2. Materials and methods2.1. Raw ma

2. Materials and methods
2.1. Raw material and chemicals
Mango peels of golden dragon variety were collected by manually peeling off fresh undamaged ripe fruits purchased from a local fruit market in Penang, Malaysia. The underlying pulp on the peels was removed by gently scraping with the blunt edge of a clean knife and the peels were washed with distilled water to remove adhering dust. Crystallized phenol (C6H6O, 99%) was obtained from Panreac Sintesis, while 4-phenylphenol (C6H5C6H4OH, 97%) was obtained from Aldrich Chemical Co. (USA). Trichloroacetic acid (CCl3COOH) and copper (II) sulfate (CuSO4. 5H2O, 98.5–100%) were purchased from Bendosen and R&M Chemicals respectively. All other chemicals and solvents were of analytical grade and obtained from QRëC.
2.2. Preparation and fermentation of mango peel
The washed mango peels were cut into small pieces and blended with ultra pure water in the ratio (1:1) (w/v) using an electrical food processor (Kenwood) at 25 °C for 5 min. The humidity of the washed mango peels to the air dried mango peels before staring the fermentation process was calculated to be 11–13%. While, the humidity of mango peels after mixing with water to be in the fermentation suspension form was found to be 91.40%. The pH of the blended peel was adjusted using 1 M of NaOH or HCl and thereafter, 30 mL was dispensed into conical flasks of 100 mL capacity. The flasks were closed tightly with rubber caps to achieve and maintain microaerophilic fermentation conditions. The spontaneous anaerobic submerged fermentation process was carried out by a consortium of indigenous microorganisms at different temperatures for several days under static incubation conditions. Sterile controls were set up using same conditions after autoclaving flasks containing the blended peel at 121 °C at 15 psi for 15 min. Lactic acid extraction was carried out at the end of incubation. The extraction of lactic acid formed was carried out by diluting 5 mL of withdrawn fermented mango peel (1:5. v/v) with ultra pure water. The diluted paste was shaken vigorously for 5 min. Thereafter, 3 mL of diluted sample was added into a borosilicate screw-capped tube (16 × 150 mm) which already contains 3 mL of 10% trichloroacetic acid in order to stop the fermentation process. This final solution was kept in a fridge at 4 °C for 2 days to obtain a clear solution and to allow for the sedimentation of suspended solids at the bottom of the tube. Subsequently, 0.5 mL of the clear solution was added into 4.5 mL of ultra pure water and stored at 4 °C until used for the estimation of lactic acid level.
2.3. Determination of lactic acid
Lactic acid content of the fermented peel was determined using the colorimetric method according to the method described by Taylor (1996). An aliquot (0.5 mL) of the final clear solution obtained from subsection 2.2 above was placed in a screw-capped tube of 16 × 150 mm borosilicate tubes. Thereafter, 3 mL of concentrated H2SO4 was added and the tubes were heated to boiling for 10 min. On cooling, 50 μL of CuSO4 reagent in addition to 100 μL of para-phenyl phenol (1.5% para-phenyl phenol dissolved in 95% ethanol) were added. The tubes were then incubated at 30 °C for 30 min until all traces of precipitate were dissolved. Finally, the absorbance reading of the resulting solution was taken at the wavelength of 570 nm.
2.4. Experimental design and statistical analysis
Factorial design was employed to study the effect of three factors (independent variables): initial medium pH (X1), process temperature (X2), and incubation time (X1) on lactic acid production being the response. The levels of selected factors were chosen based on preliminary experiments and the levels used include: initial medium pH, 4 and 10; process temperature, 15 and 35 °C, and incubation time, 3 and 6 days. Factorial design of type 23 with five center points was used to study the effect of selected factors within a specified range ( Table 1). All experiments were run in random order to minimize the effect of unexpected variability in the observed responses ( Montgomery, 2001). The data were analyzed using the analysis of variance (ANOVA) to study the effect of selected factors and their potential interaction effects on lactic acid production. A first-order polynomial with interaction terms was used to fit the data. The regression polynomial model (2FI) is given in the following equation:
equation(1)
View the MathML source
Turn MathJax on

where Y is the response, β0 is the intercept of the model, βi is the linear coefficient in the regression model, βij is the interaction coefficient between different factors, and ε represents the error term. Design Expert software version 6.0.10 was used.
Table 1.
