suitable for the extraction of nonpolar extraneous compounds
(waxes, oils, sterols, chlorophyll) from the plant
matrix. Other factors, such as pH, temperature, sampleto-solvent
volume ratio, and the number and time intervals
of individual extraction steps, also play an important
role in the extraction procedure. Extractions are,
almost invariably, repeated two to three times and
extracts are combined.
Extraction of flavonoids from biological matrices is
usually one of the fastest and less time consuming tasks
[56, 57]. In addition, due to the simple manipulation of
relatively small amount of samples to be extracted, analytical
characteristics, such as the relative standard deviation
proved to be satisfactory. To quote an example, for
the simultaneous quantification of multiple flavonoids
in rat plasma, the matrix was treated as follows [58]: The
plasma (50 lL) was acidified with 0.25 M HCl (10 lL),
mixed with ethyl acetate (1 mL), vortexed, and centrifuged.
The upper organic phase (850 lL) was evaporated
to dryness; the residue was reconstituted in CH3CN –H2O
(24:76, v/v, containing 0.01% HCOONH4) and centrifuged.
The supernatant was subsequently used for liquid chromatographic
analysis.
Soxhlet extraction is frequently used to isolate flavonoids
from solid samples. In most cases, aqueous methanol
or acetonitrile is used as solvent. In the literature,
reported extraction times vary up to 12 h using this
extraction mode. Various flavonoids were extracted from
Tilia europea, Urtica dioica, Mentha spicata, and Hypericum perforatum
after 12 h Soxhlet extraction with methanol [59].
Also, phenolic acids were quantitatively obtained by the
same extraction technique from the aerial parts of Echinacea
purpurea [60].
Flavonoids are considered favoured constituents as
chemotaxonomic markers in plants because they show
large structural diversity and are chemically stable. To
distinguish rapidly between various birch species, leaf
surface flavonoids were extracted from a single fresh leaf
by immersing the whole leaf (without crushing the tissue)
for 60 s in 1.5 mL of 95% ethanol contained in an
Eppendorf tube [61].
Supercritical fluid extraction (SFE) provides relatively
clean extracts, free from certain degradation compounds
which may emanate from lengthy exposure to high temperatures
and oxygen. Moreover, extracts contain no
chlorophyll and other nonpolar compounds which are
insoluble in supercritical CO2. This technique is applicable
to plant samples and can also be combined with other
sample preparation techniques. All samples are usually
dried before the SFE assay. As expected, highly polar flavonoids
are not extracted by 100% CO2. The solvating
power of a supercritical fluid is varied and extraction efficiency
is markedly improved by controlling the pressure
or by adding organic modifiers, such as methanol. In the
SFE of flavonoids from Scutellaria radix, Lin et al. observed
that, for 1 g of sample, adding 3 mL of 70% methanol in
20 mL of CO2 gave much better extraction than pure
methanol [62]. This might be because 30% of water would
further increase the polarity of the modifier, and polar
constituents would thus be extracted more easily. In
another report, SFE was compared with Soxhlet extraci
2007 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.jss-journal.com
3274 C. D. Stalikas J. Sep. Sci. 2007, 30, 3268 – 3295
tion, steam distillation, and maceration for the isolation
of the active components present in chamomile flower
heads [63]. The recovery of the flavonoid apigenin
obtained by supercritical CO2 after a 30-min extraction at
200 atm and 408C, was 71.4% compared to Soxhlet
extraction performed for 6 h and 125% compared to maceration
performed for three days. For some phenolic
compounds, the extraction recoveries are not sufficiently
high because the content of the organic modifier
is not sufficient for their complete isolation, especially in
the case of very polar phenolic acids.
Pressurised fluid extraction utilises conventional solvents
at controlled temperatures and pressures and has
been widely applied as a routine tool in natural product
extraction. As it uses less solvent in a shorter period of
time, can be automated, and retains the sample in an oxygen-
and light-free environment, it has the potential to be
a powerful tool in the nutraceutical industry. This kind of
extraction was proposed for the isolation of catechin and
epicatechin from tealeaves and from grape seeds [64].
A microwave-assisted extraction procedure was developed
for the simultaneous determination of isoflavonoids
in Radix Astragali [65]. The procedure showed the
highest extraction efficiency when compared to Soxhlet,
reflux, and ultrasonic extraction. A feature of conventional
extraction is that it influences the integrity of flavonoid
glycosides during prolonged extraction, thus
affecting reproducibility. According to this report, the
researchers overcame this drawback by using microwave-assisted
extraction.
