The pH value 2.0 was selected on th

The pH value 2.0 was selected on the ground of the observation that at a pH value lower than 2.0 MA-DAN derivative is formed more quickly but appeared unstable [12]. On the other hand a pH value higher than 2.0 produces a less stable diazepinium ion, which could be neutralized and hydrolysed [14]. The same effect was observed when the reaction was carried out at a temperature higher than 37 °C. In conclusion, pH 2.0 and 25% ACN were established as optimal conditions for a stable preparation of the MA-DAN derivative at 37 °C within 10 min of treatment. These conditions appear to be suitable to give a reliable value of the free MA content. In comparison, TBA test used for MA determination requires high temperature (at least 90 °C) and long reaction time (at least 30 min) at very low pH value. Treatment of MA with DNPH, although at lower temperature (37–50 °C), is carried out in a concentrated HCl solution.

3.2. Salting-out homogeneous liquid–liquid extraction (SHLLE)
In order to increase the sensitivity of the method, a special attention was addressed to the extraction of the analyte from the reaction mixture that contained 25% ACN. In this view, we experimented that the highly hydrophobic diazepinium ion formed from MA-DAN can be extracted into organic solvents such as diethyl ether or ethyl acetate, provided that an ion-pair is formed with a hydrophobic anion as heptafluorobutyrate. An improvement of the extraction was achieved, using the recently introduced technique, named salting-out homogeneous liquid–liquid extraction (SHLLE) [15] and [16]. Addition of magnesium sulphate to the solution increases its ionic strength and the aprotic ACN forms a distinct upper phase containing the MA-DAN product. Due to the ACN polar feature, the ion-pair of diazepinium ion MA-DAN product with chloride can be extracted, thus avoiding the addition of the hydrophobic heptafluorobutyrate anion.

3.3. Derivative structure and UV response of MA-DAN
The reaction between MA and DAN is expected to afford a 1,5-naphthodiazepinium ion [14], whose mesomeric amino-imino structures 1 (1H form) and 2 (5 H form) are shown in Fig. 2, together with the less probable di-imino structure 3. The UV spectrum of MA-DAN in the solvent mixture selected for the HPLC analysis showed a high absorption at 311 nm, due to the extensive resonance of the naphthodiazepinium ions 1 and 2, that is not possible in a structure like the di-imino cation 3. In order to confirm the attractive feature of high