Cells were grown on solid medium co

Cells were grown on solid medium containing Mandel's mineral
salts solution with 0.2% cellulosic material as a substrate and 0.1%
Triton X-100 as a colony restrictor. Cellulase activity was measured
using Gram's iodine solution and measurement of the clearing zone
ratio (clearing zone diameter/colony diameter) [15].
Cellulase activities were also measured for cells grown in culture
broth and endoglucanase (CMCase) activity was determined using
carboxymethyl cellulose sodium salt (CMC) as a substrate [16]. In
these experiments, 0.1 mL of 2.0% (w/v) CMC solution was incubated
with 0.1 ml of enzyme solution, diluted with 0.05 M sodium
citrate buffer (pH 4.8) at 50
C for 30 min. Then, 0.2 mL of 3,5-
dinitrosalicylic acid (DNS) reagent was added and the solution
was boiled at 100
C for 5 min. Finally, 0.6 ml of distilled water was
added and the absorbance was measured at 540 nm. One unit of
enzyme activity was defined as the amount of enzyme that produced
1 mmol of reducing sugar per min under the conditions of the
assay.
Exoglucanase activity in international units (IU) was assayed by
a DNS method. In particular, 40 mL of enzyme solutionwas added to
test tubes, and 160 mL of 1.25% avicel (cellulose substrate) was
diluted with 0.1 M acetate buffer (pH 4.8). The mixture was incubated
at 50
C for 2 h, and 0.2 mL of 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS)
reagent was added to stop the reaction. The tubes were transferred
to boiling water at 100
C for 5 min, 0.6 mL of distilled water was
added, the contents of the tubes were mixed to yield a red color,
and absorbance was measured at 540 nm. One unit of activity was
defined as the amount of enzyme required to release 1 mmol
glucose per min under the conditions of the assay.
b-glucosidase activity was assayed in a reaction mixture consisting
of 25 mL of enzyme solution, 25 mL of 10mMp-nitrophenylb-
D-glucopyranoside (pNPG) in 0.05 M sodium citrate buffer (pH
4.8) at 50
C for 10 min. After the incubation, 0.1 mL of a 0.4 M
Na2CO3 solution was added. After the color developed (indicating
release of p-nitrophenol), absorbance was measured at 405 nm. For
all these dosages, one unit of activity is the amount of enzyme
required to release 1 mmol p-nitrophenol per min under the conditions
of the assay. Total protein was measured by the Bradford
method using bovine serum albumin (BSA) as a standard.
Filter paper cellulase (FPase) activity was assayed by incubating
the 125 mL of enzyme solution with 250 mL of sodium citrate buffer
(50 mM, pH 4.8) with filter paper (Whatman no. 1, 0.25 mm pore
size, 1.5 cm diameter]). The mixture was incubated at 50
C for
60 min. Then, 200 mL of enzyme solution (supernatant) was added
to 200 mL of DNA reagent and boiled at 100
C for 5 min. Reducing
sugar was determined by the dinitrosalicylic acid (DNS) method
[16]. One international unit of FPase activity is the amount of
enzyme that forms 1 mmol of glucose (reducing sugars as glucose)
per minute during the hydrolysis reaction. All presented data are