An approach for automated, continuous, and rapid
extraction of flavonoids from Saussurea medusa Maxim
dried cell cultures has been developed in a newlydesigned
dynamic microwave-assisted extraction system
[66]. The main factors affecting the extraction process,
namely power of microwave irradiation, liquid/solid

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1 ไฮโตรไลซ์กรดฟินอลิไฮโตรไลซ์เปรี้ยวและสะพอนิฟิจะพบมากที่สุดวิธีการปล่อยกรด แม้ว่าพวกเขาอาจเปื่อยภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ เอนไซม์ในระบบย่อยคือเทคนิคการสำรอง แต่แพร่หลายน้อยวิธีไฮโตรไลซ์เปรี้ยวเกี่ยวข้องกับการรักษาสารสกัดจากพืชหรืออาหารตัวอย่างตัวเองกับอนินทรีย์กรด (เช่น HCl) กรดไหลย้อน หรือ เหนืออุณหภูมิกรดไหลย้อนในหรือสารทำอย่างอควี หรือแอลกอฮอล์ละลายที่ (เมทานอลถูกที่สุดทั่วไป) ช่วงกรด 1 2 N HCl และปฏิกิริยาเวลาตั้งแต่ 30 นาทีถึง 1 h. รายงานอควี HClการได้ทำลายกรด hydroxycinnamic Krygier ร้อยเอ็ดal. รายงานการสูญเสียสภาวะกรดแตกต่างกันไปด้วยรูปแบบของกรดฟีนอ ตั้งแต่ 15 ถึง 95% สำหรับ ocoumaricกรด และ กรด sinapic ตามลำดับ [44]สะพอนิฟิกระบวนการรักษาตัวอย่าง มีการแก้ไขปัญหาของ NaOH ที่ความเข้มข้นจาก 1 ไป 4 เมตร ส่วนใหญ่ปฏิกิริยาที่ถูกปล่อยเพื่อดำเนินต่อที่อุณหภูมิห้องใน15 นาทีถึงแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์ สอบสวนบางรายงานที่ปฏิกิริยาที่ทำ ในมืด และภายใต้บรรยากาศที่ inert เช่นก๊าซอาร์กอนหรือไนโตรเจน [45]มีการกล่าวว่า ปฏิกิริยาที่เอนไซม์ในระบบปล่อยฟีนอกรด เอนไซม์เช่น pectinases, cellulases และ amylasesลูกจ้างการสลายตัวของคาร์โบไฮเดรตเชื่อมโยง โหมดของการดำเนินการซึ่งกรดเหล่านี้จะออกเป็นที่รู้จักกัน Al. ร้อยเอ็ด Andreasen กล่าวถึง และเปรียบเทียบเตรียมเอนไซม์ต่าง ๆ หลายสำหรับการปล่อยกรดฟีนอจากผนังเซลล์ของข้าวไรย์ธัญพืช[46] . Yu et al. รายงานว่า กรดตามลำดับ a-amylaseและไฮโตรไลซ์เซลลูโลสอาจใช้กับการปล่อยกรดฟีนอจากข้าวบาร์เลย์ [47]2.2 ไฮโตรไลซ์ของ flavonoidsไฮโตรไลซ์ มักใช้เพื่อเอา moieties น้ำตาลจาก glycosides อาจเป็นกรด พื้นฐาน หรือเอนไซม์ในระบบมีการอ้างเอกสารจำนวนมากในการอ่านรีวิวก่อนหน้านี้ฉัน 2007 WILEY VCH Verlag GmbH & Co. เค Weinheim ที่ www.jss-journal.comรูปที่ 3 แผนผังตัวอย่างของกลยุทธ์ในการกำหนดการกรดฟีนอและ flavonoids ในชีวภาพของเหลว เครื่องดื่มพืช และอาหาร ตัวย่อ: SFE น้ำมัน supercriticalแยก MSPD เมตริกซ์เฟสของแข็งกระจายตัว SPMEเฟสของแข็ง microextraction ซีซีซี chromatography ทวนปัจจุบันFL, fluorescence สลัก ตรวจจับเปลวไฟ ionisationเบาะแส ตรวจจับอิเล็กตรอนSci. เจ.