ResultsREF and SRPP are Mainly Plan

Results

REF and SRPP are Mainly Plant Proteins from the Same Family

We performed a BLAST on the REF amino-acid sequence (GeneBank accession number P15252), and aligned the sequences of 24 predicted proteins with ClustalW. We then realized a phylogenetic analysis (Figure 1 and Supplementary Figure S1). The results shows quite related proteins, mainly from plant origins. HbREF (Hevb1), HbSRPP (Hevb3) from hevea, and Parthenium argentatum GHS are the only proteins from latex-producing plants and several other proteins are stress-related proteins (SRP). The proteins from Hevea brasiliensis obviously all originate from a common ancestor. From our analysis a lot of genes are predicted to produce short proteins, which are ranging from 117 to 298 amino acids. HbREF, HbSRPP and PaSRPP (GHS) are the only well characterized proteins, and they are all present on rubber particles but with different molecular weights (respectively 14.5, 24, and 26.2 kDa). Recently another homologous stress-related gene was identified in Ipomeas patatas (sweet patato) as a multiple stress responsible gene also called (MuSI) encoding a 27 kDa protein [36]. In addition, a hypothetical REF-like protein from Salaginella moellendorffii (a lycophyte from an ancient vascular plant lineage) was identified and could imply an old evolution of this plant family. Amazingly, another hypothetic partial protein from Amblyomma maculatum (a specie of tick) appeared in the search but is probably not connected and remains to be fully identified. The full alignment of the REF/SRPP proteins from H. brasiliensis is showed in Supplementary Figure 1, and the homology of both REF (P15252) and SRPP (O82803) genes we used in this study is presented in Figure 2A with the sequence consensus of the hevea family. This important homology (>40%) was previously described [8], [13], [29], [37] and their possible role during stress was previously proposed as their mRNA expression increases upon tapping [32], [33].

Additionally, we note here that SRPP clearly differs from REF by a long additionnal C-terminal part. The function of these proteins is still to determine, but surely they are the two major proteins present in Hevea brasiliensis latex as shown in Figure 2B. In order to have a better understanding of their role in latex, we synthesized corresponding coding sequences optimized for E. coli expression and purified the recombinant histidine-tagged proteins to homogeneity.

REF Displays Aggregation Properties

One of the first observation we made working with REF and SRPP, was a spontaneous aggregation of REF in physiological conditions (PBS). As a slight auto-assembling of SRPP was previously reported [8], then we tried to incubate both proteins at 20 µM in PBS, 37°C for 3 h. We observed an instantaneous precipitation of REF whereas SRPP never showed such behavior (Figure 2C). Indeed through all our study SRPP displayed a quite good stability and solubility. Physico-chemical properties of REF and SRPP are presented in Supplementary Table S1. We note that the net charge of SRPP (−6) differs from that of REF (−2) and could take part in the relative stability of SRPP. In addition, hydropathy plots by the Kyte and Doolittle method [38] show two hydrophobic proteins (Supplementary Figure S2), with REF having a negative score (−0.084; Supplementary Table S1) and a peak >2 in the window 90–100. From a rapid secondary structure prediction analysis (PredictProtein, https://www.predictprotein.org, [39]), we expected that both proteins could contain more than 60% of α-helices and also possess a potential transmembrane domain in their N-terminal part. But obviously REF was prone to aggregation.

We tested beta-aggregation propensity by the Tango method (Supplementary Figure S3) [40]. REF presents two important peaks (up to >95%) for aggregation (amino acids around 25–50 and 85–100), whereas two smaller peaks (>70%) are observed with SRPP (amino acid around 25–50 and below 150). The aggregation window around amino acid 150 is only present in SRPP, but the aggregation window 90–100 in REF seems critical for aggregation. We note in SRPP a GVV motif in position 92 that could play the role of beta-sheet breaker.

As aggregation could be the sign of amyloidogenesis, and that amyloid may show a certain resistance to proteases, we compared the degradation of both proteins by proteinase K at 37°C (PK). In Figure 2D, REF aggregates demonstrate quite a good resistance to PK with a resistant main core around 13–14 kDa. SRPP digestion contrarily leads to 2 resistant fragments of 13–14 kDa. We also noted during the course of this experiment, the apparition of higher bands in both protein samples, which could be also attributed to concomitant auto-assembling. This could confirm that SRPP has also potential auto-assembling properties.