The results of factorial design experiments for lactic acid production including the observed and predicted values.
pH Temperature (°C) Observed
Predicted
Time (day) Lactic acid (g/l) Lactic acid (g/l)
4 15 3 2.967 2.967
10 15 3 2.082 2.082
4 35 3 2.175 2.175
10 35 3 9.3 9.3
4 15 6 2.442 2.442
10 15 6 2.517 2.517
4 35 6 3.75 3.75
10 35 6 17.484 17.484
7 25 4.5 5.268 4.9506
7 25 4.5 5.001 4.9506
7 25 4.5 4.626 4.9

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. วัตถุดิบและสารเคมีPeels มะม่วงหลากหลายมังกรทองถูกรวบรวม โดยปอกเปลือกเองออกไม่เสียหายสุกผลไม้ซื้อจากตลาดผลไม้ไทยในปีนัง มาเลเซีย เนื้อเยื่อต้นแบบบน peels ถูกเอาออก โดย scraping เบา ๆ กับขอบด้านทื่อของมีดสะอาด และ peels ถูกล้าง ด้วยน้ำกลั่นเอาฝุ่นมาตรฐาน วางตกผลึก (C6H6O, 99%) ได้รับจาก Panreac Sintesis ขณะ 4-phenylphenol (C6H5C6H4OH, 97%) ได้รับจาก Aldrich เคมีจำกัด (สหรัฐอเมริกา) Trichloroacetic กรด (CCl3COOH) และทองแดง (II) ซัลเฟต (CuSO4. 5H2O, 98.5 – 100%) ซื้อ จาก Bendosen และ R M เคมีตามลำดับ สารเคมีและหรือสารทำละลายอื่น ๆ ทั้งหมดได้เกรดวิเคราะห์ และได้รับจาก QRëC2.2 การเตรียมและการหมักของเปลือกมะม่วงPeels มะม่วงหินถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ และผสมกับน้ำบริสุทธิ์ในอัตราส่วน (1:1) (w/v) ใช้ในการประกอบอาหารไฟฟ้า (เคนวูด) ที่ 25 ° C สำหรับ 5 นาที ความชื้นของ peels มะม่วงหินอากาศแห้งมะม่วง peels ก่อนจ้องมองการหมักถูกคำนวณได้เท่ากับ 11 – 13% ในขณะที่ ความชื้นของมะม่วงมักหลุดลอกหลังจาก ผสมกับน้ำให้อยู่ในรูปแขวนหมักพบจะ 91.40% PH ของเปลือกผสมถูกปรับปรุงโดยใช้ 1 M NaOH หรือ HCl และหลัง 30 mL มีคำเป็นทรงกรวยน้ำความจุ 100 มล. น้ำถูกปิดแน่น ด้วยยางหมวกเพื่อให้บรรลุ และรักษาเงื่อนไขการหมัก microaerophilic กระบวนการหมักน้ำท่วมไม่ใช้อยู่ถูกดำเนินการ โดยกิจการร่วมค้าของจุลินทรีย์พื้นที่อุณหภูมิแตกต่างกันหลายวันภายใต้เงื่อนไขที่คณะทันตแพทยศาสตร์คง ควบคุมกระบอกถูกตั้งค่าโดยใช้เงื่อนไขเดียวกันหลังจาก autoclaving น้ำที่ประกอบด้วยเปลือกผสมที่ 121 ° C ที่ 15 psi สำหรับ 15 นาทีกรดสกัดถูกดำเนินการที่สิ้นสุดของคณะทันตแพทยศาสตร์ การสกัดกรดแลกติกที่เกิดขึ้นถูกดำเนิน โดย diluting 5 mL ของเปลือกมะม่วงถอนร้า (v 1:5. v) กับน้ำบริสุทธิ์ วางแตกออกถูกเขย่าโยคะสำหรับ 5 นาที หลัง 3 มล.ของตัวอย่างแตกออกถูกเพิ่มเข้าไปใน borosilicate ปรบมือสกรูหลอด (16 × 150 มิลลิเมตร) ซึ่งประกอบด้วย 3 mL ของกรด trichloroacetic 10% เพื่อหยุดการหมักอยู่แล้ว วิธีนี้สุดท้ายถูกเก็บไว้ในตู้เย็นที่ 4 ° C 2 วันได้รับการแก้ไขปัญหาที่ชัดเจน และ เพื่อให้การตกตะกอนของของแข็งที่เลื่อนออกไปที่ด้านล่างของหลอด ต่อมา 0.5 mL ของการแก้ปัญหาชัดเจนถูกเพิ่มเป็น 4.5 mL ของน้ำบริสุทธิ์ และเก็บที่ 4 ° C จนกว่าจะใช้สำหรับการประเมินของระดับกรดแลกติก2.3 การกำหนดของกรดกรดแลคติเนื้อหาของเปลือกหมักถูกกำหนดโดยใช้วิธีเทียบเคียงตามวิธีการอธิบายไว้ โดยเทย์เลอร์ (1996) เป็นส่วนลงตัว (0.5 มล.) ของโซลูชันชัดเจนสุดท้ายที่ได้รับจาก subsection 2.2 ข้างต้นถูกวางใน 16 × 150 มม. borosilicate หลอดหลอดปรบมือสกรู หลังจากนั้น เพิ่ม 3 mL ของกำมะถันที่เข้มข้น และหลอดถูกอุ่นให้เดือดใน 10 นาที ในการทำความเย็น มีเพิ่ม μL 50 ของรีเอเจนต์ CuSO4 นอก μL 100 ของพารา phenyl วาง (1.5% พารา phenyl วางละลายในเอทานอล 95%) หลอดได้แล้ว incubated ที่ 30 ° C สำหรับ 30 นาทีจนกระทั่งร่องรอยทั้งหมดของ precipitate ได้ส่วนยุบ สุดท้าย อ่าน absorbance ของโซลูชันได้ถูกนำมาที่ความยาวคลื่นของ 570 nm2.4 การทดลองออกแบบและวิเคราะห์ทางสถิติมีจ้างออกแบบแฟกเพื่อศึกษาผลของ 3 ปัจจัย (ตัวแปรอิสระ): ค่า pH เริ่มต้นปานกลาง (X 1) กระบวนการอุณหภูมิ (X2) และบ่มเวลา (X 1) ในการผลิตกรดแลคติเป็นการตอบสนอง ระดับของตัวเลือกที่ถูกเลือกตามการทดลองเบื้องต้น และรวมถึงระดับที่ใช้: ต้นปานกลาง pH, 4 และ 10 กระบวนการอุณหภูมิ 15 และ 35 ° C และบ่มเวลา วันที่ 3 และ 6 ออกแบบแฟกชนิด 23 จุดศูนย์ห้าถูกใช้เพื่อศึกษาผลของปัจจัยที่เลือกภายในช่วงที่ระบุ (ตาราง 1) ทดลองทั้งหมดถูกเรียกใช้ในแบบสุ่มเพื่อลดผลของความแปรผันที่ไม่คาดคิดในการตอบสนองที่สังเกต (มอนท์โก 2001) ข้อมูลได้วิเคราะห์โดยใช้ค่าความแปรปรวนของการวิเคราะห์ (วิเคราะห์ความแปรปรวน) เพื่อศึกษาผลของการเลือกปัจจัยและผลโต้ตอบอาจผลิตกรดแลคติ พหุนามลำดับแรก มีคำโต้ตอบถูกใช้ให้พอดีกับข้อมูล แบบจำลองการถดถอยพหุนาม (2FI) แสดงไว้ในสมการต่อไปนี้:equation(1)ดูต้น MathMLเปิด MathJaxที่ Y คือ การตอบสนอง β0 คือ จุดตัดแกนของรูปแบบ βi เป็นสัมประสิทธิ์เส้นในแบบจำลองถดถอย βij เป็นสัมประสิทธิ์การโต้ตอบระหว่างปัจจัยต่าง ๆ และεแสดงถึงเงื่อนไขข้อผิดพลาด ใช้ผู้เชี่ยวชาญการออกแบบซอฟต์แวร์รุ่น 6.0.10ตารางที่ 1ผลของแฟกทอเรียลออกแบบการทดลองการผลิตกรดรวมทั้งค่าสังเกต และคาดการณ์pH อุณหภูมิ (° C) สังเกตคาดการณ์ไว้เวลา (วัน) กรด (g/l) กรด (g/l)4 15 3 2.967 2.96710 15 3 2.082 2.0824 35 3 2.175 2.17510 35 3 9.3 9.34 15 6 2.442 2.44210 15 6 2.517 2.5174 35 6 3.75 3.7510 35 6 17.484 17.4847 25 4.5 5.268 4.95067 25 4.5 5.001 4.95067 25 4.5 4.626 4.9

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัตถุดิบและสารเคมี
เปลือกมะม่วงพันธุ์มังกรทองถูกเก็บรวบรวมโดยปอกเปลือกเองออกผลไม้สุกเสียหายสดที่ซื้อมาจากตลาดผลไม้ท้องถิ่นในเมืองปีนังประเทศมาเลเซีย เยื่อกระดาษพื้นฐานในเปลือกถูกลบออกโดยค่อยๆขูดกับขอบคมของมีดที่สะอาดและเปลือกถูกล้างด้วยน้ำกลั่นเพื่อลบฝุ่นยึดมั่น Crystallized ฟีนอล (C6H6O 99%) ที่ได้รับจาก Panreac Sintesis ขณะที่ 4 phenylphenol (C6H5C6H4OH 97%) ที่ได้รับจากดิชเคมิคอล จำกัด (USA) กรดไตรคลอโร (CCl3COOH) และทองแดง (II) ซัลเฟต (CuSO4. 5H2O, 98.5-100%) ที่ซื้อมาจาก Bendosen และ R & M สารเคมีตามลำดับ สารเคมีอื่น ๆ ทั้งหมดและตัวทำละลายเป็นของเกรดและการวิเคราะห์ที่ได้รับจากQRëC.
2.2 การจัดเตรียมและการหมักเปลือกมะม่วง
เปลือกมะม่วงล้างถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ ผสมกับน้ำบริสุทธิ์พิเศษในอัตราส่วน (1: 1) (w / v) โดยใช้การประมวลผลอาหารไฟฟ้า (Kenwood) ที่ 25 ° C เป็นเวลา 5 นาที ความชื้นของเปลือกมะม่วงล้างอากาศแห้งเปลือกมะม่วงก่อนที่จะจ้องมองกระบวนการหมักที่คำนวณได้จะเป็น 11-13% ในขณะที่ความชื้นของเปลือกมะม่วงหลังจากผสมกับน้ำให้อยู่ในรูปแบบการระงับการหมักพบว่า 91.40% ค่า pH ของผิวผสมมีการปรับใช้ 1 M ของ NaOH หรือ HCl และหลังจากนั้น 30 มิลลิลิตรจ่ายในขวดรูปกรวยของความจุ 100 มิลลิลิตร ขวดถูกปิดอย่างแน่นหนากับหมวกยางเพื่อให้บรรลุและรักษาสภาพการหมัก microaerophilic กระบวนการหมักจมอยู่ใต้น้ำที่เกิดขึ้นเองแบบไม่ใช้ออกซิเจนได้ดำเนินการโดยกลุ่มของจุลินทรีย์พื้นเมืองที่อุณหภูมิที่แตกต่างกันเป็นเวลาหลายวันภายใต้เงื่อนไขที่บ่มแบบคงที่ การควบคุมการฆ่าเชื้อที่ถูกตั้งค่าการใช้เงื่อนไขเดียวกันหลังจากขวดนึ่งฆ่าเชื้อที่มีเปลือกผสมที่อุณหภูมิ 121 ° C ที่ 15 ปอนด์ต่อตารางนิ้วเป็นเวลา 15 นาที การสกัดกรดแลคติกได้รับการดำเนินการในตอนท้ายของการบ่ม สกัดจากกรดแลคติกที่เกิดขึ้นได้ดำเนินการโดยเจือจาง 5 มิลลิลิตรเปลือกมะม่วงถอนหมัก (1: 5. v / v) กับน้ำบริสุทธิ์พิเศษ วางเจือจางเขย่าแรง ๆ เป็นเวลา 5 นาที หลังจากนั้น 3 มิลลิลิตรเจือจางตัวอย่างถูกบันทึกลงในหลอดกรูปกคลุม borosilicate (16 × 150 มิลลิเมตร) ซึ่งมีอยู่แล้วมี 3 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโร 10% เพื่อที่จะหยุดกระบวนการหมัก วิธีนี้สุดท้ายก็เก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 วันเพื่อให้ได้วิธีการแก้ปัญหาที่ชัดเจนและเพื่อให้การตกตะกอนของสารแขวนลอยที่ด้านล่างของหลอด ต่อมา 0.5 mL ของการแก้ปัญหาที่ชัดเจนถูกเพิ่มเข้าไปใน 4.5 มิลลิลิตรของน้ำบริสุทธิ์พิเศษและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสจนกว่าจะใช้สำหรับการประเมินระดับกรดแลคติค.
