After lysis of cells, it is importa

After lysis of cells, it is important to determine the total protein concentration of the sample. Accurate quantitation of the sample will allow you to load the proper amount of protein in each lane. This avoids overloading the lane but still allows adequate detection of the protein of interest. Proper quantitation is also critical when performing semi-quantitative or quantitative Westerns. For accurate determine of relative amounts of protein expression, the same amount of protein must be loaded into each lane.

There are several different methods for quantifying protein concentration in samples. Some (e.g. measurement of nitrogen content or radioactively labeling cells) do not rely upon absorptive properties of the protein sample. While these can be sensitive and accurate assays, the more commonly used assays rely on spectrophotometric determination of protein concentration and these will be the focus of this guide.

Spectrophotometric methods for measuring protein concentration are popular assays. They are generally easy to ease, sensitive and do not rely on the use of hazardous agents. There are several different methods and kits available for employing a spectrophotometer to determine protein concentration. Choice of the best method relies on various factors. A protein quantification assay should be easy to use and not be cost prohibitive. The range of the assay should allow you to accurately quantify all protein samples. Generally a linear response over a broad range is desired. The sensitivity of the assay will determine the lowest level of protein that can be detected. Assays also have different specificities; buffer components, such as detergents, can interfere with the assay.

The different capabilities and limitations of several assays are discussed below.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลัง lysis ของเซลล์ มันเป็นสิ่งสำคัญในการกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนทั้งหมดของตัวอย่าง วิเคราะห์หาปริมาณตัวอย่างถูกต้องจะช่วยให้คุณสามารถโหลดจำนวนโปรตีนในแต่ละเลนเหมาะสม นี้หลีกเลี่ยงช่องทางมากเกินไป แต่ยัง ช่วยให้ตรวจพบโปรตีนน่าสนใจเพียงพอ การวิเคราะห์หาปริมาณเหมาะสมก็สำคัญเมื่อทำ Westerns กึ่งเชิงปริมาณ หรือเชิงปริมาณ สำหรับความถูกต้องกำหนดของจำนวนโปรตีนนิพจน์ ญาติต้องโหลดปริมาณโปรตีนที่เท่ากันในแต่ละเลนมีหลายวิธีที่แตกต่างกันสำหรับ quantifying ความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่าง บางอย่าง (เช่นวัดเนื้อหาไนโตรเจนหรือ radioactively ติดฉลากเซลล์) สามารถถือคุณสมบัติดูดซับของตัวอย่างโปรตีน ขณะนี้จะละเอียดอ่อน และแม่นยำ assays, assays ใช้บ่อยใช้ spectrophotometric กำหนดความเข้มข้นโปรตีน และเหล่านี้จะเป็นจุดเน้นของคู่มือนี้Assays นิยมวิธี spectrophotometric สำหรับวัดความเข้มข้นของโปรตีนได้ พวกเขาโดยทั่วไปง่ายง่าย มีความสำคัญ และสามารถพึ่งการใช้ตัวแทนอันตราย มีหลายวิธีแตกต่างกันและชุดสำหรับใช้เครื่องทดสอบกรดด่างเพื่อกำหนดความเข้มข้นของโปรตีน เลือกวิธีดีที่สุดอาศัยปัจจัยต่าง ๆ การทดสอบนับโปรตีนควรจะง่ายต่อการใช้ และไม่สามารถห้ามปรามต้นทุน ช่วงของการทดสอบจะช่วยให้คุณสามารถกำหนดปริมาณโปรตีนทั้งหมดอย่างถูกต้อง โดยทั่วไปคือต้องการตอบสนองเชิงเส้นเป็นช่วงกว้าง ความไวของการทดสอบจะกำหนดระดับต่ำสุดของโปรตีนที่จะถูกตรวจพบ Assays ยังมี specificities แตกต่างกัน ส่วนประกอบของบัฟเฟอร์ เช่นผงซักฟอก อาจรบกวนการวิเคราะห์ความแตกต่างและข้อจำกัดของหลาย assays อธิบายไว้ด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลังจากที่สลายของเซลล์มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนรวมของกลุ่มตัวอย่าง ปริมาณที่ถูกต้องของตัวอย่างที่จะช่วยให้คุณสามารถโหลดปริมาณที่เหมาะสมของโปรตีนในแต่ละช่องทาง นี้หลีกเลี่ยงการบรรทุกเกินพิกัดเลน แต่ยังช่วยให้การตรวจสอบที่เพียงพอของโปรตีนที่น่าสนใจ ปริมาณที่เหมาะสมนอกจากนี้ยังเป็นสิ่งสำคัญเมื่อการปฏิบัติตะวันตกกึ่งเชิงปริมาณหรือเชิงปริมาณ สำหรับการตรวจสอบความถูกต้องของจำนวนเงินที่ญาติของการแสดงออกของโปรตีนในปริมาณที่เท่ากันของโปรตีนต้องโหลดลงในแต่ละช่องทาง. มีวิธีการที่แตกต่างกันสำหรับปริมาณความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่างเป็น บางคน (เช่นการวัดปริมาณไนโตรเจนหรือเซลล์ติดฉลากกัมมันตภาพรังสี) ไม่ได้ขึ้นอยู่กับคุณสมบัติการดูดซึมของตัวอย่างโปรตีน ในขณะที่เหล่านี้สามารถเป็นชุดตรวจที่มีความสำคัญและถูกต้อง, การตรวจใช้มากกว่าปกติพึ่งพาการกำหนดสเปกของความเข้มข้นของโปรตีนและสิ่งเหล่านี้จะมุ่งเน้นของคู่มือนี้. วิธี Spectrophotometric สำหรับการวัดความเข้มข้นของโปรตีนที่มีการตรวจที่เป็นที่นิยม พวกเขามักจะเพื่อความสะดวกง่ายที่สำคัญและไม่พึ่งพาการใช้สารที่เป็นอันตราย มีวิธีการที่แตกต่างกันและชุดพร้อมใช้งานสำหรับการจ้างสเปกเพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของโปรตีน การเลือกวิธีที่ดีที่สุดขึ้นอยู่กับปัจจัยต่างๆ ทดสอบปริมาณโปรตีนควรจะใช้งานง่ายและไม่ได้รับค่าใช้จ่ายที่ต้องห้าม ช่วงของการทดสอบจะช่วยให้คุณได้อย่างถูกต้องตัวอย่างปริมาณโปรตีนทั้งหมด โดยทั่วไปการตอบสนองเชิงเส้นในช่วงกว้างเป็นที่ต้องการ ความไวของการทดสอบจะเป็นตัวกำหนดระดับต่ำสุดของโปรตีนที่สามารถตรวจพบได้ การตรวจยังมีความจำเพาะที่แตกต่างกัน ส่วนประกอบบัฟเฟอร์เช่นผงซักฟอกสามารถยุ่งเกี่ยวกับการทดสอบ. ความสามารถที่แตกต่างกันและข้อ จำกัด ของการตรวจหลายที่จะกล่าวถึงด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลังจากการสลายของเซลล์ มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะตรวจสอบรวมโปรตีนความเข้มข้นของตัวอย่าง เซลล์ที่ถูกต้องของตัวอย่างจะช่วยให้คุณสามารถ โหลด ปริมาณที่เหมาะสมของโปรตีนในแต่ละเลน นี้เพื่อหลีกเลี่ยงการบรรทุกเกินพิกัด เลน แต่ยังช่วยให้ตรวจจับการเพียงพอของโปรตีนที่น่าสนใจ เซลล์ที่เหมาะสมยังวิกฤต เมื่อแสดงกึ่งปริมาณ หรือ เชิงปริมาณคาวบอย .ที่ถูกต้องตรวจสอบปริมาณสัมพัทธ์ของการแสดงออกของโปรตีน , ปริมาณที่เท่ากันของโปรตีนต้องโหลดในแต่ละเลน

