acid 2% (v/v); B = MeCN with 2% ace

acid 2% (v/v); B = MeCN with 2% acetic acid (v/v). Flow rate: 1 ml/min.
UV detection between 190 and 450 nm.
2.2.2. Total phenolic
Total soluble phenolics derivatives were determined according to the
Folin–Ciocalteau method (Singleton and Rossi, 1965) using a reaction
medium containing 50 ll of sample, blank or gallic acid standard,
respectively, 50 ll of 7% (v/v) acetic acid, 50 ll of Folin–Ciocalteaus
reagent, 50 ll of 35% (w/v) sodium carbonate and 800 ll of distilled water.
After mixing, the reaction was incubated during 90 min, at room temperature,
in the dark. Light absorbance was measured at 725 nm in a
Beckman DU-70 spectrophotometer, and the total phenolic content was
expressed as gallic acid equivalents per mg of extract.
2.2.3. Total sugars
Total sugars in crude extract were determined according to Dubois
et al. (1956), by the phenol-sulfuric method. The reaction mixture contained,
respectively, 500 ll of sample, blank or a glucose standard, 500 ll
of an aqueous phenol solution 5% (w/v) and 2.5 ml of fuming sulfuric acid.
After mixing and chilling, absorbance was measured at 490 nm to determine
the content of hexoses.
2.2.4. Total flavonoids
Total flavonoids present in the crude extract were determined in
medium containing 200 ll of sample, blank or a quercetin standard, 60 ll
of glacial acetic acid, 1 ml of pyridine:water: 12% aluminum chloride
solution (17:80:3), 1.24 ml of DMSO:H2O (1:1). The reaction product was
spectrophotometrically determined at 420 nm (Costa, 1972).
2.3. Determination of in vitro antioxidant activity of crude
extract
2.3.1. Inhibition of lipid peroxidation induced by the Fe2+/citrate system
Total lipid peroxidation in serum was determined by measuring thiobarbituric
acid reactive substances (TBARS), following the fluorescence
method described by Yagi (1998), using 515 nm and 553 nm as excitation
and emission wavelengths, respectively. Briefly, 250 ll of pooled serum was
added to a reaction mixture containing 125 mmol/l KCl and 50 mmol/l
Hepes-KOH (pH 7.4), and incubated at 37 C, for 6 h without addition of
extract (control), or in presence of 2.5 and 5.0% (w/v) of extract, respectively,
added 5 min prior to the beginning of the oxidation reaction. Peroxidation
was induced by adding 50 lmol/l Fe(NH4)2(SO4)2/2 mmol/l
sodium citrate. Forty microlitre were taken at zero time and every 1-h from
the incubation mixture. Lipids and proteins were precipitated by the
addition of 12 N H2SO4 and 10% (w/v) phosphotungstic, and centrifuged
at 1900g for 10 min. The pellet was resuspended in water and 1% (w/v)
thiobarbituric acid. The reaction mixture was kept at 95 C for 1 h, cooled,
and the reaction product extracted with butanol and measured in a Hitachi
F4500 fluorimeter, using tetramethoxypropane as a standard. The results
were obtained from three different experiments performed in triplicate.
2.3.2. 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) assay
Different concentrations of the extract were measured for hydrogen
donating or radical scavenging ability, using the stable radical 2,
2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), according to Parejo et al. (2002).
The reaction mixture containing 1.5 ml of a DPPH methanolic solution
(0.2 mg/ml) plus 0.75 ml of the crude extract at different concentrations
(methanol for the control) was incubated at 37 C for 20 min,
and the absorbance was measured spectrophotometrically at 517 nm.
The percent of DPPH discoloration of the sample was then calculated.
Butylated hydroxytoluene (BHT, 1 mg/dl) was used as a positive
control.
F.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กรด 2% (v/v); B = MeCN กับกรดอะซิติก 2% (v/v) อัตราการไหล: 1 มิลลิลิตร/นาทีการตรวจจับ UV ระหว่าง 190 และ 450 nm2.2.2 รวมฟีนอPhenolics ละลายรวมอนุพันธ์กำหนดตามวิธีท่อง – Ciocalteau (เดี่ยวและรอสซี 1965) ใช้ปฏิกิริยาขนาดกลางที่ประกอบด้วยจะว่างเปล่า ตัวอย่างหรือมาตรฐานกรด gallic, 50ตามลำดับ 50 ll 7% (v/v) กรดอะซิติก 50 ll ของท่อง – Ciocalteausน้ำยา 50 จะ 35% (w/v) โซเดียมคาร์บอเนตและ 800 ll ของน้ำกลั่นหลังผสม ปฏิกิริยา incubated ในช่วง 90 นาที ที่อุณหภูมิห้องในมืด โดยวัดค่าแสงที่ 725 nm ในการสเปค Beckman DU-70 และฟีนอเนื้อหาทั้งหมดแสดงเป็นรายการเทียบเท่ากรด gallic ต่อมิลลิกรัมของสารสกัด2.2.3. รวมน้ำตาลกำหนดตาม Dubois น้ำตาลรวมในสารสกัดหยาบและคณะ (1956), โดยวิธีฟีนอล-กำมะถัน ส่วนผสมของปฏิกิริยาที่มีอยู่ตามลำดับ 500 ตัวอย่าง ว่างเปล่า หรือกลูโคสเป็นมาตรฐาน 500 ll llมีฟีนออควีโซลูชัน 5% (w/v) และ 2.5 มิลลิลิตรของกรดซัลฟิวริกฟูมิ่งหลังจากผสม และหนาว ค่าวัดที่ 490 nm เพื่อตรวจสอบเนื้อหาของ hexoses2.2.4. จำนวน flavonoidsกำหนดรวม flavonoids ในสารสกัดหยาบในปานกลางที่ประกอบด้วย 200 ตัวอย่าง ว่างเปล่า หรือโลหิตเป็นมาตรฐาน 60 ll llของกรดอะซิติกน้ำแข็ง 1 ml pyridine: น้ำ: 12% อลูมิเนียมคลอไรด์โซลูชั่น (17:80:3), ml 1.24 ของ DMSO: H2O (1:1) ปฏิกิริยาผลิตภัณฑ์spectrophotometrically กำหนดที่ 420 nm (คอสตา 1972)2.3. การกำหนดกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองของดิบสารสกัดจาก2.3.1. การยับยั้ง peroxidation ของไขมันเกิดจาก Fe2 ++ ระบบซิเตรทกำหนด โดยวัด thiobarbituric peroxidation ของไขมันทั้งหมดในซีรั่มกรดทำปฏิกิริยาสาร (TBARS), ต่อเรืองแสงวิธีอธิบาย โดยยางิ (1998), โดยใช้ 515 nm และ 553 นาโนเมตรเป็นการกระตุ้นและปล่อยความยาว คลื่น ตามลำดับ สั้น ๆ 250 ll ของซีรั่ม pooled ถูกลงในส่วนผสมของปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย 125 mmol/l KCl และ 50 มิลลิโมล/ลิตรHepes-เกาะ (pH 7.4), และรับการกกที่ 37 C สำหรับ 6 h โดยไม่เพิ่มแยก (ตัวควบคุม), หรือในที่ที่ 2.5 และ 5.0% (w/v) ของสารสกัด ตามลำดับเพิ่ม 5 นาทีก่อนการเริ่มต้นของปฏิกิริยาออกซิเดชัน Peroxidationถูกเหนี่ยวนำ โดยเพิ่ม 50 lmol/l Fe (NH4) 2 (SO4) 2/2 mmol/lโซเดียมซิเตรท สี่สิบ microlitre ถ่ายเวลาเป็นศูนย์และทุก 1 ชม.จากส่วนผสมของการกกไข่ ไขมันและโปรตีนตกตะกอนโดยการ12 N H2SO4 และ phosphotungstic 10% (w/v) และเหวี่ยงเวลา 1900 กรัมสำหรับ 10 นาที เม็ดถูก resuspended ในน้ำและ 1% (w/v)thiobarbituric กรด ส่วนผสมของปฏิกิริยาถูกเก็บไว้ที่ C 95 สำหรับ h 1 เย็นและผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาสกัด ด้วยบิวทานอ และวัด HitachiF4500 fluorimeter ใช้ tetramethoxypropane เป็นมาตรฐาน ผลลัพธ์ได้รับจากการทดลองแตกต่างกันสามทำลข้อ2.3.2. 2.2 นไดฟีนิลได-1-picrylhydrazyl (DPPH) assayวัดความเข้มข้นแตกต่างกันของสารสกัดได้ไฮโดรเจนบริจาค หรือรุนแรง scavenging สามารถ ใช้มั่นคงรุนแรง 22-นไดฟีนิลได-1-picrylhydrazyl (DPPH), ตาม Parejo et al. (2002)1.5 ml ของ DPPH methanolic โซลูชันที่ประกอบด้วยส่วนผสมของปฏิกิริยา(0.2 mg/ml) บวก 0.75 มล.ของสารสกัดหยาบที่ความเข้มข้นแตกต่างกัน(เมทานอลสำหรับตัวควบคุม) incubated ที่ 37 C 20 นาทีและค่าที่ถูกวัด spectrophotometrically ที่ 517 nmจากนั้นมีคำนวณเปอร์เซ็นต์ของ DPPH เปลี่ยนสีของตัวอย่างใช้ butylated hydroxytoluene (บาท 1 mg/dl) เป็นบวกการควบคุมF

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กรด 2% (v / v); B = MeCN กับกรดอะซิติก 2% (v / v) อัตราการไหล 1. มล. / นาที
. ตรวจจับรังสียูวีระหว่าง 190 และ 450 นาโนเมตร
2.2.2 รวมฟีนอล
รวมฟีนอลที่ละลายน้ำอนุพันธ์ได้รับการพิจารณาให้เป็นไปตาม
Folin-Ciocalteau วิธี (ซิงเกิลและรอสซี 1965) โดยใช้ปฏิกิริยา
ขนาดกลางมี 50 LL ของตัวอย่างที่ว่างเปล่าหรือฝรั่งเศสมาตรฐานกรด
ตามลำดับ 50 LL 7% (v / v) กรดอะซิติก 50 LL ของ Folin-Ciocalteaus
น้ำยา 50 LL 35% (w / v) โซเดียมคาร์บอเนตและ 800 LL น้ำกลั่น.
หลังจากผสมปฏิกิริยาถูกบ่มในช่วง 90 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
ในที่มืด การดูดกลืนแสงวัดที่ 725 นาโนเมตรใน
spectrophotometer Beckman DU-70 และฟีนอลเนื้อหาทั้งหมดได้รับการ
แสดงเป็นกรดแกลลิเทียบเท่าต่อมิลลิกรัมของสารสกัดจาก.
2.2.3 รวมน้ำตาล
น้ำตาลทั้งหมดในสารสกัดหยาบที่ถูกกำหนดขึ้นมาตามไปดูบัวส์
, et al (1956) โดยวิธีฟีนอลซัลฟูริก ผสมปฏิกิริยาที่มีอยู่
ตามลำดับ 500 LL ของตัวอย่างที่ว่างเปล่าหรือมาตรฐานกลูโคส 500 LL
ของการแก้ปัญหาฟีนอลในน้ำ 5% (w / v) และ 2.5 มิลลิลิตรไอกรดกำมะถัน.
หลังจากการผสมและหนาวเหน็บ, การดูดกลืนแสงวัดที่ 490 นาโนเมตรเพื่อตรวจสอบ
เนื้อหาของ hexoses ได้.
2.2.4 flavonoids รวม
flavonoids รวมอยู่ในสารสกัดหยาบได้รับการพิจารณาในการ
ขนาดกลางที่มี 200 LL ของตัวอย่างที่ว่างเปล่าหรือมาตรฐาน quercetin 60 LL
ของกรดอะซิติกน้ำแข็ง 1 มล. ไพริดีน: น้ำ: 12% อลูมิเนียมคลอไรด์
การแก้ปัญหา (17: 80: 3 ) 1.24 มิลลิลิตร DMSO: H2O (1: 1) ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาถูก
กำหนด spectrophotometrically ที่ 420 นาโนเมตร (คอสตา, 1972).
2.3 ความมุ่งมั่นของกิจกรรมในหลอดทดลองต้านอนุมูลอิสระของน้ำมันดิบ
สารสกัดจาก
2.3.1 ยับยั้งการเกิด lipid peroxidation เหนี่ยวนำโดย Fe2 + / ระบบ citrate
เกิด lipid peroxidation รวมในซีรั่มที่ถูกกำหนดโดยการวัด thiobarbituric
สารปฏิกิริยากรด (TBARS) ดังต่อไปนี้เรืองแสง
วิธีการอธิบายโดยยากิ (1998) โดยใช้ 515 นาโนเมตรและ 553 นาโนเมตรเป็นการกระตุ้น
และการปล่อยความยาวคลื่น ตามลำดับ สั้น ๆ , 250 LL ของซีรั่ม pooled ถูก
เพิ่มไปยังผสมปฏิกิริยาที่มี 125 มิลลิโมล / ลิตร KCl และ 50 มิลลิโมล / ลิตร
HEPES-KOH (pH 7.4) และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 ชั่วโมงโดยไม่ต้องเพิ่มขึ้นของ
สารสกัด (ควบคุม) หรือ ในการปรากฏตัวของ 2.5 และ 5.0% (w / v) ของสารสกัดตามลำดับ
เพิ่ม 5 นาทีก่อนที่จะมีจุดเริ่มต้นของการเกิดปฏิกิริยาออกซิเดชันที่ peroxidation
ถูกชักนำโดยการเพิ่ม 50 lmol / L Fe (NH4) 2 (SO4) 2/2 มิลลิโมล / ลิตร
โซเดียมซิเตรต สี่สิบไมโครลิตรถูกนำมาที่ศูนย์เวลาและทุก 1 ชั่วโมงจาก
ส่วนผสมบ่ม ไขมันและโปรตีนถูกตกตะกอนโดย
นอกเหนือจาก 12 N H2SO4 และ 10% (w / v) phosphotungstic และหมุนเหวี่ยง
ที่ 1900g เป็นเวลา 10 นาที เม็ดถูก resuspended ในน้ำและ 1% (w / v)
กรด thiobarbituric ผสมปฏิกิริยาถูกเก็บไว้ที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง, ระบายความร้อนด้วย
สินค้าปฏิกิริยาสกัดด้วยบิวทานอและวัดในฮิตาชิ
F4500 fluorimeter ใช้ tetramethoxypropane เป็นมาตรฐาน ผล
ที่ได้รับจากการทดลองสามที่แตกต่างกันในการดำเนินการเพิ่มขึ้นสามเท่า.
2.3.2 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) การทดสอบ
ความเข้มข้นที่แตกต่างกันของสารสกัดถูกวัดสำหรับไฮโดรเจน
บริจาคหรือความสามารถในการขับที่รุนแรงโดยใช้เสถียรภาพรุนแรง 2,
2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) ตามเนี่ยลปาเร et al, . (2002).
ผสมปฏิกิริยาที่มี 1.5 มล. ของการแก้ปัญหา DPPH เมทานอล
(0.2 mg / ml) บวก 0.75 มล. ของสารสกัดที่ระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกัน
(เมทานอลสำหรับควบคุม) ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที
และการดูดกลืนแสงได้ วัด spectrophotometrically ที่ 517 นาโนเมตร.
เปอร์เซ็นต์ของ DPPH การเปลี่ยนสีของกลุ่มตัวอย่างที่คำนวณได้แล้ว.
butylated hydroxytoluene (BHT 1 mg / dL) ถูกใช้เป็นบวก
การควบคุม.
เอฟ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กรด 2% ( v / v ) ; b = mecn กรดอะซิติกร้อยละ 2 ( v / v ) อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาทีตรวจจับยูวีระหว่าง 190 และ 450 nm .2.2.2 . ฟีนอลทั้งหมดปริมาณโพลีฟีนอลซึ่งเป็นไปตามfolin –วิธีการ ciocalteau ( Singleton และรอสซี่ , 1965 ) โดยใช้ปฏิกิริยาอาหารที่ประกอบด้วย 50 จะตัวอย่างเปล่าหรือกรดแกลลิคมาตรฐาน ,ตามลำดับ , 50 จะ 7 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรด 50 จะ folin – ciocalteausรีเอเจนต์ , 50 จะ 35 % ( w / v ) โซเดียม คาร์บอเนต และ 800 จะกลั่นน้ำหลังจากผสมปฏิกิริยาที่ถูกบ่มใน 90 นาที ที่อุณหภูมิห้องในที่มืด วัดการดูดกลืนแสงที่ 725 nm ในเบคแมน du-70 Spectrophotometer และปริมาณฟีนอลิกทั้งหมดแสดงเป็นกรดแกลลิคเทียบเท่าต่อมิลลิกรัม สารสกัด2.2.3 . ปริมาณน้ำตาลทั้งหมดน้ำตาลทั้งหมดในสารละลายสกัดจากบัวet al . ( 1956 ) , ฟีนอลซัลฟูริกโดยวิธี ปฏิกิริยาผสมมีอยู่2 , 500 จะตัวอย่างที่ว่างเปล่าหรือกลูโคส 500 จะได้มาตรฐานของสารละลายฟีนอลโซลูชั่น 5% ( w / v ) และ 2.5 ml เป็นไอของกรดกำมะถันหลังจากการผสมและหนาว , ค่าวัดที่ 490 nm เพื่อตรวจสอบเนื้อหาของ hexoses .2.2.4 . ฟลาโวนอยด์ทั้งหมดสารสกัดรวมอยู่ในสารละลายในตัวอย่างอาหารที่มี 200 จะว่างหรือเคอร์ 60 จะได้มาตรฐานของกรดแอซีติก 1 มิลลิลิตรของไพริดีน : น้ำ : 12 % อลูมิเนียมคลอไรด์โซลูชั่น ( 17:80:3 ) 5 ml ของ DMSO : H2O ( 1 : 1 ) ผลิตภัณฑ์ของปฏิกิริยา คือนี้กำหนดที่ 420 nm ( Costa , 1972 )2.3 การหาปริมาณสารต้านอนุมูลอิสระของดิบสารสกัด2.3.1 . ยับยั้งการเกิด lipid peroxidation ที่เกิดจากระบบ fe2 + / ซิเตรตlipid peroxidation รวมในซีรั่มถูกกำหนดโดยการวัดเท่ากับกรดเป็นสารเรืองแสง ( ปกติ ) ดังต่อไปนี้วิธีที่อธิบายโดยยากิ ( 1998 ) , ใช้ 515 nm และ 553 nm โดยกระตุ้นและการปล่อยความยาวคลื่น ตามลำดับ สั้น ๆ , รวม 250 จะเป็นเซรั่มเพิ่มปฏิกิริยาผสมที่ประกอบด้วย 125 มิลลิโมล / ลิตรปริมาณ 50 มิลลิโมล / ลิตรฮีเปสเกาะ ( pH 7.4 ) บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 ชั่วโมง โดยเพิ่มสารสกัด ( ควบคุม ) หรือในการปรากฏตัวของ 2.5 และ 5.0 เปอร์เซ็นต์ ( น้ำหนัก / ปริมาตร ) สารสกัด ตามลำดับเพิ่ม 5 นาทีก่อนที่จะเริ่มต้นของปฏิกิริยาออกซิเดชัน . -คือการเพิ่ม 50 lmol / L Fe ( NH4 ) 2 ( ปา ) 2 / 2 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมซิเตรท สี่สิบไมโครลิตรถ่ายที่ศูนย์ และทุก 1-h จากบ่มส่วนผสม ไขมันและโปรตีนที่ตกตะกอนด้วยคือเพิ่ม 12 N กรดซัลฟิวริกและ 10% ( w / v ) phosphotungstic ไฟฟ้า ,ที่ 1900g เป็นเวลา 10 นาทีในน้ำ และเป็นเม็ด resuspended 1% ( w / v )เท่ากับกรด ปฏิกิริยาที่ผสมไว้ที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง เย็นลงและผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาสกัดด้วยบิวทานอล และวัดใน ฮิตาชิf4500 fluorimeter โดยใช้ tetramethoxypropane เป็นมาตรฐาน ผลลัพธ์ที่ได้จากการทดลองที่แตกต่างกันสามทั้งสามใบ2.3.2 . 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl ( dpph ) การทดสอบระดับความเข้มข้นของสารสกัดวัดไฮโดรเจนบริจาค หรือความสามารถในการเป็นตัวเร่งปฏิกิริยาที่ใช้มีเสถียรภาพที่รุนแรง 22-diphenyl-1-picrylhydrazyl ( dpph ) ตาม parejo et al . ( 2002 )ปฏิกิริยาผสมที่ประกอบด้วย 1.5 มิลลิลิตรของสารละลายเมทานอล dpph( 0.2 mg / ml ) บวก 0.75 มิลลิลิตรสกัดที่ความเข้มข้นต่าง ๆ( เมทานอลเพื่อควบคุม ) คือบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีและค่าวัดนี้ที่ 517 nm .ร้อยละของ dpph กระของตัวอย่างแล้วคำนวณ .จักรภพ ( บาท 1 มก. / ดล. ) ถูกใช้เป็นบวกควบคุมF .