กันยายน 2007, 30, 3268-3295 เทคนิค 3273ศึกษาที่เกี่ยวข้องกับเงื่อนไขไฮโตรไลซ์สำหรับ flavonolglucuronides, flavonol glucosides และ flavone glucosidesตัวอย่างอาหารหก [48] ข้อมูลเหล่านี้พิสูจน์ได้ว่าระบุข้อเท็จจริงที่รับความเห็นชอบในเงื่อนไขต่าง ๆสามารถแทบไม่สามารถเข้าถึงไฮโตรไลซ์ของ anthocyanins จะ anthocyanidins เป็นขาดไม่ได้เป็นมาตรฐานมีโฟเลทสูงขาดแคลนโดยทั่วไปมีทำไฮโตรไลซ์ของมีโฟเลทสูง โดย refluxingในทานอ – 2 N HCl (aq) [49] หรือ 2 M HCl [50] อัลคาไลน์ไฮโตรไลซ์แยกออกส่วน acylated ของ acylatedanthocyaninsนักวิจัยอื่น ๆ รายงานว่า ฟีนอที่แยกของน้ำผึ้งถูก hydrolysed ใน 2 N NaOH [51]ขณะที่ glycosides flavones และ flavonolshydrolysed โดย refluxing ใน 1 – 2 M HCl 50% ทานอ –H2O v/v [52, 53]สำหรับของเหลวสรีรวิทยา (น้ำดี พลาสม่า เซรั่ม หรือปัสสาวะ),flavonoids แรกพฤษภาคมส่งไฮโตรไลซ์เอนไซม์ในระบบb glucuronidase และ sulfatase แยกต่างหาก หรือตามลำดับ [54] มีป้าย 13C flavonoid conjugatesการเตรียมพร้อมเพื่อให้แน่ใจว่าเหล่านี้เอนไซม์จะทำงานในแบบ incubates [55]2.3 แยกตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้ หลังจากที่จัดการอย่างเหมาะสม แรกขั้นตอนของกระบวนการเตรียมจะกัด บดและ homogenisation แยกเป็นขั้นตอนหลักสำหรับการกู้คืนและ phytochemicals กรรมการกจากแยกวัสดุโรงงาน ก่อนวิเคราะห์ มันมีผลต่อการธรรมชาติเคมี สกัดด้วยวิธีการจ้างงาน ตัวอย่างขนาดอนุภาค ตลอดจนสถานะของรบกวนสาร อาจเรียกขั้นตอนเพิ่มเติมในกรณีphenolics ที่ไม่พึงประสงค์และสารฟีนอไม่เอาเช่นไข ไขมัน terpenes และ chlorophyllsน่าสนใจสกัดของเหลว-ของเหลว และของแข็ง-ของเหลวมากที่สุดใช้ขั้นตอนก่อนการวิเคราะห์ของ polyphenolicsและ phenolics ง่ายในพืชธรรมชาติ พวกเขาจะส่วนใหญ่ยังใช้เทคนิค ส่วนใหญ่เนื่องจากของความสะดวก น่าใช้ ประสิทธิภาพ ความเกี่ยวข้องของไพศาลหรือสารทำละลายสกัดที่ใช้กันทั่วไปมี alcohols(เมทานอล เอทานอล), อะซิโตน อีเทอร์ diethyl และเอทิลacetate อย่างไรก็ตาม กรดฟีนอโพลาร์มาก (benzoic, cinnamicกรด) อาจไม่สามารถสกัดด้วยหรือสารทำละลายอินทรีย์บริสุทธิ์ และส่วนผสมของแอลกอฮอล์-น้ำ หรืออะซีโตน – น้ำแนะนำ น้อยหรือสารทำละลายขั้วโลก(dichloromethane เฮกเซน คลอโรฟอร์ม เบนซีน) เป็นเหมาะสำหรับการสกัดสาร nonpolar ไม่เกี่ยวข้อง(ไข น้ำมัน สเตอรอลส์ คลอโรฟิลล์) จากโรงงานเมตริกซ์การ ปัจจัยอื่น ๆ pH อุณหภูมิ ตัวทำ ละลาย sampletoอัตราส่วนปริมาณ และช่วงเวลา และหมายเลขแยกแต่ละขั้นตอน เล่นเป็นสำคัญบทบาทในขั้นตอนการสกัด สกัดมีเกือบเสมอ ซ้ำสองถึงสามเท่า และมีรวมสารสกัดจากFlavonoids สกัดจากชีวภาพเมทริกซ์คือโดยปกติหนึ่งในงานที่เร็วที่สุด และไม่ใช้เวลานาน[56, 57] นอกจากนี้ เนื่องจากการจัดการง่ายจำนวนตัวอย่างจะแยก วิเคราะห์ค่อนข้างเล็กลักษณะ เช่นค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์พิสูจน์ให้เป็นที่พอใจ เพื่อเสนอตัวอย่าง สำหรับนับพร้อมของ flavonoids หลายในพลาสม่าหนู เมตริกซ์ได้รับการรักษาได้ดังนี้ [58]: การพลาสม่า (50 จะ) ถูก acidified กับ 0.25 M HCl (10 