มีหลายวิธีที่แตกต่างกันที่ปริมาณความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่าง บางอย่าง ( เช่นการวัดปริมาณกัมมันตภาพรังสี หรือติดฉลากเซลล์ ) ไม่พึ่งพาคุณสมบัติการดูดซึมของโปรตีนในตัวอย่าง ในขณะที่เหล่านี้สามารถใช้ไวและถูกต้อง ,ที่ใช้บ่อยสามารถพึ่งพาการตัดสินใจ ) ของโปรตีนและเหล่านี้จะถูกโฟกัสของคู่มือนี้

) วิธีการวัดความเข้มข้นของโปรตีนและวิธีการที่นิยม พวกเขามักจะง่ายต่อการง่าย ไว และไม่ต้องพึ่งพาการใช้สารอันตรายมีหลายวิธีที่แตกต่างกันและชุดพร้อมใช้งานสำหรับการใช้วัสดุเพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของโปรตีน เลือกวิธีที่ดีที่สุดต้องอาศัยปัจจัยต่าง ๆ การทดสอบปริมาณโปรตีนที่ควรใช้งานง่ายและไม่ต้องค่าใช้จ่ายต้องห้าม ช่วงของการทดสอบ ควรอนุญาตให้คุณอย่างถูกต้องตัวอย่างปริมาณโปรตีนทั้งหมดโดยทั่วไปเชิงเส้นการตอบสนองช่วงกว้างที่ต้องการ ความไวของการทดสอบจะกำหนดระดับต่ำสุดของโปรตีนที่สามารถตรวจพบ - สามารถมีแตกต่างกัน องค์ประกอบ บัฟเฟอร์ เช่น ผงซักฟอก สามารถแทรกแซงกับ ( . . .

ความสามารถที่แตกต่างกันและข้อจำกัดของหลายวิธีที่จะกล่าวด้านล่าง