Bats were captured with permission

Bats were captured with permission from the Department of National Parks, Wildlife and
Plant Conservation. The Institutional Animal Care and Use Committee at the University of
California, Davis (protocol number: 16048) approved the capture and sample collection.
Bats’ species were identified in the field by experienced Thai mammalogist (PD) based on
their external morphological characteristics as described by Lekagul & McNeely [16,17].
Fresh bat fecal pellets were individually stored in 0.5 ml of RNAlater® RNA Stabilization
Reagent (Qiagen, Germany) while each rectal swab was placed into 1 ml of NucliSens®
Lysis Buffer (bioMérieux, France), and then stored at −80°C until further analysis. Samples
were examined using broadly reactive consensus hemi-nested Reverse Transcription PCR
(RT-PCR) with degenerate PCR primers designed to detect all CoV lineages, targeting the
RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) gene [18]. Amplification product was visualized
using 2% agarose gel electrophoresis. The RdRP PCR product was sequenced directly using
an automated ABI PRISM 377 model sequencer or cloned using the pGEM®-T Easy Vector
System before sequencing. Initially, to assess clonal sequence diversity, ten individual clones
from each specimen were sequenced. Sequences were edited using Bio-edit program. Sixtythree
CoV sequences obtained from 47 specimens (more than one sequence was found from 4
specimens) were deposited in GenBank with accession numbers [KJ020577 to KJ020636,
KJ652018, KJ868721 and KJ868722]. Phylogenetic trees were constructed based on 353 bp
RdRp gene sequence, corresponding to nucleotides 14,355 - 14,707 in Human CoV 229E
genome (GenBank accession no. AF304460) using the maximum likelihood method.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีจับค้างคาวได้รับอนุญาตจากกรมของอุทยานแห่งชาติ สัตว์ป่า และพืชอนุรักษ์ สถาบันดูแลสัตว์และใช้คณะกรรมการที่มหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนีย Davis (โพรโทคอลหมายเลข: 16048) อนุมัติเก็บรวบรวมข้อมูลและตัวอย่างชนิดของค้างคาวระบุอยู่ในฟิลด์ โดยประสบการณ์ไทย mammalogist (PD) ตามของลักษณะภายนอกของอธิบายไว้โดยเลขะกุล & McNeely [16,17]ขี้ fecal ค้างคาวสดถูกเก็บไว้ใน 0.5 ml ของเสถียรภาพ RNAlater ®อาร์เอ็นเอแต่ละรีเอเจนต์ (Qiagen เยอรมนี) ในขณะที่กวาดแต่ละไส้ที่อยู่ในมล NucliSens ® 1บัฟเฟอร์การ lysis (bioMérieux ฝรั่งเศส), แล้ว เก็บไว้ที่ −80 ° C จนกว่าจะวิเคราะห์ต่อไป ตัวอย่างถูกตรวจสอบโดยใช้ปฏิกิริยาทั่วไปมติซีกซ้อนกลับ Transcription PCR(RT-PCR) กับสังกะสี วัสดุ degenerate PCR เพื่อตรวจหาเชื้อชาติ CoV ทั้งหมด การกำหนดเป้าหมายขึ้นอยู่กับอาร์เอ็นเออาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส (RdRp) ยีน [18] มี visualized ขยายผลิตภัณฑ์ใช้ 2% agarose เจ electrophoresis ผลิตภัณฑ์ RdRP PCR ถูกเรียงลำดับโดยตรงโดยใช้อัตโนมัติ 377 ปริซึม ABI รุ่น sequencer การโคลนโดยใช้ pGEM ®-T เวกเตอร์กลายระบบก่อนจัดลำดับ เริ่มแรก การประเมินความหลากหลายลำดับ clonal โคลนแต่ละสิบจากตัวอย่างแต่ละถูกเรียงลำดับ ลำดับถูกแก้ไขโดยใช้โปรแกรมแก้ไขทางชีวภาพ Sixtythreeลำดับ CoV รับจาก 47 specimens (ลำดับที่หนึ่งได้ค้นพบจาก 4specimens) ได้ฝากใน GenBank กับทะเบียนเลข [KJ020577 เพื่อ KJ020636KJ652018, KJ868721 และ KJ868722] ต้นไม้ phylogenetic ถูกสร้างตาม 353 bpลำดับยีน RdRp ที่สอดคล้องกับนิวคลีโอไทด์ 14,355 14,707 ใน CoV มนุษย์ 229Eจีโนม (GenBank ทะเบียนไม่ AF304460) โดยใช้วิธีความเป็นไปได้สูงสุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ค้างคาวถูกจับได้รับอนุญาตจากกรมอุทยานแห่งชาติสัตว์ป่าและพันธุ์พืช ดูแลสัตว์สถาบันและการใช้คณะกรรมการที่มหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนียเดวิส (หมายเลขโปรโตคอล: 16048) ได้รับการอนุมัติการเก็บรวบรวมการจับภาพและตัวอย่าง. สายพันธุ์ค้างคาว 'ถูกระบุในสนามโดยมีประสบการณ์ mammalogist ไทย (PD) ขึ้นอยู่กับลักษณะทางสัณฐานวิทยาของพวกเขาภายนอกตามที่อธิบายไว้โดย Lekagul และ McNeely [16,17]. สดค้างคาวเม็ดอุจจาระถูกเก็บไว้เป็นรายบุคคลใน 0.5 มิลลิลิตรRNAlater® RNA เสถียรภาพReagent (Qiagen, เยอรมนี) ขณะที่แต่ละเช็ดล้างทวารหนักถูกนำมาวางเป็น 1 มิลลิลิตรNucliSens®สลายบัฟเฟอร์(bioM? rieux ฝรั่งเศส) และเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนถึงการวิเคราะห์ต่อไป ตัวอย่างมีการตรวจสอบโดยใช้ฉันทามติปฏิกิริยาในวงกว้างครึ่ง-ซ้อนกันกลับถอดความ PCR (RT-PCR) ด้วยไพรเมอร์ PCR เลวออกแบบมาเพื่อตรวจสอบ lineages COV ทั้งหมดกำหนดเป้าหมายrna โพลิเมอร์ขึ้นอยู่กับอาร์เอ็นเอ (RdRp) ยีน [18] สินค้าที่ได้รับการขยายภาพโดยใช้ 2% ข่าวคราว agarose ผลิตภัณฑ์ PCR RdRP ได้ติดใจโดยตรงโดยใช้อัตโนมัติABI PRISM 377 ซีเควนรูปแบบหรือโคลนใช้pGEM®-T ง่ายเวกเตอร์ระบบก่อนลำดับ ในขั้นต้นในการประเมินความหลากหลายของลำดับ clonal สิบโคลนของแต่ละบุคคลจากแต่ละชิ้นงานที่มีลำดับขั้นตอน ลำดับถูกแก้ไขโดยใช้โปรแกรม Bio-แก้ไข Sixtythree COV ลำดับที่ได้รับจาก 47 ตัวอย่าง (มากกว่าหนึ่งลำดับก็พบว่าตั้งแต่วันที่ 4 ตัวอย่าง) ถูกนำมาฝากใน GenBank กับหมายเลขภาคยานุวัติ [KJ020577 เพื่อ KJ020636, KJ652018, KJ868721 และ KJ868722] ต้นไม้ที่ถูกสร้างขึ้นบนพื้นฐานของ 353 bp ยีน RdRp สอดคล้องกับนิวคลีโอ 14355 - 14707 มนุษย์ COV 229E จีโนม (GenBank ภาคยานุวัติไม่มี AF304460.) โดยใช้วิธีโอกาสสูงสุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ค้างคาวถูกจับด้วยการอนุญาตจากกรมอุทยานแห่งชาติ สัตว์ป่า และพันธุ์พืช
การอนุรักษ์พืช สถาบันดูแลสัตว์และการใช้คณะกรรมการที่มหาวิทยาลัย
แคลิฟอร์เนีย เดวิส ( โปรโตคอลหมายเลข : มีได้รับการจับและการเก็บตัวอย่าง .
ค้างคาว ' ชนิดถูกระบุในฟิลด์โดยมีประสบการณ์ mammalogist ไทย ( PD ) ตาม
ลักษณะภายนอกของพวกเขา ตามที่อธิบายไว้โดยเลขะกุล&อันเป็น McNeely [ ] .
ค้างคาวสดอุจจาระแบบเก็บไว้ในอัตรา 0.5 ml ของ rnalater ® RNA เสถียรภาพ
Reagent ( QIAGEN , เยอรมนี ) ในขณะที่แต่ละทวารไม้กวาดวางอยู่ใน 1 มิลลิลิตร nuclisens ®
การสลายบัฟเฟอร์ ( biom é rieux , ฝรั่งเศส ) , และเก็บไว้ที่ 80 °− C จนถึงการวิเคราะห์ต่อไป
ตัวอย่างมีการใช้ในวงกว้างเป็นเอกฉันท์ Hemi อยู่กลับถอดความ PCR
( RT-PCR ) ด้วยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อตรวจจับการเมื่อปิดทั้งหมด เป้าหมาย
RNA อาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส ( ยีน ) rdrp ) [ 18 ] ผลิตภัณฑ์ขยายเป็นปรากฏการณ์
โดยใช้ 2% , เจล การ rdrp PCR ผลิตภัณฑ์นี้โดยตรงโดยใช้
อัตโนมัติแบบซีเควนหรือ ABI ปริซึมเป็นโคลนใช้ pgem ® - T ง่ายเวกเตอร์
ระบบก่อนของ ในขั้นต้น เพื่อประเมินงานลำดับความหลากหลาย
โคลนแต่ละสิบจากแต่ละตัวอย่างถูกนี้ ลำดับถูกแก้ไข โดยใช้ไบโอ แก้ไขโปรแกรม sixtythree
ปิดลำดับที่ได้รับจาก 47 ตัวอย่าง ( มากกว่าหนึ่งลำดับ พบว่าจาก 4
ตัวอย่าง ) ฝากเงินกับการพบตัวเลข [ kj020577 เพื่อ kj020636
kj652018 , , และ kj868721 kj868722 ] ต้นไม้ ซึ่งถูกสร้างจาก 353 bp
rdrp ลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนที่ 14355 - 14707 ในจีโนมมนุษย์ ( 229e
มีขนาดเพิ่มขึ้นไม่ af304460 ) โดยใช้วิธีความควรจะเป็นสูงสุด