UV response, MA-DAN was compared with MA-DNP. UV spectra of equimolar solutions in their respective HPLC eluents were measured (Fig. 3). MA-DAN response resulted 1.7 higher than that of MA-DNP at their maximum absorption wavelenghts (311 nm and 310 nm respectively) and, therefore, MA-DAN can be considered a suitable derivative for MA measurements by HPLC determination with UV detection.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ค่าพีเอช 2.0 ถูกเลือกเราเก็บข้อมูลที่มีค่า pH ต่ำกว่า 2.0 อนุพันธ์ MA-แดนเกิดขึ้นรวดเร็วขึ้น แต่ปรากฏ ไม่เสถียร [12] ในทางกลับกัน ค่า pH สูงกว่า 2.0 สร้างน้อยไอออน diazepinium มั่นคง ซึ่งสามารถ neutralized hydrolysed [14] ผลเหมือนกับถูกตรวจสอบเมื่อทำปฏิกิริยาออกที่อุณหภูมิสูงกว่า 37 องศาเซลเซียส ในสรุป pH 2.0 และ 25% ACN ก่อเงื่อนไขที่เหมาะสมสำหรับการเตรียมการมีเสถียรภาพของอนุพันธ์ MA-ด่านที่ 37 ° C ภายใน 10 นาทีรักษา เงื่อนไขเหล่านี้ปรากฏขึ้นเพื่อ ให้เหมาะสมเพื่อให้ค่าความน่าเชื่อถือของเนื้อหา MA ฟรี ในการเปรียบเทียบ ทดสอบ TBA ที่ใช้สำหรับการกำหนด MA ต้องอุณหภูมิสูง (ที่ 90 ° C) และปฏิกิริยานาน (อย่างน้อย 30 นาที) ที่ค่า pH ต่ำมาก รักษาของ MA กับ DNPH แม้ที่อุณหภูมิต่ำ (37-50 ° C), จะดำเนินในโซลูชัน HCl เข้มข้น3.2. Salting ออกเหมือนของเหลว – ของเหลวสกัด (SHLLE)เพื่อเพิ่มความไวของวิธีการ ความสนใจพิเศษถูกส่งไปสกัดการ analyte จากส่วนผสมของปฏิกิริยาที่มีอยู่ 25% ACN ในมุมมองนี้ เราเบื้องว่า สามารถสกัดไอออน diazepinium hydrophobic สูงที่เกิดขึ้นจากด่าน MA เป็นอินทรีย์เช่นอีเทอร์ diethyl หรือเอทิล acetate ได้คู่ไอออนจะเกิดขึ้นกับ anion hydrophobic เป็น heptafluorobutyrate การปรับปรุงสกัดสำเร็จ ใช้เทคนิคล่าสุดนำ ชื่อสกัดของเหลว – ของเหลวเหมือนออกมารีซอลทิง (SHLLE) [15] และ [16] นอกจากนี้แมกนีเซียมซัลเฟตให้โซลูชันที่เพิ่มความแรงของ ionic และ aprotic ACN แบบฟอร์มขั้นตอนด้านบนแตกต่างประกอบด้วยสินค้า MA-ด่าน เนื่องจากคุณลักษณะขั้ว ACN คู่ไอออนของไอออน MA-ด่าน diazepinium กับคลอไรด์สามารถจะสกัด จึง หลีกเลี่ยงการเพิ่ม anion hydrophobic heptafluorobutyrate3.3 การพัฒนาโครงสร้างและตอบรับ UV ของ MA-แดนปฏิกิริยาระหว่างม้าและด่านคาดว่าจะจ่ายไอออน 1.5-naphthodiazepinium [14], ที่มี mesomeric อะมิโน imino โครงสร้าง 1 (แบบฟอร์ม 1H) และ 2 (แบบฟอร์ม 5 H) แสดงใน Fig. 2 ร่วมกับโครงสร้างดี imino น่าเป็นน้อยกว่า 3 คลื่น UV ของ MA-ด่านส่วนผสมตัวทำละลายที่เลือกสำหรับการวิเคราะห์ HPLC พบว่าการดูดซึมสูงที่ 311 nm เนื่องจากการสั่นพ้องกัน naphthodiazepinium 1 และ 2 มากมายที่เป็นไปไม่ได้ในโครงสร้างเช่น cation di imino 3 เพื่อยืนยันคุณลักษณะน่าสนใจของการตอบสนองสูง UV, MA-ด่านถูกเปรียบเทียบกับ MA DNP UV แรมสเป็คตราโซลูชั่น equimolar ใน eluents ของ HPLC นั้น ๆ ถูกวัด (Fig. 3) MA-ด่านตอบผล 1.7 