We pursued the analysis of these aggregative properties using specific amyloid dyes. REF aggregates are clearly stained by Congo red, with a classical red shifte

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์อ้างอิงและ SRPP เป็นส่วนใหญ่พืชโปรตีนจากครอบครัวเดียวกันเราทำระเบิดในลำดับกรดอะมิโน REF (GeneBank เลขทะเบียน P15252), และจัดลำดับของโปรตีนทำนาย 24 กับ ClustalW เราแล้วรู้วิเคราะห์ phylogenetic (รูปที่ 1 และเสริมรูป S1) ผลลัพธ์แสดงโปรตีนที่เกี่ยวข้องค่อนข้าง ส่วนใหญ่มาจากโรงงานมา HbREF (Hevb1), HbSRPP (Hevb3) จาก hevea, Parthenium argentatum GHS มีโปรตีนเฉพาะจากโรงงานผลิตน้ำยางและโปรตีนอื่น ๆ หลายจะเครียดโปรตีน (SRP) โปรตีนจากทั้งหมดเห็นได้ชัดว่ายางพารามาจากบรรพบุรุษร่วมกัน จากการวิเคราะห์ของเรา จำนวนมากของยีนคาดว่า จะผลิตโปรตีนสั้น ซึ่งมีตั้งแต่ 117 298 กรดอะมิโน HbREF, HbSRPP และ PaSRPP (GHS) มีเพียงกันลักษณะโปรตีน และพวกเขาทั้งหมดปัจจุบัน บนอนุภาคยาง แต่ มีน้ำหนักโมเลกุลที่แตกต่าง (kDa ตามลำดับ 14.5, 24 และ 26.2) เมื่อเร็ว ๆ นี้ อีกเซทจะมีโครโมโซมยีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียดที่พบใน Ipomeas patatas (หวาน patato) เป็นแบบหลายความเครียดชอบยีนเรียกว่า (มัส) เข้ารหัสโปรตีน 27 kDa [36] นอกจากนี้ โปรตีนอ้างอิงเช่นสมมุติจาก Salaginella moellendorffii (lycophyte จากเชื้อสายเป็นพืชโบราณของหลอดเลือด) พบ และสามารถบ่งบอกถึงวิวัฒนาการของพืชตระกูลนี้เก่า อัศจรรย์ โปรตีนบางส่วน hypothetic อื่นจาก maculatum Amblyomma (ชนิดของขีด) ปรากฏในการค้นหา แต่อาจจะไม่มีการเชื่อมต่อ และยังคงจะระบุทั้งหมด จัดเต็มของโปรตีนอ้าง อิง/SRPP จาก H. brasiliensis เป็นแสดงในรูปที่ 1 ส่งเสริมการขาย และ homology REF (P15252) และยีน SRPP (O82803) ที่เราใช้ในการศึกษานี้แสดงในรูปที่ 2A ด้วยมติลำดับของ hevea Homology นี้สำคัญ (> 40%) ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [8], [13], [29], [37] และก่อนหน้านี้ได้เสนอบทบาทของพวกเขาได้ในระหว่างความเครียดเป็นการเพิ่มนิพจน์ของ mRNA เมื่อแตะที่ [32], [33]นอกจากนี้ เราทราบนี่ว่า SRPP ชัดเจนแตกต่างจากการอ้างอิง โดยส่วนยาวปัญหา C-เทอร์มินัล การทำงานของโปรตีนเหล่านี้ยังคงเป็นการ ตรวจสอบ แต่ก็ มีโปรตีนสำคัญสองใน Hevea brasiliensis ยางดังแสดงในรูปที่ 2B เพื่อให้มีความเข้าใจบทบาทของตนในน้ำยาง เราสังเคราะห์สอดคล้องเหมาะสำหรับ E. coli แสดงลำดับการเขียนโค้ด และบริสุทธิ์โปรตีนแท็ก histidine recombinant กับรอยอ้างอิงแสดงคุณสมบัติการรวมหนึ่งในจุดชมแรกที่เราทำทำงานกับ REF และ SRPP ถูกรวมอ้างอิงที่เกิดขึ้นเองในสภาพสรีรวิทยา (PBS) เป็นแบบเล็กน้อยโดยอัตโนมัติประกอบของ SRPP รายงานก่อนหน้านี้ [8], เราพยายามฟักทั้งโปรตีนที่ 20 µM ใน PBS, 37° C เป็นเวลา 3 ชม เราสังเกตเห็นการฝนทันทีอ้างอิงขณะ SRPP ไม่เคยพบพฤติกรรมดังกล่าว (รูปที่ 2C) จริง โดยการเรียนทั้งหมดของเรา SRPP แสดงเสถียรภาพดีและละลาย คุณสมบัติดิออร์ REF และ SRPP แสดงใน S1 ตารางเสริม เราทราบว่า ค่าใช้จ่ายสุทธิของ SRPP (−6) ที่แตกต่างจากการอ้างอิง (−2) และอาจมีส่วนร่วมในความเสถียรสัมพัทธ์ของ SRPP นอกจากนั้น hydropathy แปลง โดยขณะและ Doolittle วิธี [38] ดูสองแบบโปรตีน (เสริมรูป S2), มีการอ้างอิงที่มีการลบคะแนน (−0.084 เสริมตาราง S1) และสูงสุด > 2 ในหน้าต่าง 90 – 100 มีโครงสร้างรองอย่างรวดเร็ววิเคราะห์คาดเดา (PredictProtein, https://www.predictprotein.org, [39]), เราคาดว่า โปรตีนทั้งสองสามารถประกอบด้วยมากกว่า 60% ของα helices และยัง มีโดเมน transmembrane ศักยภาพในส่วนของเทอร์มินัล N แต่เห็นได้ชัดว่า REF เป็นแนวโน้มที่จะรวมเราทดสอบนิสัยชอบรวมเบต้า โดยวิธีแทงโก้ (เสริมรูป S3) [40] อ้างอิงแสดงยอดสำคัญสอง (ถึง > 95%) การรวม (กรดอะมิโนประมาณ 25 – 50 และ 85-100), ในขณะที่สองเล็กลงยอดเขา (> 70%) กับ SRPP (กรดอะมิโนทั่ว 25 – 50 และด้าน ล่าง 150) หน้าต่างรวมกรดอะมิโน 150 รอบอยู่เท่านั้นใน SRPP แต่ดูเหมือนว่าหน้าต่างรวม 90-100 ในอ้างอิงสำคัญสำหรับการรวม เราทราบใน SRPP เป็นรูป GVV ในตำแหน่ง 92 ที่เล่นบทบาทของเบต้า-แผ่นตัดรวมอาจเป็นเครื่องหมายของ amyloidogenesis และ amyloid ที่อาจแสดงต้านการ proteases เราเปรียบเทียบการย่อยสลายของโปรตีนทั้งสอง โดย proteinase K ที่ 37° C (PK) ในรูปแบบ 2D การอ้างอิงผลสาธิตค่อนข้างทนต่อการ PK ด้วยหลักกันทั่ว kDa 13 – 14 ย่อยอาหาร SRPP อุปสงค์สู่ชิ้นส่วนทน 2 ของ 13 – 14 kDa เรายังตั้งข้อสังเกตในช่วงทดลองนี้ apparition ของวงสูงในทั้งสองตัวอย่างโปรตีน ซึ่งอาจเกิดจากยังการอัตโนมัติมั่นใจประกอบ นี้สามารถยืนยันได้ว่า SRPP มีศักยภาพประกอบอัตโนมัติคุณสมบัติเราติดตามการวิเคราะห์ของ aggregative ใช้เฉพาะ amyloid สี ผลอ้างอิงชัดเจนมีสี โดยสีแดงคองโกกับ shifte สีแดงคลาสสิก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลการค้นหาREF และ SRPP ส่วนใหญ่จะเป็นพืชโปรตีนที่ได้จากครอบครัวเดียวกันเราดำเนินการระเบิดบน REF กรดอะมิโนลำดับ (GeneBank จำนวนภาคยานุวัติ P15252) และสอดคล้องลำดับที่ 24 ที่คาดการณ์โปรตีนกับ ClustalW จากนั้นเราจะตระหนักถึงการวิเคราะห์สายวิวัฒนาการ (รูปที่ 1 และรูปที่เสริม S1) ผลการศึกษาพบโปรตีนที่เกี่ยวข้องมากส่วนใหญ่มาจากต้นกำเนิดพืช HbREF (Hevb1) HbSRPP (Hevb3) จากยางพาราและ Parthenium argentatum GHS เป็นโปรตีนจากพืชน้ำยางผลิตและโปรตีนอื่น ๆ อีกหลายเป็นโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียด (SRP) โปรตีนจากยางพาราอย่างเห็นได้ชัดทั้งหมดมาจากบรรพบุรุษร่วมกัน จากการวิเคราะห์ของเราเป็นจำนวนมากของยีนที่คาดว่าจะผลิตโปรตีนสั้นซึ่งมีกรดอะมิโนตั้งแต่ 117-298 HbREF, HbSRPP และ PaSRPP (GHS) เป็นโปรตีนเพียงลักษณะดีและพวกเขาที่มีอยู่ทั้งหมดในอนุภาคยาง แต่ด้วยน้ำหนักที่แตกต่างในระดับโมเลกุล (ตามลำดับ 14.5, 24 และ 26.2 กิโลดาลตัน) เมื่อเร็ว ๆ นี้อีกคล้ายคลึงกันของยีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียดที่ถูกระบุใน Ipomeas patatas (patato หวาน) เป็นความเครียดยีนที่รับผิดชอบในหลาย ๆ ที่เรียกว่า (Musi) การเข้ารหัส 27 kDa โปรตีน [36] นอกจากนี้ยังมีโปรตีน REF เหมือนสมมุติจาก Salaginella moellendorffii (ก lycophyte จากเชื้อสายของพืชสีเขียวโบราณ) ถูกระบุและสามารถบ่งบอกถึงวิวัฒนาการเก่าพืชตระกูลนี้ ที่น่าอัศจรรย์ใจอีก hypothetic โปรตีนบางส่วนจาก Amblyomma maculatum (เป็นสายพันธุ์ของเห็บ) ปรากฏในการค้นหา แต่อาจจะไม่ได้เชื่อมต่อและยังคงได้รับการระบุอย่างเต็มที่ แนวร่วมเต็มรูปแบบของโปรตีน REF / SRPP จากเอชหลอกลวงจะแสดงให้เห็นในรูปที่ 1 เสริมและคล้ายคลึงกันของทั้งสอง REF (P15252) และ SRPP (O82803) ยีนที่เราใช้ในการศึกษาครั้งนี้จะนำเสนอในรูปที่ 2A กับฉันทามติลำดับของ ครอบครัว Hevea ที่คล้ายคลึงกันนี้ที่สำคัญ (> 40%) ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [8] [13], [29], [37] และบทบาทที่เป็นไปได้ของพวกเขาในช่วงความเครียดถูกเสนอก่อนหน้านี้เป็น mRNA แสดงออกเพิ่มขึ้นของพวกเขาเมื่อแตะ [32], [33] นอกจากนี้เราทราบที่นี่ที่ SRPP อย่างชัดเจนแตกต่างจาก REF โดยส่วน C-ขั้ว additionnal ยาว การทำงานของโปรตีนเหล่านี้ยังคงอยู่ในการตรวจสอบ แต่แน่นอนพวกเขาเป็นสองโปรตีนที่สำคัญในปัจจุบันยางพาราน้ำยางดังแสดงในรูป 2B เพื่อให้มีความรู้ความเข้าใจถึงบทบาทของตนในน้ำเราสังเคราะห์สอดคล้องเข้ารหัสลำดับที่เหมาะสำหรับการแสดงออก E. coli และบริสุทธิ์ recombinant โปรตีนฮิสติดีนติดแท็กจะเป็นเนื้อเดียวกัน. REF แสดงการรวมคุณสมบัติหนึ่งที่สังเกตแรกที่เราทำให้การทำงานร่วมกับกรรมการและ SRPP เป็นธรรมชาติของการรวม REF ในสภาพทางสรีรวิทยา (พีบีเอส) ในฐานะที่เป็นเล็กน้อยอัตโนมัติประกอบ SRPP มีรายงานก่อนหน้านี้ [8] จากนั้นเราพยายามที่จะบ่มเพาะทั้งโปรตีนที่ 20 ไมโครเมตรพีบีเอส 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 ชั่วโมง เราสังเกตการเร่งรัดรวดเร็วของ REF ขณะ SRPP ไม่เคยแสดงให้เห็นว่าพฤติกรรมดังกล่าว (รูป 2C) อันที่จริงผ่านทุกการศึกษาของเรา SRPP แสดงเสถียรภาพที่ดีมากและสามารถในการละลาย คุณสมบัติทางกายภาพและทางเคมีของ REF และ SRPP ถูกแสดงไว้ในตาราง S1 เสริม เราทราบว่าค่าใช้จ่ายสุทธิ SRPP (-6) แตกต่างจากที่ REF (-2) และสามารถมีส่วนร่วมในความมั่นคงของ SRPP นอกจากนี้แปลง hydropathy โดย Kyte และลิตเติ้ลวิธีการ [38] แสดงโปรตีนสองชนิดชอบน้ำ (เสริมรูป S2) กับ REF มีคะแนนลบ (-0.084; เสริมตาราง S1) และสูงสุด> 2 ในหน้าต่าง 90-100 จากการวิเคราะห์โครงสร้างการพยากรณ์อย่างรวดเร็วรอง (PredictProtein, https://www.predictprotein.org, [39]) เราคาดว่าทั้งสองอาจมีโปรตีนมากกว่า 60% ของαเอนริเก้และยังมีโดเมนรนศักยภาพของพวกเขายังไม่มี ส่วน -terminal แต่เห็นได้ชัด REF มีแนวโน้มที่จะรวม. เราได้ทดสอบความเอนเอียงเบต้ารวมโดยวิธีแทงโก้ (เสริมรูป S3) [40] REF นำเสนอสองยอดเขาที่สำคัญ (ถึง> 95%) สำหรับการรวม (กรดอะมิโนรอบ 25-50 และ 85-100) ในขณะที่สองยอดขนาดเล็ก (> 70%) มีการปฏิบัติกับ SRPP (กรดอะมิโนรอบ 25-50 และต่ำกว่า 150 ) หน้าต่างรวมทั่วกรดอะมิโน 150 เป็นเพียงอยู่ใน SRPP แต่หน้าต่าง 90-100 รวมในการอ้างอิงดูเหมือนสำคัญสำหรับการรวมตัว เราทราบใน SRPP แม่ลาย Gvv ในตำแหน่งที่ 92 ที่สามารถเล่นบทบาทของเบรกเกอร์เบต้าแผ่น. ในฐานะที่เป็นการรวมอาจเป็นสัญญาณของ amyloidogenesis และ amyloid ที่อาจแสดงความต้านทานบางอย่างที่จะโปรตีเอสเราเมื่อเทียบกับการย่อยสลายของโปรตีนทั้งสองโดยโปร K ที่ 37 ° C (PK) ในรูปแบบ 2 มิติมวลรวม REF แสดงให้เห็นค่อนข้างต้านทานที่ดีใน PK กับแกนหลักทนรอบ 13-14 กิโลดาลตัน SRPP ย่อยอาหารตรงกันข้ามจะนำไปสู่ ​​2 เศษทน 13-14 กิโลดาลตัน นอกจากนี้เรายังตั้งข้อสังเกตในช่วงของการทดลองนี้ปรากฏตัวของวงดนตรีที่สูงขึ้นทั้งในตัวอย่างโปรตีนซึ่งอาจจะประกอบไปด้วยกันยังอัตโนมัติประกอบ ซึ่งอาจยืนยันว่า SRPP ยังมีคุณสมบัติอัตโนมัติประกอบที่มีศักยภาพ. เราไล่ตามการวิเคราะห์ของคุณสมบัติ aggregative เหล่านี้โดยใช้สีย้อม amyloid ที่เฉพาะเจาะจง มวล REF เปื้อนอย่างชัดเจนโดยคองโกสีแดงกับสีแดง shifte คลาสสิก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลลัพธ์Ref และ srpp ส่วนใหญ่โปรตีนจากพืชตระกูลเดียวกันเราได้ทำการระเบิดบนอ้างอิงกรดอะมิโนลำดับ ( genebank เข้าเบอร์ p15252 ) และชิดลำดับ 24 คาดการณ์กับโปรตีน clustalw . เราก็พบว่า การวิเคราะห์ phylogenetic ( รูปที่ 1 และรูปเพิ่มเติม S1 ) ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าโปรตีนค่อนข้างที่เกี่ยวข้องส่วนใหญ่มาจากต้นกำเนิดของพืช hbref ( hevb1 ) hbsrpp ( hevb3 ) จากยางพารา และ parthenium argentatum GHS เป็นโปรตีนจากน้ำยางผลิตพืชและโปรตีนอื่น ๆที่เกี่ยวข้องกับความเครียดหลายโปรตีน ( SRP ) โปรตีนจากยางพารา เห็นได้ชัดว่าทั้งหมดมาจากบรรพบุรุษ จากการวิเคราะห์ของเรามากของยีนที่คาดว่าจะผลิตโปรตีนสั้น ซึ่งมีตั้งแต่ 117 และกรดอะมิโน hbref hbsrpp pasrpp ( GHS ) , และเป็นเพียงดีลักษณะโปรตีน , และพวกเขาทั้งหมดในปัจจุบันบนอนุภาคยาง แต่ด้วยน้ำหนักโมเลกุลที่แตกต่างกัน ( คือ 14.5 , 24 , และ 26.2 kDa ) เมื่อเร็ว ๆนี้อีกโฮโมโลกัสยีนเครียดถูกระบุใน ipomeas มันฝรั่ง ( มันฝรั่งหวาน ) เป็นความรับผิดชอบของยีนหลายที่เรียกว่า ( ใ ) การเข้ารหัส 27 kDa โปรตีน [ 36 ] นอกจากนี้ กรรมการสมมุติเหมือนโปรตีนจาก salaginella moellendorffii ( ไลโคไฟตาจากโบราณพืชสีเขียว Lineage ) ถูกระบุและสามารถบ่งบอกถึงวิวัฒนาการเก่าของพืชนี้ในครอบครัว อย่างน่าอัศจรรย์ อีก hypothetic ย่อยโปรตีนจาก amblyomma maculatum ( พันธุ์ของเห็บ ) ที่ปรากฏในการค้นหา แต่อาจจะไม่ได้เชื่อมต่อและยังคงที่จะระบุได้อย่างเต็มที่ ตำแหน่งเต็มของ ref / srpp โปรตีนจาก H . ธรรมมีในรูปเสริม 1 และเป็นทั้งกรรมการ ( p15252 ) และ srpp ( o82803 ) ยีนที่เราใช้ในการศึกษา คือ แสดงในรูปที่ 2A กับลำดับฉันทามติของครอบครัวยางพารา . ตัวนี้สำคัญมาก ( 40% ) ได้อธิบายไว้ก่อนหน้า [ 8 ] , [ 13 ] [ 29 ] [ 37 ] และเป็นไปได้ของพวกเขาบทบาทในความเครียดก่อนหน้านี้เสนอเป็น mRNA แสดงออกเพิ่มขึ้นเมื่อแตะ [ 32 ] [ 33 ]นอกจากนี้ เราทราบมาว่า srpp ชัดเจนแตกต่างจากกรรมการโดย additionnal ยาวซึ่งเป็นส่วนหนึ่ง การทำงานของโปรตีนเหล่านี้ก็เพื่อตรวจสอบ แต่แน่นอนพวกเขาเป็นสองหลัก โปรตีนที่มีอยู่ในยางพารา น้ำยาง ดังแสดงในรูปที่ 2B เพื่อให้มีความเข้าใจในบทบาทของตนในน้ำยางเราสังเคราะห์ที่เหมาะสำหรับรหัสลำดับเชื้อ E . coli การแสดงออกและบริสุทธิ์เมื่อรีคอมบิแนนท์โปรตีนที่ติดแท็กวิธีการ .อ้างอิงแสดงคุณสมบัติรวมหนึ่งในคนแรกที่สังเกตเราได้ทำงานกับ Ref และ srpp ถูกรวมยังอ้างอิงในเงื่อนไขทางสรีรวิทยา ( PBS ) เป็นเล็กน้อยของรถยนต์ประกอบ srpp ก่อนหน้านี้รายงาน [ 8 ] แล้วเราพยายามบ่มเพาะทั้งโปรตีนที่ 20 µ M ใน PBS 37 ° C เป็นเวลา 3 ชั่วโมง เราสังเกตการตกตะกอนของ Ref ทันทีในขณะที่ srpp ไม่เคยแสดงพฤติกรรมอย่างนี้ ( รูปที่ 2 ) แท้ผ่านการศึกษาของเราทั้งหมด srpp แสดงความมั่นคงค่อนข้างดีและการละลาย . physico สมบัติทางเคมีของ Ref และ srpp นำเสนอตารางเสริม S1 . เราทราบว่าค่าใช้จ่ายสุทธิของ srpp ( − 6 ) ที่แตกต่างจากที่ของกรรมการ ( − 2 ) และจะใช้เวลาส่วนหนึ่งในเสถียรภาพสัมพัทธ์ของ srpp . นอกจากนี้ hydropathy แปลงโดยวิธี [ 38 ] ไคท์ และ ดูลิตเติลโชว์ 2 ) โปรตีน ( เพิ่มเติมรูป S2 ) กับตู้เย็นมีคะแนนติดลบ ( − 0.084 ; เสริมตาราง S1 ) และสูงสุด 2 ในหน้าต่าง 90 – 100 จากโครงสร้างอย่างรวดเร็วการพยากรณ์การวิเคราะห์ ( predictprotein https://www.predictprotein.org , [ 39 ] ) เราคาดว่าทั้งโปรตีนประกอบด้วยมากกว่า 60 % ของ helices แอลฟา และมีศักยภาพในส่วนของโดเมนยาวของกรดอะมิโน . แต่เห็นได้ชัดว่ากรรมการเขามีแนวโน้มที่จะรวม .เราทดสอบโดยวิธีของความโน้มเอียงเบต้า แทงโก้ ( เพิ่มเติมรูป S3 ) [ 40 ] อ้างอิงแสดงสองยอดที่สำคัญ ( ถึง > 95% ) สำหรับการ ( กรดอะมิโนประมาณ 25 – 50 และ 85 - 100 ) ส่วนสองยอดขนาดเล็ก ( > 70% ) และ srpp ( กรดอะมิโนประมาณ 25 – 50 และต่ำกว่า 150 ) หน้าต่างรวมประมาณ 150 เป็นเพียงกรดอะมิโนที่มีอยู่ใน srpp แต่รวมหน้าต่าง 90 – 100 ใน ref ดูเหมือนว่าวิกฤตสำหรับการรวมกัน เราทราบใน srpp เป็น gvv แม่ลายในตำแหน่ง 92 ที่สามารถเล่นบทบาทของเบต้าแผ่นเบรกเกอร์โดยรวม อาจเป็นสัญญาณของ amyloidogenesis และที่สนใจอาจแสดงต้านทานบางอย่างทางเราเปรียบเทียบการย่อยสลายของทั้งโปรตีนจากโปรตีนที่ 37 ° C K ( PK ) ในรูป 2D Ref มวลรวมแสดงค่อนข้างดีต้านทานการ PK กับป้องกันหลักรอบ 13 – 14 กิโลดาลตัน srpp การย่อยอาหารอุปสงค์ นำไปสู่ 2 ชิ้นส่วนป้องกัน 13 – 14 กิโลดาลตัน เรายังได้กล่าวในระหว่างการทดลองนี้ วิญญาณของแถบโปรตีนที่สูงทั้งในตัวอย่างซึ่งอาจจะเกิดจากการเกิดรถยนต์ประกอบ นี้จะยืนยันว่า srpp ยังมีศักยภาพโดยอัตโนมัติประกอบคุณสมบัติเราติดตามการวิเคราะห์คุณสมบัติ aggregative เหล่านี้ใช้เฉพาะแอมีลอยด์สีย้อม อ้างอิงกลุ่มอย่างชัดเจน คราบคองโกแดง