2.3. Transformation of Synechocysti

2.3. Transformation of Synechocystis cells
Synechocystis wild type cells grown in 50 mL of liquid BG11
medium without antibiotic for 2–3 days (OD730 6 0.5) were collected
by centrifugation (2790g) of the culture at room temperature
for 5 min, resuspended in fresh medium to concentrate cells
suspension to OD730  2.5 in microcentrifuge tube. At least 10 lg
of plasmid DNA was added into 500 lL of cell suspension in a
microcentrifuge tube. The mixture was incubated under growth
condition for at least 6 h before spreading on a 0.45 lm sterile
hydrophilic mixed cellulose ester membrane filter placed over a
BG11 agar plate and incubated for 24 h. The filter was then placed
on a selective BG11 agar plate containing 30 lg/mL chloramphenicol.
Colonies were normally obtained from the selective agar plate
within 3 weeks of incubation. To ensure correct integration, the
genes of OE strains were analyzed by PCR using gene specific primers
(Table 2).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. การเปลี่ยนแปลงของเซลล์ SynechocystisSynechocystis เซลล์ชนิดป่าที่ปลูกใน 50 มล.ของเหลว BG11ปานกลาง โดยยาปฏิชีวนะ 2-3 วัน (OD730 6 0.5) เก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยง (2790 g) ของวัฒนธรรมที่อุณหภูมิห้อง5 นาที resuspended ในสมาธิเซลล์สดช่วงล่างเป็น OD730 2.5 ในหลอดไมโคร น้อย 10 lgของ plasmid DNA เพิ่มเป็น 500 จะระงับเซลล์ในการท่อไมโคร ส่วนผสมมี incubated ภายใต้การเจริญเติบโตเงื่อนไขสำหรับอย่างน้อย 6 ชั่วโมงก่อนบน 0.45 ปลอดเชื้อ lmน้ำผสมเซลลูโลสเอสเทอร์เมมเบรนกรองอยู่เหนือการแผ่นวุ้น BG11 และรับการกก 24 ชม ตัวกรองวางบนเลือก BG11 วุ้นจานที่ประกอบด้วย 30 คคัส lg/mLอาณานิคมที่ได้รับตามปกติจากแผ่นวุ้นเลือกภายใน 3 สัปดาห์การกกไข่ เพื่อให้การรวมถูกต้อง การมีวิเคราะห์ยีนสายพันธุ์ OE โดย PCR ที่ใช้ไพรเมอร์เฉพาะยีน(ตารางที่ 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การเปลี่ยนแปลงของเซลล์ไซยาโนแบคทีเรีย
ไซยาโนแบคทีเรียเซลล์ชนิดป่าที่ปลูกใน 50 มล BG11 ของเหลว
ขนาดกลางโดยไม่ต้องใช้ยาปฏิชีวนะ 2-3 วัน (OD730 6 0.5) ได้ถูกรวบรวม
โดยการหมุนเหวี่ยง (2790? g) ของวัฒนธรรมที่อุณหภูมิห้อง
เป็นเวลา 5 นาที, resuspended ในผลไม้สด กลางที่จะมีสมาธิเซลล์
ระงับ OD730? 2.5 ในหลอดไมโคร อย่างน้อย 10 LG
ของพลาสมิดดีเอ็นเอถูกเพิ่มเข้าไปใน 500 LL ของเซลล์แขวนลอยใน
หลอดไมโคร ส่วนผสมที่ถูกบ่มภายใต้การเจริญเติบโต
ในสภาพเป็นเวลาอย่างน้อย 6 ชั่วโมงก่อนที่จะแพร่กระจายบน 0.45 LM หมัน
hydrophilic เซลลูโลสผสมกรองเมมเบรนเอสเตอร์ที่วางเหนือ
จาน BG11 วุ้นและบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ตัวกรองถูกวางไว้แล้ว
บนแผ่นวุ้น BG11 เลือกที่มี 30 LG / mL chloramphenicol.
อาณานิคมที่ได้รับตามปกติจากจานเลี้ยงเชื้อคัดเลือก
ภายใน 3 สัปดาห์ของการบ่ม บูรณาการเพื่อให้แน่ใจว่าถูกต้อง
ยีนสายพันธุ์ OE นำมาวิเคราะห์โดยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงของยีน
(ตารางที่ 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การเปลี่ยนแปลงของ synechocystis เซลล์synechocystis ป่าชนิดเซลล์ที่ปลูกใน bg11 50 มล. ของของเหลวขนาดกลางไม่มียาปฏิชีวนะสำหรับ 2 - 3 วัน ( od730 6 2 ) ศึกษาโดยการเหวี่ยงแยก ( 2790g ) ของวัฒนธรรมที่อุณหภูมิห้อง5 นาที resuspended ปานกลาง สดสมาธิ เซลล์ระงับ od730 2.5 ในหลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ . อย่างน้อย 10 จีของพลาสมิดดีเอ็นเอเพิ่มเป็น 500 จะของเซลล์แขวนลอยในหลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ . ส่วนผสมจะถูกบ่มภายใต้การเจริญเติบโตเงื่อนไขอย่างน้อย 6 ชั่วโมงก่อนที่จะแพร่กระจายบน 0.45 LM ปลอดเชื้อน้ำผสมเซลลูโลสเมมเบรนกรองวางอยู่เหนือเbg11 agar plate บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ตัวกรองที่ถูกวางไว้แล้วในการเลือก bg11 agar plate ที่มี 30 LG / มิลลิลิตรของส .โคโลนีปกติที่ได้จากการเลือกแผ่นวุ้นภายในสัปดาห์ที่ 3 ของการบ่ม เพื่อให้แน่ใจว่ารวมที่ถูกต้องยีนของ OE สายพันธุ์ โดยใช้วิธี PCR โดยใช้ไพร์เมอร์จำเพาะของยีน( ตารางที่ 2 )