average of three independent experiments.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์เติบโตบนแข็งปานกลางประกอบด้วยแร่ของ Mandelโซลูชันเกลือ ด้วยวัสดุ cellulosic 0.2% เป็นพื้นผิวและ 0.1%ไตรตั้น X-100 เป็น restrictor อาณานิคม มีวัดกิจกรรม cellulaseกรัมของไอโอดีนโซลูชันและวัดในเขตหักบัญชีอัตราส่วน (ล้างขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง/โคโลโซน) [15]Cellulase กิจกรรมมีวัดสำหรับเซลล์ที่เติบโตในวัฒนธรรมซุปและ endoglucanase (CMCase) กำหนดกิจกรรมโดยใช้carboxymethyl เซลลูโลสโซเดียมเกลือ (CMC) เป็นพื้นผิว [16] ในทดลองเหล่านี้ 0.1 mL ของ CMC 2.0% (w/v) ที่ incubatedด้วย 0.1 ml ของเอนไซม์ ผสมกับโซเดียม 0.05 Mซิเตรตบัฟเฟอร์ (pH 4.8) ที่ 50 C สำหรับ 30 นาที แล้ว 0.2 mL 3,5-รีเอเจนต์ dinitrosalicylic กรด (DNS) มีเพิ่ม และการแก้ไขถูกต้มที่ 100 C สำหรับ 5 นาที สุดท้าย 0.6 ml ของน้ำกลั่นได้เพิ่ม และมีที่วัด absorbance ที่ 540 nm หนึ่งหน่วยเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นจำนวนของเอนไซม์ที่ผลิตได้1 mmol ลดน้ำตาลต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขของการวิเคราะห์Exoglucanase กิจกรรมในหน่วยสากล (IU) ถูก assayed โดยวิธีการ DNS โดยเฉพาะอย่างยิ่ง 40 mL ของเอนไซม์ solutionwas เพิ่มเข้าไปหลอดทดสอบ และ 160 mL ของ avicel 1.25% (พื้นผิวเซลลูโลส)ผสมกับ 0.1 M acetate บัฟเฟอร์ (pH 4.8) ส่วนผสมคือ incubatedที่ 50 C 2 h และ 0.2 มิลลิลิตรของกรด 3,5-dinitrosalicylic (DNS)รีเอเจนต์ถูกเพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยา หลอดถูกโอนย้ายการต้มน้ำที่ 100 C สำหรับ 5 นาที 0.6 mL ของน้ำกลั่นได้เพิ่ม เนื้อหาของท่อถูกผสมให้สีแดงและมีวัด absorbance ที่ 540 nm เป็นหน่วยหนึ่งของกิจกรรมกำหนดเป็นจำนวนของเอนไซม์ที่จำเป็นต้องปล่อย 1 mmolกลูโคสต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขของการทดสอบกิจกรรม b-glucosidase ที่ assayed ในประกอบด้วยส่วนผสมของปฏิกิริยาของ 25 mL ของเอนไซม์ 25 mL ของ 10mMp-nitrophenylb -D-glucopyranoside (pNPG) ใน 0.05 M โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ (pH4.8) ที่ 50 C สำหรับ 10 นาที หลังจากบ่ม เมตร 0.4 0.1 มล.มีเพิ่มโซลูชัน Na2CO3 หลังจากสีพัฒนา (ระบุรุ่น p-nitrophenol), มีวัด absorbance ที่ 405 nm สำหรับdosages เหล่านี้ทั้งหมด กิจกรรมหนึ่งหน่วยเป็นปริมาณของเอนไซม์ต้องปล่อย 1 mmol p-nitrophenol ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขของการวิเคราะห์ โปรตีนรวมที่วัด โดยแบรดฟอร์ดวิธีใช้วัว serum albumin (บีเอสเอ) เป็นมาตรฐานกระดาษกรอง cellulase (FPase) กิจกรรมถูก assayed โดย incubatingmL 125 ของเอนไซม์กับ 250 mL ของโซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์(50 มม. pH 4.8) กับกระดาษกรอง (Whatman no. 1, 0.25 มม.รูขุมขนขนาด เส้นผ่าศูนย์กลาง 1.5 เซนติเมตร]) ส่วนผสมคือ incubated ที่ C 50 สำหรับ60 นาที , 200 mL ของเอนไซม์ (supernatant) ถูกเพิ่มถึง 200 mL ของดีเอ็นเอรีเอเจนต์ และเดือดที่ 100 C สำหรับ 5 นาทีลดลงน้ำตาลถูกกำหนด โดยวิธี dinitrosalicylic กรด (DNS)[16] หนึ่งหน่วยสากลกิจกรรม FPase คือ จำนวนเอนไซม์ที่ 1 mmol น้ำตาลกลูโคส (ลดน้ำตาลเป็นน้ำตาลกลูโคส)ต่อนาทีระหว่างปฏิกิริยาไฮโตรไลซ์ นำเสนอข้อมูลทั้งหมดค่าเฉลี่ยของการทดลองอิสระ 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ที่ถูกปลูกในสื่อที่เป็นของแข็งที่มีแร่ Mandel
วิธีการแก้ปัญหาที่มีเกลือ 0.2% วัสดุเซลลูโลสเป็นสารตั้งต้นและ 0.1%
Triton X-100 เป็นจิ๊อาณานิคม กิจกรรมเซลลูเลสได้รับการวัด
โดยใช้วิธีการแก้ปัญหาสารไอโอดีนของแกรมและการวัดของเขตสำนักหักบัญชี
อัตราส่วน (ล้างเส้นผ่าศูนย์กลางโซน / เส้นผ่าศูนย์กลางอาณานิคม) [15].
กิจกรรมเซลลูเลสถูกวัดยังเซลล์ที่ปลูกในวัฒนธรรมของ
น้ำซุปและ endoglucanase (CMCase) กิจกรรมที่ถูกกำหนดโดยใช้
โซเดียม Carboxymethyl cellulose, เกลือ (CMC) เป็นสารตั้งต้น [16] ใน
การทดลองเหล่านี้ 0.1 มิลลิลิตร 2.0% (w / v) การแก้ปัญหา CMC ถูกบ่ม
0.1 มิลลิลิตรของสารละลายเอนไซม์เจือจางด้วย 0.05 M โซเดียม
ซิเตรทบัฟเฟอร์ (pH 4.8) ที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที จากนั้น 0.2 มิลลิลิตร 3,5-
กรด dinitrosalicylic (DNS) น้ำยาจะถูกเพิ่มและการแก้ปัญหา
ที่ถูกต้มที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที สุดท้าย 0.6 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นได้รับการ
เพิ่มและการดูดกลืนแสงวัดที่ 540 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของ
เอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ผลิต