จะ),ผสมกับเอทิล acetate (1 มล.), vortexed และ centrifugedระยะอินทรีย์ด้านบน (850 จะ) ได้หายไปเพื่อความแห้งกร้าน สารตกค้างถูก reconstituted ใน CH3CN-H2O(24:76, v/v ประกอบด้วย 0.01% HCOONH4) และ centrifugedSupernatant ต่อมาใช้สำหรับของเหลว chromatographicวิเคราะห์สกัด Soxhlet มักใช้แยก flavonoidsจากตัวอย่างที่เป็นของแข็ง ในกรณีส่วนใหญ่ เมทานอลอควีหรือใช้ acetonitrile เป็นตัวทำละลาย ในวรรณคดีเวลาแยกรายงานแตกต่างกันถึง 12 h ใช้โหมดการแยก Flavonoids ต่าง ๆ ถูกสกัดจากEuropea ทิเรีย Urtica dioica, Mentha spicata และ Hypericum perforatumหลังจาก 12 h สกัด Soxhlet ด้วยเมธานอ [59]ยัง กรดฟีนอมี quantitatively ได้รับโดยการเทคนิคระดับเดียวกันแยกจากส่วนทางอากาศของเอ็กไคนาเซียชงโค [60]Flavonoids ถือ constituents favoured เป็นเครื่องหมาย chemotaxonomic ในพืชเนื่องจากพวกเขาแสดงความหลากหลายโครงสร้างขนาดใหญ่และมีสารเคมีมั่นคง ถึงอย่างรวดเร็วแยกแยะชนิดต่าง ๆ เบิร์ช ใบไม้flavonoids ผิวที่สกัดจากใบไม้สดเดียวโดยการแช่ใบไม้ทั้งหมดโดยไม่ต้องบดเนื้อเยื่อ)60 ใน 1.5 mL ของเอทานอล 95% ที่อยู่ในการหลอด Eppendorf [61]สกัดของเหลว supercritical (SFE) ให้ค่อนข้างทำความสะอาด สารสกัดจากสารบางอย่างสลายตัวซึ่งอาจ emanate จากแสงความยาวอุณหภูมิสูงและออกซิเจน นอกจากนี้ สารสกัดประกอบด้วยไม่มีคลอโรฟิลล์และสารประกอบอื่น ๆ nonpolar ซึ่งเป็นไม่ละลายใน supercritical CO2 เทคนิคนี้จะใช้ได้กับโรงงานตัวอย่าง และยังสามารถใช้ร่วมกันเทคนิคการเตรียมตัวอย่าง มักมีตัวอย่างทั้งหมดแห้งก่อนทดสอบ SFE เป็น flavonoids สูงโพลาร์ คาดที่สกัด 100% CO2 Solvatingแตกต่างกันของเหลว supercritical และประสิทธิภาพในการแยกจะดีขึ้นอย่างเด่นชัด โดยการควบคุมความดันหรือโดยการเพิ่มอินทรีย์วิเศษณ์ เช่นเมทานอล ในSFE ของ flavonoids จากฐาน Scutellaria, Lin et al. สังเกตว่า สำหรับ g 1 ของตัวอย่าง 3 mL ของเมทานอล 70% ในการเพิ่มปริมาณ 20 mL ของ CO2 ให้สกัดมากดีกว่าบริสุทธิ์เมทานอล [62] ซึ่งอาจเนื่องจากจะ 30% ของน้ำเพิ่มเติม เพิ่มขั้ว ของตัวปรับ เปลี่ยน และขั้วโลกconstituents จะดึงข้อมูลทำได้ง่ายขึ้น ในรายงาน SFE ถูกเปรียบเทียบกับ Soxhlet extraci2007 WILEY VCH Verlag GmbH & Co. เค Weinheim ที่ www.jss-journal.com3274 C. D. Stalikas J. กันยายน Sci. 2007, 30, 3268-3295สเตรชัน กลั่นไอน้ำ และ maceration สำหรับการแยกส่วนประกอบใช้งานอยู่ในดอกไม้ดอกหัว [63] การฟื้นตัวของ flavonoid apigeninรับ โดย supercritical CO2 หลังสกัด 30 นาทีที่เอทีเอ็มและ 408C, 200 ได้ 71.4% เมื่อเทียบกับ Soxhletแยกดำเนินการ 6 h 125% เมื่อเทียบกับ macerationดำเนินการ 3 วัน สำหรับบางฟีนอสาร recoveries สกัดไม่เพียงพอสูงเนื่องจากเนื้อหาของการปรับอินทรีย์ไม่เพียงพอสำหรับแยกสมบูรณ์ของพวกเขา โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีที่กรดฟีนอโพลาร์มากสกัดของเหลว pressurised utilises หรือสารทำละลายทั่วไปที่ควบคุมอุณหภูมิ และความดัน และมีการนำไปใช้เป็นเครื่องมือประจำในผลิตภัณฑ์ธรรมชาติอย่างกว้างขวางสกัด ขณะที่ใช้ตัวทำละลายน้อยลงในระยะสั้นเวลา สามารถอัตโนมัติ และเก็บตัวอย่างในการออกซิเจนและระบบไฟฟรี มีศักยภาพที่จะเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพในอุตสาหกรรม nutraceutical ชนิดของสกัดได้เสนอแยกสารสกัดจาก และepicatechin จาก tealeaves และเมล็ดองุ่น [64]ได้รับการพัฒนากระบวนการสกัดช่วยไมโครเวฟในการกำหนดการเกิด isoflavonoidsในฐาน Astragali [65] แสดงให้เห็นว่ากระบวนการประสิทธิภาพการแยกสูงสุดเมื่อเทียบกับ Soxhletกรดไหลย้อน ทางแยกอัลตราโซนิก ลักษณะของทั่วไปแยกเป็นที่มีผลต่อความสมบูรณ์ของ flavonoidglycosides ในระหว่างขยายแยก ดังนั้นส่งผลกระทบต่อ reproducibility รายงานนี้ การนักวิจัย overcame คืนนี้ โดยใช้ไมโครเวฟช่วยสกัดวิธีการอัตโนมัติ ต่อเนื่อง และอย่างรวดเร็วสกัดของ flavonoids จากเมดูซ่า Saussurea แม็กเซลล์แห้งวัฒนธรรมได้รับการพัฒนาในการ newlydesignedระบบสกัดช่วยไมโครเวฟแบบไดนามิก[66] . ปัจจัยหลักที่ส่งผลกระทบต่อกระบวนการสกัดคือพลังงานของไมโครเวฟวิธีการฉายรังสี ของเหลว/ของแข็ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 ย่อยของกรดฟีนอลไฮโดรไลซิกรดและสะพอที่พบมากที่สุดหมายถึงการปล่อยกรดแม้ว่าพวกเขาจะสลายภายใต้เงื่อนไขเหล่า ปล่อยเอนไซม์เป็นเทคนิคทางเลือก แต่ที่แพร่หลายน้อย. วิธีการย่อยสลายเป็นกรดที่เกี่ยวข้องกับการรักษาสารสกัดจากพืชหรือตัวอย่างอาหารที่ตัวเองด้วยนินทรีย์กรด(เช่น HCl) ที่กรดไหลย้อนหรือสูงกว่าอุณหภูมิกรดไหลย้อนในตัวทำละลายน้ำหรือแอลกอฮอล์(เมทานอลเป็นส่วนใหญ่ร่วมกัน) กรดช่วง 1-2 HCl และไม่มีปฏิกิริยาในช่วงเวลาตั้งแต่วันที่ 30 นาทีถึง 1 ชั่วโมง น้ำ HCl มีรายงานว่าจะมีการทำลายกรดhydroxycinnamic Krygier et al, รายงานว่าการสูญเสียที่เป็นกรดภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่างกันกับรูปแบบของกรดฟีนอลตั้งแต่ 15-95% สำหรับ ocoumaric กรดและกรด sinapic ตามลำดับ [44]. Saponification รายละเอียดการรักษาตัวอย่างด้วยวิธีการแก้ปัญหาของNaOH ความเข้มข้น 1-4 เมตร ส่วนใหญ่เกิดปฏิกิริยาที่เหลือจะดำเนินการที่อุณหภูมิห้องนาน15 นาทีขึ้นไปในชั่วข้ามคืน การตรวจสอบบางคนรายงานว่าปฏิกิริยาที่มีการดำเนินการในที่มืดเช่นเดียวกับภายใต้บรรยากาศเฉื่อยเช่นอาร์กอนหรือก๊าซไนโตรเจน[45]. ปฏิกิริยาเอนไซม์ที่ได้รับการกล่าวว่าจะปล่อยฟีนอลกรด เอนไซม์เช่นเพคติเนส, เซลลูและ amylases มีการจ้างงานสำหรับการย่อยสลายของคาร์โบไฮเดรตเชื่อมโยง โหมดของการดำเนินการที่กรดเหล่านี้จะถูกปล่อยออกมาเป็นที่รู้จักกัน Andreasen et al, กล่าวถึงและเมื่อเทียบกับหลายเตรียมเอนไซม์แตกต่างกันสำหรับการเปิดตัวของกรดฟีนอลจากผนังเซลล์ของเมล็ดข้าว[46] Yu et al, รายงานว่ากรดลำดับเป็นอะไมเลส, และการย่อยสลายเซลลูโลสอาจจะใช้บังคับกับการเปิดตัวของกรดฟีนอลจากข้าวบาร์เลย์ [47]. 