2.3 การวิเคราะห์หาปริมาณกรดแลคติก
เนื้อหากรดแลคติกจากเปลือกหมักถูกกำหนดโดยใช้วิธีการสีตามวิธีการอธิบายโดยเทย์เลอร์ (1996) aliquot (0.5 มิลลิลิตร) ของการแก้ปัญหาที่ชัดเจนเป็นครั้งสุดท้ายที่ได้จากการย่อย 2.2 ข้างต้นถูกนำมาวางในหลอดกรูปกคลุม 16 × 150 มมหลอด borosilicate หลังจากนั้น 3 มิลลิลิตรเข้มข้น H2SO4 ถูกเพิ่มเข้ามาและท่อถูกความร้อนให้เดือด 10 นาที ในการระบายความร้อน, 50 ไมโครลิตรของสาร CuSO4 นอกเหนือไปจาก 100 ไมโครลิตรของฟีนอลพาราฟีนิล (1.5% ฟีนอลพาราฟีนิลละลายในเอทานอล 95%) มีการเพิ่ม หลอดถูกบ่มแล้วที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีจนร่องรอยของตะกอนที่กำลังละลาย ในที่สุดการอ่านการดูดกลืนแสงของการแก้ปัญหาที่เกิดขึ้นถูกนำมาที่ความยาวคลื่น 570 นาโนเมตร.
2.4 การออกแบบการทดลองและการวิเคราะห์ทางสถิติ
การออกแบบ Factorial ถูกจ้างมาเพื่อศึกษาผลของปัจจัยที่สาม (ตัวแปรอิสระ): pH กลางเริ่มต้น (X1) อุณหภูมิในกระบวนการ (X2) และเวลาบ่ม (X1) ในการผลิตกรดแลคติกการตอบสนอง ระดับของปัจจัยคัดสรรได้รับการแต่งตั้งขึ้นอยู่กับการทดลองเบื้องต้นและระดับที่ใช้ ได้แก่ ค่า pH กลางเริ่มต้นที่ 4 และ 10; อุณหภูมิกระบวนการ, 15 และ 35 องศาเซลเซียสและเวลาบ่ม, 3 และ 6 วันที่ การออกแบบ Factorial ประเภท 23 กับห้าจุดศูนย์ถูกใช้ในการศึกษาผลกระทบของปัจจัยที่เลือกอยู่ในช่วงที่ระบุ (ตารางที่ 1) การทดลองทั้งหมดถูกเรียกใช้ในการสุ่มเพื่อลดผลกระทบจากความแปรปรวนที่ไม่คาดคิดในการตอบสนองที่สังเกตได้ (Montgomery, 2001) วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) เพื่อศึกษาผลกระทบของปัจจัยคัดสรรและผลกระทบที่อาจเกิดการทำงานร่วมกันของพวกเขาในการผลิตกรดแลคติก พหุนามลำดับแรกที่มีเงื่อนไขการทำงานร่วมกันถูกนำมาใช้เพื่อให้เหมาะสมกับข้อมูล การถดถอยแบบพหุนาม (2FI) จะได้รับในสมการต่อไปนี้:
สมการ (1)
ดูแหล่งที่มา MathML
เปิด MathJax ในที่ Y คือการตอบสนอง, β0เป็นจุดตัดของรูปแบบ, βiเป็นค่าสัมประสิทธิ์เชิงเส้นในแบบการถดถอย, βij เป็นค่าสัมประสิทธิ์การปฏิสัมพันธ์ระหว่างปัจจัยที่แตกต่างกันและแสดงให้เห็นถึงระยะεข้อผิดพลาด การออกแบบซอฟต์แวร์รุ่นผู้เชี่ยวชาญ 6.0.10 ถูกนำมาใช้. ตารางที่ 1. ผลการทดลองการออกแบบปัจจัยการผลิตกรดแลคติกรวมทั้งค่าสังเกตและคาดการณ์. ค่า pH อุณหภูมิ (° C) สังเกตที่คาดการณ์เวลา (วัน) กรดแลคติก (g / l) แลคติก กรด (g / l) 4 15 3 2.967 2.967 10 15 3 2.082 2.082 4 35 3 2.175 2.175 10 35 3 9.3 9.3 4 6 15 2,442 2,442 10 15 6 2.517 2.517 35 4 6 3.75 3.75 10 35 6 17.484 17.484 7 25 4.5 5.268 4.9506 7 25 4.5 5.001 4.9506 7 25 4.5 4.626 4.9

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัตถุดิบและสารเคมี
เปลือกมะม่วงพันธุ์มังกรทอง ศึกษาด้วยตนเองลอกใหม่ไม่เสียหายสุกผลไม้ที่ซื้อมาจากตลาดผลไม้ท้องถิ่นในปีนัง , มาเลเซีย ต้นแบบกระดาษบนเปลือกจะถูกลบออกโดยการค่อย ๆขูดกับขอบคมของมีดสะอาดและ peels ถูกล้างด้วยน้ำกลั่นเพื่อลบในฝุ่นตกผลึก ฟีนอล ( c6h6o 99% ) ได้จาก panreac sintesis ในขณะที่ 4-phenylphenol ( c6h5c6h4oh , 97 ) ได้จากอัลดริชเคมี . ( USA ) กรดไตรคลอโรอะซิติก ( ccl3cooh ) และจุนสี ( CuSO4 . อิเล็ก , 98.5 ( 100% ) ซื้อจาก bendosen และ R & M สารเคมีตามลำดับ สารเคมีอื่น ๆทั้งหมดและตัวทำละลายเกรดวิเคราะห์ และได้รับจาก QR . C .
2.2 .การเตรียมและการหมักเปลือกมะม่วง
ล้างเปลือกมะม่วงถูกหั่นเป็นชิ้นเล็ก ๆผสมกับน้ำบริสุทธิ์สูงในอัตราส่วน 1 : 1 ) ( w / v ) ที่ใช้โปรเซสเซอร์อาหารไฟฟ้า ( Kenwood ) ที่อุณหภูมิ 25 ° C เป็นเวลา 5 นาที ความชื้นของอากาศแห้ง ให้ล้างเปลือกมะม่วง เปลือกมะม่วงก่อนโทนโท่กระบวนการหมักมีค่าเป็น 11 – 13 % ในขณะที่ความชื้นของเปลือกมะม่วงหลังจากผสมกับน้ำในการหมักแบบชั่วคราว คือ 91.40 % pH ของผิวผสมมีการปรับใช้ 1 M HCl และ NaOH หรือหลังจากนั้น 30 ml ก็จ่ายเป็นทรงกรวย ขวด 100 ml ความจุ ขวดปิดฝาแน่นด้วยยางเพื่อให้บรรลุและรักษาสภาวะการหมักไมโครแอโรฟิลิก .ธรรมชาติในกระบวนการหมักไร้อากาศดำเนินการโดยกลุ่มจุลินทรีย์พื้นบ้านที่อุณหภูมิแตกต่างกันหลายวันภายใต้เงื่อนไขการบ่มแบบคงที่ การควบคุมงานตั้งการใช้เงื่อนไขเดียวกันหลังจากอัตราส่วนโฟกัสขวดที่มีเปลือกผสมที่ 121 ° C ที่ 15 ปอนด์ต่อตารางนิ้วเป็นเวลา 15 นาที กรดแลคติกที่สกัดออกมาในตอนท้ายของการบ่มการสกัดกรดแลกติกที่เกิดขึ้นกระทำโดย diluting 5 มิลลิลิตร ถอนหมักเปลือกมะม่วง ( 1 : 5 . v / v ) กับ อัลตร้า น้ำบริสุทธิ์ เจือจางวางถูกเขย่าอย่างแรง เป็นเวลา 5 นาที หลังจากนั้น 3 มล. เจือจางตัวอย่างเพิ่มเป็นสกรู borosilicate ปกคลุมท่อ ( 16 × 150 มม. ) ซึ่งประกอบด้วย 3 ml 10% กรดไตรคลอโรอะซิติก เพื่อหยุดกระบวนการหมักนี้โซลูชั่นสุดท้ายที่ถูกเก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4 องศา C เป็นเวลา 2 วัน เพื่อให้ได้ทางออกที่ชัดเจน และอนุญาตให้มีการตกตะกอนของสารแขวนลอยที่ด้านล่างของหลอด ต่อมา 0.5 ml ของการแก้ปัญหาที่ชัดเจน ได้เพิ่มเป็น 4.5 มล. ของน้ำบริสุทธิ์สูง และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา C ถึงใช้ค่าของระดับกรดแลคติก .
2.3 การหาปริมาณกรดแลกติก
ปริมาณกรดแลคติกจากการหมักเปลือกก็ตัดสินใจใช้วิธี Colorimetric ตามวิธีการที่อธิบายไว้โดยเทย์เลอร์ ( 1996 ) เป็นส่วนลงตัว ( 0.5 มล. ) ของสารละลายที่ได้จากวรรคสุดท้ายชัดเจน 2.2 ข้างต้นอยู่ในเกลียวฝาครอบหลอด 16 × 150 มม. borosilicate หลอด หลังจากนั้น 3 มล. ของกรดซัลฟิวริกเข้มข้นเพิ่มและท่อ คืออุ่นให้เดือดนาน 10 นาทีเมื่อเย็น , 50 μ L ของ CuSO4 รีเอเจนต์นอกจาก 100 μ L ของ Para Phenyl ฟีนอล ( 1.5% ) พาราฟีนอล ละลายในเอทานอล 95 เปอร์เซ็นต์ ) มีการเพิ่ม หลอดแล้วบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C เป็นเวลา 30 นาที จนถึงร่องรอยของการถูกละลาย ในที่สุด ค่าการดูดกลืนแสงของสารละลายที่เกิดการอ่านถ่ายที่ความยาวคลื่น 570 nm .
2.4 . การออกแบบการทดลองและการวิเคราะห์ทางสถิติ
การออกแบบการทดลองนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาผลของปัจจัยทั้งสาม ( ตัวแปรอิสระ ) : pH เริ่มต้นปานกลาง ( X1 ) อุณหภูมิกระบวนการ ( X2 ) และเวลาในการบ่ม ( x1 ) ในการผลิตกรดแลคติกในการตอบสนอง ระดับของปัจจัยคัดสรรที่ถูกเลือกจากการทดลองเบื้องต้นและระดับกลางที่ใช้ ได้แก่ ค่า pH เริ่มต้นที่ 4 และ 10 ; อุณหภูมิกระบวนการ , 15 และ 35 ° Cและ ระยะเวลา 3 และ 6 วัน การออกแบบการทดลองประเภท 23 กับศูนย์จุดห้าถูกใช้เพื่อศึกษาผลกระทบของปัจจัยคัดสรรภายในช่วงที่ระบุไว้ ( ตารางที่ 1 ) ทุกการทดลองวิ่งในการสุ่มเพื่อลดผลกระทบของความแปรปรวนและไม่คาดคิดในการตอบสนอง ( มอนโกเมอรี่ , 2001 )วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) เพื่อศึกษาผลกระทบของปัจจัยคัดสรรและศักยภาพของพวกเขามีปฏิสัมพันธ์ต่อการผลิตกรดแลกติก พหุนามลำดับแรก มีเงื่อนไขการใช้ให้เหมาะสมกับข้อมูล ความถดถอยพหุนามแบบ ( 2fi ) จะได้รับในสมการดังต่อไปนี้ สมการ ( 1 )


เปิดแหล่งที่มาดู MathML mathjax บน

ที่ Y มีการตอบสนองบีตา 0 คือสกัดกั้นของแบบบีตาเป็นค่าสัมประสิทธิ์ในตัวแบบการถดถอย , บีตา ij เป็นปฏิสัมพันธ์ระหว่างค่าปัจจัยต่าง ๆ และεแทนเงื่อนไขข้อผิดพลาด การออกแบบซอฟต์แวร์ผู้เชี่ยวชาญรุ่น 6.0.10 ใช้ ตาราง 1
.
ผลการทดลองแฟคทอเรียลเพื่อผลิตกรดแลคติก รวมทั้งสังเกตและทำนายค่า พีเอช อุณหภูมิ ( ° C )

สังเกตทำนาย
เวลา ( วัน ) กรดแลกติก ( กรัม / ลิตร ) กรดแลคติก ( g / l )
4 15 3 4.769 4.769
10 15 3 2.082 2.082
4 3 3 2.175 2.175
10 35 3 9.3 9.3
4 15 6 2.328 2.328
10 15 6 2.517 2.517
4 35 6 3.75 3.75
10 35 6 17.484 17.484
7 25 4.5 5.268 4.9506
7 25 4.5 5.001 4.9506
7 25 4.5 4.626 4.9