1 มิลลิโมลของการลดน้ำตาลต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขของ
การทดสอบ.
กิจกรรม Exoglucanase ในหน่วยสากล (IU) ได้รับการวิเคราะห์โดย
วิธี DNS โดยเฉพาะอย่างยิ่ง 40 มลของเอนไซม์ solutionwas เพิ่มลงใน
หลอดทดสอบและ 160 มล 1.25% Avicel (สารตั้งต้นเซลลูโลส) ถูก
เจือจางด้วย 0.1 M บัฟเฟอร์อะซิเตท (pH 4.8) ส่วนผสมที่ถูกบ่ม
ที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงและ 0.2 มิลลิลิตรของกรด 3,5-dinitrosalicylic (DNS)
น้ำยาจะถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อหยุดปฏิกิริยา หลอดถูกย้าย
ไปในน้ำเดือดที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที, 0.6 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นที่ถูก
เพิ่มเนื้อหาของหลอดถูกผสมเพื่อให้สีแดง
และดูดกลืนแสงวัดที่ 540 นาโนเมตร หน่วยหนึ่งของกิจกรรมที่ได้รับการ
กำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการปล่อย mmol 1
กลูโคสต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขของการทดสอบ.
กิจกรรม B-glucosidase ได้รับการวิเคราะห์ในการผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย
25 มิลลิลิตรของสารละลายเอนไซม์ 25 มิลลิลิตร 10mMp-nitrophenylb -
D-glucopyranoside (pNPG) ใน 0.05 M โซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์ (pH
4.8) ที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที? หลังจากการบ่ม 0.1 มิลลิลิตร 0.4 M
แก้ปัญหา Na2CO3 ถูกเพิ่มเข้ามา หลังจากที่ได้รับการพัฒนาสี (ระบุ
การเปิดตัวของ P-nitrophenol) การดูดกลืนแสงวัดที่ 405 นาโนเมตร สำหรับ
ปริมาณทั้งหมดเหล่านี้หน่วยหนึ่งของกิจกรรมคือปริมาณของเอนไซม์
ที่จำเป็นในการปล่อย 1 มิลลิโมล P-nitrophenol ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไข
ของการทดสอบ โปรตีนทั้งหมดโดยวัดจากแบรดฟอ
วิธีการใช้ซีรั่มอัลบูมิวัว (BSA) เป็นมาตรฐาน.
กรองกระดาษเซลลูเลส (FPase) กิจกรรมได้รับการวิเคราะห์โดยการบ่ม
125 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ที่มี 250 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์โซเดียมซิเตรท
(50 มิลลิเมตรค่า pH 4.8) ด้วยกระดาษกรอง (Whatman no. 1, 0.25 มมรูขุมขน
ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 1.5 ซม]) ส่วนผสมที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียสสำหรับ
60 นาที จากนั้น 200 มิลลิลิตรของสารละลายเอนไซม์ (ใส) ถูกเพิ่มเข้ามา
ถึง 200 มลสาร DNA และต้มที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ลด
น้ำตาลถูกกำหนดโดยกรด dinitrosalicylic (DNS) วิธีการ
[16] หนึ่งหน่วยระหว่างประเทศของกิจกรรม FPase คือปริมาณของ
เอนไซม์ที่รูปแบบที่ 1 มิลลิโมลของกลูโคส (น้ำตาลรีดิวซ์เป็นกลูโคส)
ต่อนาทีในระหว่างการเกิดปฏิกิริยาไฮโดรไลซิ ข้อมูลที่นำเสนอทั้งหมดที่มี
ค่าเฉลี่ยของการทดลองสามอิสระ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์เติบโตบนอาหารแข็งที่มี Mandel เป็นโซลูชั่นที่มีเกลือแร่
0.2% เซลลูโลสวัสดุพื้นผิวและ 0.1 %
Triton X-100 เป็นอาณานิคมจิ๊ก . กิจกรรมเอนไซม์ได้การใช้สารละลายไอโอดีน
กรัมและการวัดของเคลียร์โซน
อัตราส่วน ( ล้างโซนขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางโคโลนี ) [ 15 ] .
กิจกรรมเซลยังวัดเซลล์เพาะ
ซุปและ endoglucanase ( CMCase ) กิจกรรมที่ใช้วิเคราะห์
เกลือโซเดียมคาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส ( CMC ) เป็นสับสเตรท [ 16 ] ใน
การทดลองเหล่านี้ , 0.1 มล. 2.0 % ( w / v ) สารละลาย CMC บ่ม
กับ 0.1 มิลลิลิตรเอนไซม์สารละลายเจือจางด้วย 0.05 M โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 4.8
) ที่ 50
C เป็นเวลา 30 นาที จากนั้น 0.2 มิลลิลิตร จำนวน -
dinitrosalicylic acid ( DNS ) สารเคมีที่ถูกเพิ่มเข้ามาและ โซลูชั่น
เป็นต้มที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ในที่สุด
0.6 มล. น้ำกลั่น
เพิ่มและค่าวัด 540 นาโนเมตร หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเอนไซม์
หมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่ผลิต
1 มิลลิโมลต่อนาทีของการลดน้ำตาล ภายใต้เงื่อนไขของ