2.2 ย่อยของ flavonoids ย่อยที่ใช้บ่อยในการลบ moieties น้ำตาลจากไกลโคไซด์อาจจะเป็นกรดขั้นพื้นฐานหรือเอนไซม์. เอกสารจำนวนมากได้รับการอ้างถึงในก่อนหน้านี้ที่กว้างขวางฉัน 2007 WILEY-VCH เวอร์ GmbH & Co. เคจีเอเอ Weinheim www.jss-journal.com รูปที่ 3 แผนผังของกลยุทธ์สำหรับความมุ่งมั่นของกรดฟีนอลและflavonoids ในของเหลวทางชีวภาพ เครื่องดื่มพืชและอาหาร ตัวย่อ: SFE ของเหลว supercritical สกัด; MSPD, เมทริกซ์กระจายของแข็งเฟส; อยู, ของแข็งเฟส microextraction; CCC, โคเคาน์เตอร์ปัจจุบันFL, เรืองแสง; FID ตรวจจับเปลวไฟ Ionisation; ECD การตรวจสอบการจับอิเล็กตรอน. เจ กันยายนวิทย์ 2007, 30, 3268-3295 เทคนิคอื่น ๆ 3273 การศึกษาที่เกี่ยวข้องกับการย่อยสลายเงื่อนไขสำหรับ flavonol glucuronides, glucosides flavonol และ glucosides flavone, หกตัวอย่างอาหาร [48] ข้อมูลเหล่านี้พิสูจน์ให้เห็นว่าแตกต่างกันแสดงให้เห็นความจริงที่ว่าสอดคล้องกับเงื่อนไขที่แทบจะไม่สามารถเข้าถึงได้. ไฮโดรไลซิของ anthocyanins เพื่อ anthocyanidins มักจะขาดไม่ได้มาตรฐานanthocyanin จะหายาก. ไฮโดรไลซิของ anthocyanin จะทำโดยทั่วไปกรดในเมธานอล- 2 ไม่มี HCl (AQ) [49] หรือ 2 M HCl [50] อัลคาไลน์แข็งกระด้างย่อยสลายส่วน acylated ของ acylated. anthocyanins วิจัยอื่น ๆ รายงานว่าสารสกัดฟีนอลของน้ำผึ้งดอกทานตะวันถูกย่อยใน2 ไม่มี NaOH [51] ในขณะที่ไซด์ของฟลาโวนและ flavonols ถูกย่อยโดยกรดใน1 - 2 M HCl ใน 50% เมธานอล - H2O ปริมาตร / ปริมาตร [52, 53]. สำหรับของเหลวทางสรีรวิทยา (น้ำดีพลาสม่า, เซรั่มหรือปัสสาวะ) flavonoids แรกอาจจะถูกส่งต่อการย่อยของเอนไซม์ด้วยb-glucuronidase และ sulfatase แยกหรือตามลำดับ[54] 13C ป้าย conjugates flavonoid ได้รับการเตรียมความพร้อมและพร้อมที่จะให้แน่ใจว่าเหล่าเอนไซม์มีการใช้งานในincubates เมื่อ [55]. 2.3 สกัดดังที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้หลังการสัมผัสตัวอย่างที่เหมาะสมเป็นครั้งแรกขั้นตอนของขั้นตอนการเตรียมกำลังโม่บดและhomogenisation . สกัดเป็นขั้นตอนหลักสำหรับการกู้คืนและการแยกของสารอาหารจากพืชที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพจากวัสดุพืชก่อนที่จะวิเคราะห์ มันเป็นเรื่องของพวกเขาได้รับอิทธิพลจากลักษณะทางเคมี, วิธีการสกัดที่ใช้ตัวอย่างขนาดอนุภาคเช่นเดียวกับการปรากฏตัวของรบกวนสาร ขั้นตอนเพิ่มเติมอาจจะเรียกว่าเพราะถ้าการกำจัดของฟีนอลที่ไม่พึงประสงค์และสารที่ไม่ใช่ฟีนอลเช่นไขไขมันterpenes และ chlorophylls เป็นที่น่าสนใจ. ของเหลวของเหลวและการสกัดของแข็งของเหลวเป็นส่วนใหญ่วิธีการที่ใช้กันทั่วไปก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ polyphenolics และฟีนอลที่เรียบง่ายในพืชธรรมชาติ พวกเขาจะยังคงเป็นเทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายส่วนใหญ่เป็นเพราะความสะดวกในการใช้งานอย่างมีประสิทธิภาพและการบังคับใช้ที่หลากหลาย. นิยมใช้ตัวทำละลายในการสกัดที่มีแอลกอฮอล์(เมทานอลเอทานอล), อะซิโตน, อีเทอร์และเอทิลอะซิเตท แต่ขั้วโลกมากกรดฟีนอล (เบนโซอิก, ซินนามิกกรด) ไม่สามารถสกัดได้อย่างสมบูรณ์ด้วยตัวทำละลายอินทรีย์บริสุทธิ์และสารผสมของ -water แอลกอฮอล์หรืออะซีโตน-water มีการแนะนำ ขั้วโลกละลายน้อย(ไดคลอโรมีเทนคลอโรฟอร์มเฮกเซน, เบนซิน) มีความเหมาะสมสำหรับการสกัดของสารภายนอกnonpolar (แว็กซ์, น้ำมัน, sterols, คลอโรฟิล) จากโรงงานเมทริกซ์ ปัจจัยอื่น ๆ เช่นค่า pH อุณหภูมิ sampleto ตัวทำละลายอัตราส่วนปริมาณและจำนวนและระยะเวลาของขั้นตอนการสกัดของแต่ละบุคคลยังเล่นที่มีความสำคัญที่มีบทบาทในขั้นตอนการสกัด จะสกัด, เกือบเสมอซ้ำ 2-3 ครั้งและสารสกัดจะรวมกัน. สกัดของ flavonoids จากการฝึกอบรมทางชีวภาพคือมักจะหนึ่งในงานที่เร็วและเสียเวลาน้อยลง[56, 57] นอกจากนี้เนื่องจากการจัดการที่เรียบง่ายของจำนวนเงินที่ค่อนข้างเล็กของตัวอย่างที่จะสกัดการวิเคราะห์ลักษณะเช่นค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์พิสูจน์แล้วว่าเป็นที่น่าพอใจ พูดตัวอย่างสำหรับปริมาณพร้อมกันของ flavonoids หลายในพลาสมาหนูเมทริกซ์ได้รับการปฏิบัติดังต่อไปนี้[58]: ในพลาสม่า(50 LL) ถูกกรด 0.25 M HCl (10 LL) ผสมกับน้ำนม (1 มิลลิลิตร ) การ vortex และหมุนเหวี่ยง. เฟสอินทรีย์บน (850 LL) ได้รับการระเหยแห้ง; สารตกค้างที่ถูกสร้างขึ้นใน CH3CN -H2O (24:76, v / V ที่มี 0.01% HCOONH4) และหมุนเหวี่ยง. ใสต่อมาใช้สำหรับสารของเหลววิเคราะห์. สกัดวิธีการสกัดแบบมักจะถูกใช้เพื่อแยก flavonoids จากตัวอย่างที่เป็นของแข็ง ในกรณีส่วนใหญ่เมทานอลในน้ำหรือ acetonitrile ถูกนำมาใช้เป็นตัวทำละลาย ในวรรณคดีรายงานการสกัดครั้งแตกต่างกันถึง 12 ชั่วโมงโดยใช้โหมดการสกัด flavonoids ต่าง ๆ ที่สกัดจากTilia Europea, Urtica dioica, Mentha spicata และ Hypericum perforatum หลังจาก 12 ชั่วโมงสกัดวิธีการสกัดแบบกับเมทานอล [59]. นอกจากนี้ยังมีกรดฟีนอลที่ได้รับเชิงปริมาณโดยเทคนิคการสกัดเดียวกันจากส่วนทางอากาศของ Echinacea purpurea [60] . Flavonoids จะถือว่าเป็นองค์ประกอบที่ชื่นชอบเป็นเครื่องหมายchemotaxonomic ในพืชเพราะพวกเขาแสดงให้เห็นความหลากหลายของโครงสร้างที่มีขนาดใหญ่และมีความเสถียรทางเคมี เพื่อให้เห็นความแตกต่างได้อย่างรวดเร็วระหว่างเผ่าพันธุ์ไม้เรียวต่างๆใบflavonoids พื้นผิวที่สกัดจากใบสดเดียวโดยการแช่ใบทั้งหมด(ไม่บดเนื้อเยื่อ) 60 ใน 1.5 ml เอทานอล 95% ที่อยู่ในหลอดEppendorf [61]. ของเหลว Supercritical สกัด (SFE) ให้ค่อนข้างสารสกัดสะอาดปราศจากสารย่อยสลายบางอย่างซึ่งอาจออกมาจากการสัมผัสที่มีความยาวที่มีอุณหภูมิสูงและออกซิเจน นอกจากนี้สารสกัดมีไม่มีคลอโรฟิลและสารไม่มีขั้วอื่น ๆ ที่ละลายในCO2 supercritical เทคนิคนี้จะมีผลบังคับใช้ตัวอย่างพืชและยังสามารถใช้ร่วมกับคนอื่น ๆ เทคนิคการเตรียมตัวอย่าง ตัวอย่างทั้งหมดมักจะแห้งก่อนที่จะมีการทดสอบ SFE เป็นที่คาดหวัง flavonoids ขั้วโลกสูงไม่ได้สกัดโดยCO2 100% solvating พลังของของเหลว supercritical จะแตกต่างกันและมีประสิทธิภาพการสกัดจะดีขึ้นอย่างเห็นได้ชัดโดยการควบคุมความดันหรือโดยการเพิ่มการปรับเปลี่ยนอินทรีย์เช่นเมทานอล ในSFE ของ flavonoids จาก Scutellaria กี่หลิน et al, ตั้งข้อสังเกตว่าสำหรับ 1 กรัมของตัวอย่างเพิ่ม 3 มิลลิลิตรเมทานอล 70% ใน 20 มลของ CO2 สกัดให้ดีขึ้นกว่าที่บริสุทธิ์เมทานอล[62] นี้อาจจะเป็นเพราะวันที่ 30% ของน้ำจะเพิ่มสูงขึ้นอีกขั้วของการปรับปรุงและขั้วโลกองค์ประกอบจึงจะสกัดได้ง่ายขึ้น ในรายงานอื่น SFE ถูกเมื่อเทียบกับวิธีการสกัดแบบ extraci 2007 WILEY-VCH เวอร์ GmbH & Co. เคจีเอเอ Weinheim www.jss-journal.com 3274 ซีดี Stalikas เจกันยายนวิทย์ 2007, 30, 3268-3295 การกลั่นไอน้ำและยุ่ยสำหรับการแยกชิ้นส่วนที่ใช้งานอยู่ในดอกไม้ดอกคาโมไมล์หัว[63] การฟื้นตัวของ apigenin flavonoid ที่ได้รับจาก CO2 supercritical หลังจากการสกัด 30 นาทีที่200 และตู้เอทีเอ็ม 408C เป็น 71.4% เมื่อเทียบกับวิธีการสกัดแบบสกัดดำเนินการเป็นเวลา6 ชั่วโมงและ 125% เมื่อเทียบกับยุ่ยดำเนินการเป็นเวลาสามวัน สำหรับฟีนอลบางสารประกอบกลับคืนสกัดไม่เพียงพอสูงเนื่องจากเนื้อหาของปรับปรุงอินทรีย์จะไม่เพียงพอสำหรับการแยกของพวกเขาที่สมบูรณ์แบบโดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีที่มีกรดฟีนอลขั้วโลกมาก. แรงดันการสกัดของเหลวใช้ตัวทำละลายธรรมดาที่อุณหภูมิควบคุมและความกดดันและมีความถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเป็นเครื่องมือประจำในผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติที่สกัด ที่จะใช้เป็นตัวทำละลายน้อยลงในระยะเวลาที่สั้นของเวลาได้โดยอัตโนมัติและยังคงรักษาตัวอย่างในออกซิเจนสภาพแวดล้อมและแสงฟรีก็มีศักยภาพที่จะเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพในอุตสาหกรรมnutraceutical ชนิดของการสกัดที่เสนอในการแยกของ catechin และ epicatechin จากใบชาและเมล็ดองุ่นจาก [64]. ขั้นตอนการสกัดไมโครเวฟช่วยได้รับการพัฒนาสำหรับการวัดพร้อมกันของ isoflavonoids ใน Radix Astragali [65] ขั้นตอนที่แสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพในการสกัดสูงที่สุดเมื่อเปรียบเทียบกับวิธีการสกัดแบบ, กรดไหลย้อนและการสกัดล้ำ คุณลักษณะของการชุมนุมสกัดก็คือว่ามันมีผลต่อความสมบูรณ์ของ flavonoid ไกลโคไซด์ในระหว่างการสกัดเป็นเวลานานจึงมีผลกระทบต่อการทำซ้ำ ตามรายงานนี้นักวิจัยเอาชนะอุปสรรคนี้โดยใช้ไมโครเวฟช่วยสกัด. วิธีการสำหรับอัตโนมัติอย่างต่อเนื่องและรวดเร็วในการสกัดของ flavonoids จาก Saussurea แมงกะพรุน Maxim แห้งเซลล์เพาะเลี้ยงได้รับการพัฒนาใน newlydesigned แบบไดนามิกระบบสกัดไมโครเวฟช่วย[66 ] ปัจจัยหลักที่มีผลกระทบต่อกระบวนการสกัดคือพลังของการฉายรังสีไมโครเวฟ, ของเหลว / ของแข็ง