สูงกว่าของ MA DNP ในการดูดซึมสูงสุด wavelenghts (311 nm และ 310 nm ตามลำดับ) และ จึง MA-ด่านถือได้ว่าอนุพันธ์เหมาะสำหรับวัด MA โดย HPLC กำหนดด้วย UV ตรวจจับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ค่าพีเอช 2.0 ได้รับเลือกบนพื้นดินของการสังเกตว่าที่ค่าพีเอชต่ำกว่า 2.0 อนุพันธ์ MA-DAN จะเกิดขึ้นได้อย่างรวดเร็ว แต่ปรากฏไม่แน่นอน [12] ในทางกลับกันค่าพีเอชสูงกว่า 2.0 ผลิตไอออน diazepinium มั่นคงน้อยลงซึ่งอาจจะเป็นกลางและย่อยได้ [14] ผลเช่นเดียวกันก็สังเกตเห็นปฏิกิริยาเมื่อได้ดำเนินการที่อุณหภูมิสูงกว่า 37 องศาเซลเซียส สรุปได้ว่าค่า pH 2.0 และ 25% ACN ถูกจัดตั้งขึ้นเป็นสภาวะที่เหมาะสมสำหรับการเตรียมความพร้อมที่มั่นคงของอนุพันธ์ MA-DAN ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสภายใน 10 นาทีของการรักษา เงื่อนไขเหล่านี้ดูเหมือนจะเป็นความเหมาะสมที่จะให้ค่าที่เชื่อถือได้ของเนื้อหา MA ฟรี ในการเปรียบเทียบการทดสอบ TBA ใช้สำหรับการวัด MA ต้องใช้อุณหภูมิสูง (ไม่น้อยกว่า 90 ° C) และเวลาการเกิดปฏิกิริยานาน (อย่างน้อย 30 นาที) ที่ค่าพีเอชต่ำมาก การรักษาด้วย MA DNPH แม้ในอุณหภูมิที่ต่ำกว่า (37-50 ° C), จะดำเนินการในการแก้ปัญหา HCl เข้มข้น. 3.2 เกลือออกสกัดของเหลวของเหลวเนื้อเดียวกัน (SHLLE) เพื่อที่จะเพิ่มความไวของวิธีการที่มีความสนใจเป็นพิเศษถูกส่งไปยังการสกัดสารจากส่วนผสมปฏิกิริยาที่มี 25% ACN ในมุมมองนี้เราทดลองว่าไอออน diazepinium ชอบน้ำสูงขึ้นมาจาก MA-DAN สามารถสกัดเป็นตัวทำละลายอินทรีย์เช่นอีเทอร์หรือเอทิลอะซิเตมีเงื่อนไขว่าไอออนคู่จะเกิดขึ้นกับแอนไอออนไม่ชอบน้ำเป็น heptafluorobutyrate การปรับปรุงการสกัดก็ประสบความสำเร็จโดยใช้เทคนิคการแนะนำเมื่อเร็ว ๆ นี้ชื่อเกลือออกสกัดของเหลวของเหลวเนื้อเดียวกัน (SHLLE) [15] และ [16] นอกเหนือจากแมกนีเซียมซัลเฟตเพื่อแก้ปัญหาอิออนเพิ่มความแข็งแรงและ aprotic ACN รูปแบบขั้นตอนบนที่แตกต่างที่มีสินค้า MA-DAN เนื่องจากคุณสมบัติขั้วโลก ACN, ไอออนคู่ของ diazepinium ไอออนสินค้า MA-DAN กับคลอไรด์สามารถสกัดจึงหลีกเลี่ยงการเพิ่มขึ้นของไอออน heptafluorobutyrate ชอบน้ำ. 3.3 โครงสร้างอนุพันธ์ทางการเงินและการตอบสนองต่อรังสียูวีของ MA-DAN ปฏิกิริยาระหว่าง MA และแดนที่คาดว่าจะจ่าย 1,5-naphthodiazepinium ไอออน [14] ซึ่งมีโครงสร้างอะมิโน imino mesomeric 1 (แบบ 1H) และ 2 (5 รูปแบบ H) จะแสดง ในรูป 2 พร้อมด้วยน่าจะเป็นน้อย di-imino โครงสร้าง 3. สเปกตรัมของรังสียูวี MA-DAN ในส่วนผสมตัวทำละลายที่เลือกไว้สำหรับการวิเคราะห์ HPLC พบการดูดซึมในระดับสูงที่ 311 นาโนเมตรเนื่องจากเสียงสะท้อนที่กว้างขวางของไอออน naphthodiazepinium ที่ 1 และ 2 ว่าเป็นไปไม่ได้ในโครงสร้างเช่นไอออนบวก di-imino 3. เพื่อที่จะยืนยันคุณลักษณะที่น่าสนใจของการตอบสนองรังสียูวีสูง, MA-DAN ถูกเมื่อเทียบกับ MA-DNP สเปกตรัมรังสียูวีของโซลูชั่น equimolar ในตัวชะ HPLC ของตนถูกวัด (รูปที่. 