( . . . exoglucanase กิจกรรมในหน่วยสากล ( IU ) ถูก assayed โดย
วิธี DNS โดยเฉพาะ 40 มิลลิลิตรเอนไซม์ solutionwas เพิ่ม

หลอดทดสอบและ 160 มล. 1.25% ขนาดยา ( แผ่นเซลลูโลส ) คือ
เจือจางด้วย 0.1 โมลาร์เตตบัฟเฟอร์ pH 4.8 ) ส่วนผสมจะถูกบ่ม
ที่ 50
C 2 H , และ 0.2 มิลลิลิตรของกรด 3,5-dinitrosalicylic ( DNS )
3 เพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยา ท่อที่ถูกย้ายไปที่

น้ำเดือด 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที 0.6 มล. น้ำกลั่น
เพิ่มเนื้อหาของหลอดถูกผสมจะผลผลิตสีแดง
และค่าวัด 540 นาโนเมตร หน่วยหนึ่งของกิจกรรมที่ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์

ต้องปล่อย 1 มิลลิโมลกลูโคสต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขของการทดสอบ
กิจกรรม b-glucosidase ซีรั่มในปฏิกิริยาผสมประกอบด้วย
25 มิลลิลิตรของสารละลายเอนไซม์ที่ 25 มิลลิลิตร 10mmp nitrophenylb -
D-glucopyranoside ( pnpg ) ใน 0.05 M โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ ( PH
4.8 ) ที่ 50
C นาน 10 นาทีหลังจากระยะเวลา 0.1 มิลลิลิตรของสารละลาย Na2CO3 0.4 M
เพิ่ม หลังจากสีพัฒนา ระบุ
ปล่อย p-nitrophenol ) , ค่าวัดที่ 405 nm . สำหรับ
โดเหล่านี้หน่วยหนึ่งของกิจกรรมคือปริมาณของเอนไซม์
ต้องปล่อย 1 มิลลิโมลต่อนาที
p-nitrophenol ภายใต้เงื่อนไขของการทดสอบ โปรตีนทั้งหมด ถูกวัดโดย Bradford
โดยใช้อัลบูมิน ( BSA ) เป็นมาตรฐาน .
กระดาษกรองเซลลูโลส ( fpase ) กิจกรรมถูก assayed โดยการแช่
125 มิลลิลิตรของสารละลายเอนไซม์ที่มีโซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์
250 มิลลิลิตร ( 50 มม. , pH 4.8 ) กับกรองกระดาษ ( whatman 1 , 0.25 มม. รูพรุน
ขนาด 1.5 ซม. ] ) ส่วนผสมจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที

แล้ว 200 มิลลิลิตรของสารละลายเอนไซม์ ( น่าน ) คือเพิ่ม
200 มิลลิลิตร สารละลายดีเอ็นเอและต้มที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ลด

น้ำตาลถูกกำหนดจากกรด dinitrosalicylic ( DNS )
[ 16 ] หนึ่งหน่วยสากลของกิจกรรม fpase คือปริมาณของเอนไซม์ที่รูปแบบ
1 มิลลิโมลกลูโคส ( ลดน้ำตาลเป็นกลูโคส )
ต่อนาทีในระหว่างการเกิดปฏิกิริยา ทั้งหมดที่นำเสนอข้อมูล
เฉลี่ยสามการทดลองที่เป็นอิสระ