An immunoglobulin light chain prote

An immunoglobulin light chain protein was isolated from the urine of an individual (BRE) with systemic amyloidosis. Complete amino acid sequence of the variable region of the light chain (VL) protein established it as a kappa I, which when compared with other kappa I amyloid associated proteins had unique residues, including Ile-34, Leu-40, and Tyr-71. To study the tertiary structure, BRE VL was expressed in Escherichia coli by using a PCR product amplified from the patient BRE's bone marrow DNA. The PCR product was ligated into pCZ11, a thermal-inducible replication vector. Recombinant BRE VL was isolated, purified to homogeneity, and crystallized by using ammonium sulfate as the precipitant. Two crystal forms were obtained. In crystal form I the BRE VL kappa domain crystallizes as a dimer with unit cell constants isomorphous to previously published kappa protein structures. Comparison with a nonamyloid VL kappa domain from patient REI, identified significant differences in position of residues in the hypervariable segments plus variations in framework region (FR) segments 40-46 (FR2) and 66-67 (FR3). In addition, positional differences can be seen along the two types of local diads, corresponding to the monomer-monomer and dimer-dimer interfaces. From the packing diagram, a model for the amyloid light chain (AL) fibril is proposed based on a pseudohexagonal spiral structure with a rise of approximately the width of two dimers per 360 degree turn. This spiral structure could be consistent with the dimensions of amyloid fibrils as determined by electron microscopy.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โปรตีนไฟโซ่ immunoglobulin ถูกแยกจากปัสสาวะของแต่ละบุคคล (BRE) กับระบบ amyloidosis ลำดับกรดอะมิโนที่สมบูรณ์ของภูมิภาคแปรโปรตีนสายแสง (VL) ก่อตั้งเป็นกัปปะฉัน ซึ่งเมื่อเปรียบเทียบกับกัปปะอื่น ๆ ฉันเกี่ยวข้องแอมีลอยด์ โปรตีนได้ตกเฉพาะ เมา-34 ลัว-40 และ Tyr-71 การศึกษาโครงสร้างระดับตติยภูมิ VL คนได้จัดแสดงใน Escherichia coli โดยใช้ผลิตภัณฑ์ PCR ขยายจากไขกระดูกของผู้ป่วยคนดีเอ็นเอ ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกควบเข้า pCZ11 เวกเตอร์ความร้อน inducible จำลองแบบ VL คน recombinant แยกต่างหาก บริสุทธิ์ให้ homogeneity และตกผลึก โดยใช้แอมโมเนียมซัลเฟตเป็น precipitant สองรูปแบบคริสตัลได้รับ ในฟอร์มคริสตัล ผม VL คนแคปปาโด crystallizes เป็นผลิตของ dimer มีหน่วยเซลล์คง isomorphous ไปก่อนหน้านี้ประกาศโครงสร้างโปรตีนของกัปปะ เปรียบเทียบกับ nonamyloid VL แคปปาโดจากพระมหากษัตริย์ ผู้ป่วยระบุแตกต่างกันในตำแหน่งที่ตกค้างในส่วน hypervariable และรูปแบบ ในกรอบภูมิภาค (FR) ส่วน 40-46 (FR2) และ 66-67 (FR3) สามารถเห็นความแตกต่างของตำแหน่งตามสองชนิดภายใน diads ที่สอดคล้องกับอินเทอร์เฟซน้ำยาน้ำยาและผลิตของ dimer ผลิตของ dimer จากแผนภาพบันทึก แบบจำลองสำหรับ fibril โซ่ไฟแอมีลอยด์ (AL) มีเสนอตามเกลียว pseudohexagonal โครงสร้างกับการเพิ่มขึ้นของประมาณความกว้างของ dimers สองต่อเลี้ยว 360 องศา โครงสร้างการหมุนวนนี้จะสอดคล้องกับขนาดของแอมีลอยด์ fibrils ที่อิเล็กตรอน microscopy

