2. Materials and Methods2.1. Genomi

2. Materials and Methods
2.1. Genomic DNA extraction
Samples of blood collected from 124 sheep of the Lori sheep breed from Lorestan province of Iran were
studied. Genomic DNA was extracted by salting out method according to Miller et al. [11] with minor
modifications.
2.2. PCR-RFLP analysis
DNA primers described by Freking [12] were used to PCR amplification: forward primer 5´- TGA AAA
CGT GAA CCC AGA AGC - 3´ and reverse primer 5´ - GTC CTA AAT AGG TCC TCT CG - 3´. The PCR
reaction were carried out in 15 μl volume containing 50 ng DNA, 1 U Taq polymerase (Fermentas), 1 x PCR
buffer (NH4) 2 SO2 ,2 mM MgCl2 , 200 μM dNTP, 2 μM of each primer. The PCR reaction was optimized in
the thermocycler MJ Mini (Biorad) .The following amplification parameters were applied: 95 oC for 4
minutes followed by 35 cycles: 94 °C for 20 seconds, 58 °C for 30 seconds, 72 °C for 1 min. The PCR
products of 426 bp were digested with 10 units of the FaqI (BsmFI) restriction enzyme (Fermentas).
Restriction digestion fragments were loaaded on 2 % agarose gel (Invitrogen) containing ethidium bromide and the gel were analyzed in the UV rays.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. genomic DNA สกัดตัวอย่างเลือดที่เก็บจากแกะ 124 ของสายพันธุ์แกะ Lori จากจังหวัดอิหร่าน Lorestan ดีศึกษา Genomic DNA ถูกสกัด โดยมารีซอลทิงออกวิธีตามมิลเลอร์ et al. [11] ด้วยวิชารองปรับเปลี่ยน2.2. PCR-RFLP วิเคราะห์ใช้ในการขยาย PCR ดีเอ็นเอไพรเมอร์โดย Freking [12]: ส่งรองพื้น 5´ TGA AAAเซ CGT เฒ่าซีซีซีนี้อยู่ - 3´ และ 3´ 5´ - GTC CTA AAT AGG TCC TCT CG - กลับพื้น PCRปฏิกิริยาได้ดำเนินการใน 15 μl ไดรฟ์ข้อมูล 50 ng DNA, 1 U Taq พอลิเมอเรส (Fermentas), 1 x PCRบัฟเฟอร์ (NH4) 2 SO2, 2 mM MgCl2, 200 μM dNTP, μM 2 แต่ละพื้น ปฏิกิริยา PCR ถูกปรับในthermocycler MJ มินิ (Biorad)ใช้พารามิเตอร์การขยายต่อไปนี้: 95 องศาเซลเซียส 4นาทีตามรอบ 35:94 ° C 20 วินาที 58 ° C เวลา 30 วินาที 72 ° C ใน 1 นาที PCRผลิตภัณฑ์ของ 426 bp ถูกย่อย ด้วยเอนไซม์จำกัดของ FaqI (BsmFI) (Fermentas) 10 หน่วยงานจำกัดย่อยอาหารบางส่วนของถูก loaaded ในเจ 2% agarose (Invitrogen) ประกอบด้วยโบรไมด์ ethidium และเจถูกวิเคราะห์ในรังสี UV

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . การสกัดดีเอ็นเอจากตัวอย่างเลือดที่เก็บจาก
124 แกะของลอรี่แกะสายพันธุ์จากจังหวัดของอิหร่าน iran . kgm คือ
) จีโนมดีเอ็นเอโดยวิธี salting out ตามมิลเลอร์ et al . [ 11 ] กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย
.
2.2 . การวิเคราะห์ดีเอ็นเอไพรเมอร์ระบุว่า
freking [ 12 ] ใช้ PCR เพื่อขยาย : forward primer 5 ใหม่ - TGA AAA
CGT GAA CCC AGA อาซาฮี - 3 ใหม่ และย้อนกลับ primer 5 ใหม่ - GTC CTA AAT agg TCC TCT CG - 3 ใหม่ . ปฏิกิริยา pcr
ทดลอง 15 μ L ปริมาณบรรจุ 50 นาโนดีเอ็นเอ 1 u แท็ค Polymerase ( fermentas ) , 1 x )
บัฟเฟอร์ ( NH4 ) 2 SO2 , 2 มม. ชุด 200 μ M dntp 2 μ M แต่ละรองพื้น การตรวจปฏิกิริยาเทอร์มอไซเคล ์เหมาะใน
MJ Mini ( biorad ) ต่อไปนี้ ( พารามิเตอร์ที่ใช้ OC 4
: 95นาทีตามด้วย 35 รอบ : 94 ° C เป็นเวลา 20 วินาที , 58 องศา C เป็นเวลา 30 วินาที , 1 นาที 72 ° C )
ผลิตภัณฑ์ 426 BP ถูกย่อยด้วย 10 หน่วยของ faqi ( bsmfi ) เอนไซม์จำกัด ( fermentas )
+ การย่อยเศษเป็น loaaded 2 % เจล ( Invitrogen ) ทิเดียมโบรไมด์เจลที่มีและวิเคราะห์รังสี UV .