Preparation of platelet-poor plasma

Preparation of platelet-poor plasma Platelet-poor plasma was obtained using three different centrifugation protocols (Table 1). Each centrifugation protocol included two steps. The initial step for protocol 1 consisted of two centrifugations at 5000 × g for five minutes at room temperature. After the first centrifugation at 5000 × g for five minutes, the supernatant was transferred into a new tube, leaving 200 µL above the cell pellet, and was centrifuged again for five minutes at 5000 × g. In protocol 2, platelet-poor plasma was obtained by an initial single centrifugation at 5000 × g for 15 minutes, and in protocol 3 by centrifugation at 1500 × g for 15 minutes. After centrifugation, the supernatant was transferred into a new tube, while discarding the last 500 µL at the base of the centrifuged tube. Aliquots of 500 µL were stored at −80°C. After thawing quickly at 37°C, a microparticle pellet was obtained from the platelet-poor plasma by a second centrifugation step at 17,000 × g for either 20 or two minutes. Subsequently, the supernatant was discarded and the microparticle pellet was reconstituted in Annexin V buffer (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) at 4°C. All buffers were sterile-filtered with a 0.2 µm filter (Whatman, Piscataway, NJ).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เตรียมของพลาสม่าพลาสม่าเกล็ดเลือดต่ำเกล็ดเลือดต่ำได้รับโดยใช้โพรโทคออื่น centrifugation สาม (ตาราง 1) แต่ละโพรโทคอ centrifugation รวมสองขั้นตอน ขั้นตอนการเริ่มต้นสำหรับโพรโทคอล 1 ของ centrifugations สองที่ 5000 × g ประกอบด้วยห้านาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจาก centrifugation แรกที่ 5000 × g 5 นาที supernatant ถูกโอนเข้าหลอดใหม่ ปล่อย 200 µL ข้างเม็ดเซลล์ และถูก centrifuged อีกห้านาทีที่ 5000 × g ในโพรโทคอล 2 พลาสมาเกล็ดเลือดต่ำได้รับ โดยการเริ่มต้นเดี่ยว centrifugation ที่ 5000 × g 15 นาที และโพรโทคอล 3 โดย centrifugation ที่ 1500 × g 15 นาที หลังจาก centrifugation, supernatant มีการโอนย้ายเป็นหลอดใหม่ ในขณะที่ละทิ้ง µL 500 ล่าสุดที่ฐานของท่อ centrifuged Aliquots 500 µL ถูกเก็บไว้ที่ −80 องศาเซลเซียส หลัง thawing อย่างรวดเร็วที่ 37° C เม็ด microparticle ถูกรับจากพลาสมาเกล็ดเลือดต่ำ โดยขั้นตอน centrifugation 2 ที่ 17,000 × g 20 หรือ 2 นาที ต่อมา supernatant ถูกละทิ้ง และเม็ด microparticle ถูก reconstituted ในบัฟเฟอร์ Annexin V (Becton สัน แฟรงคลินทะเลสาบ NJ) ที่ 4 องศาเซลเซียส ข้อมูลทั้งหมดถูกกอซกรองกับตัวกรอง 0.2 µm (Whatman ปิสกาตาเวย์ NJ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เตรียมความพร้อมของพลาสม่าของเกล็ดเลือดที่ไม่ดีพลาสม่าเกล็ดเลือดที่ไม่ดีที่ได้รับใช้สามโปรโตคอลการหมุนเหวี่ยงที่แตกต่างกัน (ตารางที่ 1) แต่ละโปรโตคอลปั่นรวมสองขั้นตอน ขั้นตอนเริ่มต้นสำหรับโปรโตคอล 1 ประกอบด้วยสอง centrifugations ที่ 5000 ×กรัมห้านาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากที่ปั่นเป็นครั้งแรกที่ 5000 ×กรัมสำหรับห้านาทีใสถูกย้ายลงในหลอดใหม่ออก 200 ไมโครลิตรเหนือตะกอนเซลล์และได้รับการหมุนเหวี่ยงอีกครั้งสำหรับห้านาทีที่ 5000 ×กรัม ใน 2 โปรโตคอลพลาสม่าของเกล็ดเลือดที่ไม่ดีที่ได้รับโดยการหมุนเหวี่ยงเดียวเริ่มต้นที่ 5000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีและในโปรโตคอล 3 โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 1500 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาที หลังจากที่หมุนเหวี่ยงใสถูกย้ายลงในหลอดใหม่ในขณะที่ทิ้งสุดท้าย 500 ไมโครลิตรที่ฐานของหลอดหมุนเหวี่ยงที่ aliquots 500 ไมโครลิตรถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส หลังจากที่ละลายได้อย่างรวดเร็วที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเม็ด microparticle ที่ได้รับจากพลาสม่าของเกล็ดเลือดที่ไม่ดีโดยขั้นตอนการหมุนเหวี่ยงที่สองที่ 17,000 ×กรัมทั้ง 20 หรือสองนาที ต่อจากนั้นใสที่ถูกทิ้งและเม็ด microparticle ที่ถูกสร้างขึ้นใน Annexin บัฟเฟอร์ V (Becton ดิกคินสัน, แฟรงคลินเลคส์, นิวเจอร์ซีย์) ที่ 4 ° C บัฟเฟอร์ทั้งหมดถูกกรองผ่านการฆ่าเชื้อด้วย 0.2 ไมครอนกรอง (Whatman พิสแคต, นิวเจอร์ซีย์)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเตรียมเกล็ดเลือดจนน่าสงสารพลาสมาพลาสมาเกล็ดเลือดได้โดยใช้โปรโตคอลที่แตกต่างกัน ดังนี้ ( ตารางที่ 1 ) แต่ละโปรโตคอล ปั่นรวมสองขั้นตอน ขั้นตอนแรกสำหรับขั้นตอนที่ 1 ประกอบด้วยสอง centrifugations 5000 × G สำหรับ 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากปั่นครั้งแรกที่ 5000 × G สำหรับห้านาทีและน่าน ถูกส่งตัวไปเป็นหลอดใหม่ เหลือ 200 µผมเหนือระดับเซลล์เม็ด และอีกห้านาทีที่ 5 ×กรัม ในขั้นตอนที่ 2 ผู้ป่วยยากจนพลาสมาได้โดยปั่นเดี่ยวเริ่มต้นที่ 5000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาที และในขั้นตอนที่ 3 โดยปั่น 1500 ×กรัม เป็นเวลา 15 นาที . หลังการปั่นเหวี่ยง , น่าน ถูกส่งตัวไปเป็นหลอดใหม่ในขณะที่ทิ้งสุดท้าย 500 µ L ที่ฐานของระดับท่อ เฉยๆของ 500 µลิตรที่อุณหภูมิ 80 องศา บริษัท เวสเทิร์น หลังการละลายอย่างรวดเร็วที่อุณหภูมิ 37 องศา C , microparticle เม็ดได้จากพลาสมาเกล็ดเลือดจนก้าวปั่นที่สองที่ 17000 × G สำหรับทั้ง 20 หรือสองนาที ต่อมาและน่านถูกทิ้งและ microparticle เม็ดสามารถของเซลล์ V ในบัฟเฟอร์ ( เบคตอนดิกคินสัน Franklin Lakes , NJ ) ที่อุณหภูมิ 4 องศา ทั้งหมดบัฟเฟอร์เป็นหมันกรองด้วยตัวกรอง ( whatman µ 0.2 M ,
Piscataway , NJ )