3) การตอบสนอง MA-DAN ผล 1.7 สูงกว่า MA-DNP ที่ดูดกลืนแสงสูงสุดของพวกเขาความยาวคลื่น (311 นาโนเมตรและ 310 นาโนเมตรตามลำดับ) และดังนั้น MA-DAN สามารถพิจารณาอนุพันธ์ที่เหมาะสมสำหรับการตรวจวัด MA มุ่งมั่น HPLC มีการตรวจสอบรังสียูวี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ค่า pH 2.0 ถูกเลือกบนพื้นฐานของการสังเกตที่ค่า pH ต่ำกว่า 2.0 ma-dan อนุพันธ์จะเกิดขึ้นอย่างรวดเร็ว แต่ปรากฏว่าเสถียร [ 12 ] บนมืออื่น ๆเป็นค่า pH สูงกว่า 2.0 สร้างไอออน diazepinium มั่นคงน้อยกว่า ซึ่งอาจจะทำให้พบ [ 14 ] เช่นเดียวกันพบว่าเมื่อปฏิกิริยาดำเนินการที่อุณหภูมิสูงกว่า 37 องศาสรุป ค่า pH 2.0 และ 25% ACN ได้จัดตั้งเป็นสภาวะที่เหมาะสมในการเตรียมอนุพันธ์ที่มั่นคงของ ma-dan 37 ° C ภายใน 10 นาทีของการรักษา เงื่อนไขเหล่านี้จะปรากฏให้เหมาะสม เพื่อให้คุณค่าของความน่าเชื่อถือของเนื้อหามาฟรี ในการเปรียบเทียบทดสอบการใช้รักษามาต้องใช้อุณหภูมิสูง ( อย่างน้อย 90 ° C ) และเวลาตอบสนองนานอย่างน้อย 30 นาที ) ที่ค่า pH ต่ำมาก การรักษามาด้วย dnph แม้ในอุณหภูมิ ( 37 – 50 ° C ) จะดําเนินการในกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น

2 . เกลือออกโดยการสกัดของเหลวเป็นเนื้อเดียวกัน ( shlle )
เพื่อเพิ่มความไวของวิธีความสนใจพิเศษ ถึง แยกของครูจากปฏิกิริยาผสมอยู่ร้อยละ 25 ต. . ในมุมมองนี้เราทดลองว่ามี ) diazepinium ไอออนที่เกิดขึ้นจาก ma-dan สามารถสกัดในตัวทำละลายอินทรีย์เช่นอีเทอร์หรือเอทิลอะซิเตทให้ไอออนคู่จะเกิดกับแอนไอออน ) เป็น heptafluorobutyrate .การปรับปรุงการสกัดพบว่า การใช้เทคนิคนี้ทำให้ชื่อเกลือออกเป็นเนื้อเดียวกันและการสกัดด้วยของเหลว ( shlle ) [ 15 ] [ 16 ] และแมกนีเซียมซัลเฟต เพื่อแก้ปัญหา เพิ่มความแรงไอออนและ aprotic ACN รูปแบบที่แตกต่างกันบนเฟสที่ประกอบด้วยผลิตภัณฑ์ ma-dan . เนื่องจากคุณลักษณะ ACN ขั้วโลก ,ไอออนไอออนผลิตภัณฑ์กับคู่ของ diazepinium ma-dan คลอไรด์สามารถสกัด , จึงหลีกเลี่ยงเพิ่มประจุลบ heptafluorobutyrate ) .

. . โครงสร้างอนุพันธ์และการตอบสนองของ ma-dan
ยูวีปฏิกิริยาระหว่างแม่และแดนที่คาดว่าจะจ่าย 1,5-naphthodiazepinium ไอออน [ 14 ] , ผู้ mesomeric อะมิโน imino โครงสร้าง 1 ( 1 รูป ) และ 2 ( 5 H ) แบบฟอร์มจะแสดงในรูปที่ 2พร้อมกับน่าจะน้อยกว่า ดิ imino โครงสร้าง 3 . สเปกตรัมรังสียูวีของ ma-dan ในตัวทำละลายผสมที่คัดสรรสำหรับการวิเคราะห์ HPLC พบการดูดซึมสูงที่ 311 นาโนเมตร เนื่องจากการเรโซแนนซ์ที่กว้างขวางของ naphthodiazepinium ไอออน 1 และ 2 ที่เป็นไปไม่ได้ในโครงสร้าง เช่น ดิ imino Cation 3 ในการยืนยันคุณลักษณะที่น่าสนใจของการตอบสนองต่อรังสี UV สูงma-dan เมื่อเทียบกับ ma-dnp . สเปกตรัมของโซลูชั่นยูวีๆในตัวชะ HPLC ของตนได้ ( รูปที่ 3 ) ผลการ ma-dan 1.7 สูงกว่า ma-dnp ในการดูดซึมสูงสุด wavelenghts ( 311 นาโนเมตรและ 310 nm ตามลำดับ ) และ ดังนั้น ma-dan ถือได้ว่าเป็นอนุพันธ์ เหมาะสำหรับมาวัดโดยวิธี HPLC กำหนดตรวจจับแสงยูวี