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรตีนห่วงโซ่แสงอิมมูโนที่แยกได้จากปัสสาวะของแต่ละคน (BRE) กับ amyloidosis ระบบ สมบูรณ์ลำดับกรดอะมิโนของภูมิภาคตัวแปรของห่วงโซ่แสง (VL) โปรตีนที่จัดตั้งขึ้นเป็นคัปปาผมซึ่งเมื่อเปรียบเทียบกับคัปปาอื่น ๆ ที่ผมโปรตีนที่เกี่ยวข้อง amyloid มีสารตกค้างที่ไม่ซ้ำกันรวมทั้ง Ile-34, Leu-40 และเทอร์-71 . เพื่อศึกษาโครงสร้างตติย BRE VL ถูกแสดงในอีโคโดยใช้ผลิตภัณฑ์ PCR ขยายจากดีเอ็นเอของผู้ป่วยกระดูก BRE ของ ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกผูกเข้า pCZ11, การจำลองแบบความร้อน inducible เวกเตอร์ Recombinant BRE VL ถูกแยกบริสุทธิ์จะเป็นเนื้อเดียวกันและเป็นก้อนโดยใช้แอมโมเนียมซัลเฟตตกตะกอนเป็น สองรูปแบบผลึกที่ได้รับ รูปแบบผลึกฉันในโดเมน BRE VL คัปปาตกผลึกเป็น dimer ที่มีค่าคงที่หน่วยเซลล์ isomorphous การเผยแพร่ก่อนหน้านี้โครงสร้างโปรตีนแคปปา เปรียบเทียบกับโดเมน nonamyloid VL คัปปาจากผู้ป่วย REI ระบุความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในตำแหน่งของสารตกค้างในส่วน hypervariable บวกการเปลี่ยนแปลงในภูมิภาคกรอบ (FR) กลุ่ม 40-46 (FR2) และ 66-67 (FR3) นอกจากนี้ความแตกต่างของตำแหน่งที่สามารถมองเห็นพร้อมทั้งสองประเภทของ diads ท้องถิ่นที่สอดคล้องกับโมโนเมอร์-โมโนเมอร์และอินเตอร์เฟซ dimer-dimer จากแผนภาพบรรจุแบบจำลองสำหรับห่วงโซ่แสง amyloid นี้ (AL) หนังศีรษะมีการเสนอขึ้นอยู่กับโครงสร้างเกลียว pseudohexagonal กับการเพิ่มขึ้นของประมาณความกว้างของสอง dimers ต่อ 360 องศาเปิด โครงสร้างเกลียวนี้อาจจะสอดคล้องกับขนาดของ amyloid ซ่านตามที่กำหนดโดยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ห่วงโซ่แสงอิมมูโนโกลบูลินโปรตีนที่แยกจากปัสสาวะของแต่ละบุคคล ( BRE ) กับระบบจัดอันดับ . ลำดับกรดอมิโนของตัวแปรเขตของโซ่แสง ( VL ) โปรตีนที่ก่อตั้งเป็นคัปผม ซึ่งเมื่อเทียบกับอื่น ๆที่เกี่ยวข้องโปรตีนแอมีลอยด์กัปปะมีสารตกค้างที่เป็นเอกลักษณ์ ได้แก่ ile-34 leu-40 , และ tyr-71 . การศึกษาโครงสร้างระดับตติยภูมิBRE VL แสดงออกในแบคทีเรีย Escherichia coli โดยใช้ดีเอ็นเอผลิตภัณฑ์ขยายจากคนไข้ เบร DNA ของไขกระดูก . ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกผูกเป็น pcz11 , เวกเตอร์ inducible แบบความร้อน รีคอมบิแนนท์ BRE VL ถูกแยกบริสุทธิ์ ที่จะรวมตัวกัน และตกผลึกโดยใช้แอมโมเนียม ซัลเฟตเป็นสารตกตะกอน . คริสตัลรูปแบบทั้งสองได้รับในรูปคริสตัลผม BRE VL Kappa โดเมนตกผลึกเป็นไดเมอร์มีเซลล์หน่วยค่าคงที่ isomorphous เพื่อเผยแพร่ก่อนหน้านี้ คัปป้า โครงสร้างของโปรตีน การเปรียบเทียบกับ nonamyloid VL Kappa โดเมนจากเรย์คนไข้ระบุความแตกต่างในตำแหน่งของที่ตกค้างในส่วนต่าง ๆในกรอบบวกออกภูมิภาค ( FR ) ส่วน 40-46 ( fr2 ) และ 66-67 ( fr3 ) นอกจากนี้ความแตกต่างของตำแหน่งที่สามารถเห็นได้ตามสองประเภทของ diads ท้องถิ่นที่สอดคล้องกับมอนอเมอร์เมอร์เมอร์และ interfaces . จากการบรรจุ แผนภาพรูปแบบโซ่แสงแอมีลอยด์ ( AL ) ไฟบริลเสนอตามโครงสร้างเกลียว pseudohexagonal ที่มีเพิ่มขึ้นประมาณความกว้างของ 2 สาย ต่อ 360 องศาหมุนโครงสร้างวงจรนี้สามารถให้สอดคล้องกับขนาดของแอมีลอยด์ไฟบริลตามที่กำหนดด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน