The expression levels of the select

The expression levels of the selected maize WRKY TF and pathway component genes in each line in response to each treatment was analyzed through qPCR using the same protocol and conditions described above in a 15 m l reaction volume containing 25 ng template cDNA. Three technical replicates were done for each sample. Threshold cycle (Ct) values were then calculated using a fluorescence threshold of 0.3 with a baseline automatically calculated by the equipment software. Relative gene expression levels were then determined by comparing the Ct of the target gene to that
of the internal reference gene, Zm18S rRNA, using the following equation: relative gene expression ¼ [(E Zm18S þ 1) (Ct
Zm18S) /(E target gene þ 1) (Ct target gene) ], where E is the primer amplification efficiency [5,36,38]. The biomass of A.flavus mycelia present with in the immature maize kernel tissues in the 2012 samples collected at 10 and 14 DAI was determined according toMideroset al. [39] using a Biorad iQ5 Optical System (Biorad, Hercules, CA, USA). Threshold
cycle(Ct) values were then calculated using a fluorescence threshold of 120.0 with a baseline automatically calculated by the equipment software with standard curves generated using the log(concentration) of serially diluted A. flavus genomic DNA ranging from50 ng to 5 fg plotted against the detected Ct values for each concentration (Fig.S1). Fungal biomass was expressed as a ratio of A.flavus mycelia vs. maize kernel fresh weight (mg ? g ?1 ).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ระดับนิพจน์ของข้าวโพดการเลือกยีนประกอบ WRKY TF และทางเดินในแต่ละบรรทัดในแต่ละทรีทเม้นต์ถูกวิเคราะห์ผ่าน qPCR ที่ใช้โพรโทคอลและข้างในปฏิกิริยาปริมาณ l 15 m 25 ng แม่ cDNA ที่ประกอบด้วยเงื่อนไขเดียวกัน เหมือนกับเทคนิคสามถูกทำสำหรับแต่ละตัวอย่าง ค่าขีดจำกัดรอบ (Ct) ได้แล้วคำนวณ fluorescence ขีดจำกัดของ 0.3 ด้วยพื้นฐานการคำนวณโดยอัตโนมัติ โดยซอฟต์แวร์ของอุปกรณ์ ระดับยีนญาตินิพจน์ถูกแล้วตามเปรียบเทียบ Ct ของยีนเป้าหมายที่ของยีนภายในอ้างอิง Zm18S rRNA ใช้สมการต่อไปนี้: ญาติยีน¼ [(þ E Zm18S 1) (CtZm18S) / (อีเป้าหมายþยีน 1) (ยีนเป้าหมาย Ct)], ซึ่งเป็นประสิทธิภาพการขยายพื้น [5,36,38] ชีวมวลของ A.flavus mycelia อยู่ด้วยในเนื้อเยื่อของเมล็ดข้าวโพด immature ในตัวอย่าง 2012 ที่รวบรวมที่ได 10 และ 14 ได้กำหนดตาม al. toMideroset [39] ใช้ Biorad iQ5 แสงระบบ (Biorad เฮอร์คิวลิส CA, USA) ขีดจำกัดcycle(Ct) ค่าถูกคำนวณด้วยขีดจำกัดของ 120.0 fluorescence เป็นพื้นฐานการคำนวณโดยอัตโนมัติ โดยซอฟต์แวร์ของอุปกรณ์กับเส้นโค้งมาตรฐานที่สร้างขึ้นโดยใช้ log(concentration) ของ serially แตกออกแล้ว flavus genomic DNA ตั้งแต่ from50 ng ไป 5 fg พล็อตจากค่า Ct ตรวจพบสำหรับแต่ละความเข้มข้น (Fig.S1) ชีวมวลเชื้อราถูกแสดงเป็นอัตราส่วนของ mycelia A.flavus เทียบกับเมล็ดข้าวโพดสดน้ำหนัก (mg ? g ? 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ระดับการแสดงออกของ TF WRKY ข้าวโพดที่เลือกและทางเดินยีนส่วนประกอบในแต่ละบรรทัดในการตอบสนองต่อการรักษาแต่ละวิเคราะห์ผ่าน qPCR ใช้โปรโตคอลเดียวกันและเงื่อนไขที่กล่าวไว้ข้างต้นในปริมาณ 15 มลปฏิกิริยาที่มีแม่แบบ 25 นาโนกรัมยีน สามซ้ำทางเทคนิคได้ทำสำหรับแต่ละตัวอย่าง วงจรเกณฑ์ (CT) ค่านี้จะถูกคำนวณแล้วใช้เกณฑ์การเรืองแสงของ 0.3 ที่มีพื้นฐานคำนวณโดยอัตโนมัติโดยซอฟต์แวร์อุปกรณ์ ระดับการแสดงออกของยีนญาติได้รับการพิจารณาแล้วโดยการเปรียบเทียบกะรัตของยีนเป้าหมายที่ของยีนอ้างอิงภายใน Zm18S rRNA โดยใช้สมการต่อไปนี้: การแสดงออกของยีนที่สัมพันธ์¼ [(E Zm18S þ 1) (Ct Zm18S) / (เป้าหมาย E ยีนþ 1) (Ct ยีนเป้าหมาย)] ที่ E คือประสิทธิภาพการขยายไพรเมอร์ [5,36,38] มวลชีวภาพของเส้นใย A.flavus ปัจจุบันที่มีอยู่ในเนื้อเยื่อของเมล็ดที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะในปี 2012 กลุ่มตัวอย่างที่เก็บที่ 10 และ 14 DAI ถูกกำหนดตาม toMideroset อัล [39] โดยใช้ Biorad iQ5 ระบบออปติคอล (Biorad ดาว, CA, USA) เกณฑ์วงจร (CT) ค่านี้จะถูกคำนวณแล้วใช้เกณฑ์การเรืองแสงของ 120.0 ที่มีพื้นฐานคำนวณโดยอัตโนมัติโดยซอฟต์แวร์อุปกรณ์ที่มีเส้นโค้งมาตรฐานสร้างขึ้นโดยใช้บันทึก (ความเข้มข้น) ของเจือจางลำดับ A. flavus ดีเอ็นเอตั้งแต่ from50 ng 5 FG กับพล็อต ค่าที่ตรวจพบกะรัตสำหรับแต่ละความเข้มข้น (Fig.S1) ชีวมวลเชื้อราได้แสดงเป็นอัตราส่วนของเส้นใย A.flavus กับเมล็ดน้ำหนักสด (mg? กรัม 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ระดับการแสดงออกของยีนที่ wrky TF ข้าวโพดและส่วนทางเดินในแต่ละบรรทัดในการตอบสนองการรักษาแต่ละวิเคราะห์ผ่าน qpcr ใช้โปรโตคอลเดียวกันและเงื่อนไขที่อธิบายไว้ข้างต้นใน 15 M L ปฏิกิริยาปริมาณ 25 ของแม่แบบที่มียีน . เทคนิคทำ 3 ซ้ำสำหรับแต่ละตัวอย่างวัฏจักรธรณี ( CT ) ค่าแล้วคำนวณโดยใช้เกณฑ์ของ 0.3 กับพื้นฐานการคํานวณโดยอัตโนมัติด้วยอุปกรณ์ซอฟต์แวร์ ระดับการแสดงออกของยีนเป็นญาติแล้วพิจารณาเทียบ CT ของยีนเป้าหมายที่
ของยีนอ้างอิงภายใน zm18s rRNA โดยใช้สมการต่อไปนี้ : ญาติของยีน¼ [ ( E zm18s þ 1 )
( CTzm18s ) / E เป้าหมายยีนþ 1 ) ( CT ยีนเป้าหมาย ) ] , E อยู่ไหนประสิทธิภาพรองพื้น [ แบบ 5,36,38 ] มวลของเส้นใย a.flavus มีอยู่ในเนื้อเยื่ออ่อนข้าวโพดเมล็ด 2012 จำนวน 10 และ 14 ได้ถูกกำหนดตาม tomideroset อัล [ 39 ] ใช้ biorad iq5 แสงระบบ ( biorad , Hercules , CA , USA ) ธรณีประตู
วงจร ( CT ) ค่าแล้วคำนวณโดยใช้เกณฑ์ของ 120.0 เรืองแสงด้วยพื้นฐานโดยอัตโนมัติคำนวณโดยอุปกรณ์ซอฟต์แวร์กับเส้นโค้งมาตรฐาน สร้างโดยใช้ log ( สมาธิ ) เป็น A . flavus เจือจางดีเอ็นเอตั้งแต่ from50 นาโน 5 FG วางแผนกับตรวจ CT ค่าสำหรับแต่ละความเข้มข้น ( fig.s1 ) มวลชีวภาพเชื้อราซึ่งมีอัตราส่วนของ Aเชื้อราเส้นใยข้าวโพดเมล็ดและน้ำหนักสด ( มก. ? G ? 1 )