2.3.3. Superoxide anion scavenging

2.3.3. Superoxide anion scavenging activity
Superoxide anion scavenging activity of the T. indica extract was
determined according to Parejo et al. (2002), by measuring the superoxide
radicals generated in vitro by the xanthine/xanthine oxidase system.
The reaction mixture, at a final volume of 1 ml, containing 50 mmol/l
sodium phosphate buffer (pH 7.5), EDTA (0.05 mmol/l), xanthine
(0.2 mmol/l), NBT (1 mmol/l), and 0.1 ml of crude extract at different
concentrations was incubated at 25 C, for 10 min. The reaction was
initiated by the addition of xanthine oxidase (1 U/ll) and carried out at
25 C, for 20 min. After this period, the reaction was stopped by
the addition of CuCl (50 lmol/l), and absorbance was measured at
560 nm. The results are expressed as the percentage inhibition of the
NBT reduction in relation to the reaction mixture without sample (buffer
only). Butylated hydroxytoluene (BHT, 1 mg/dl) was used as a positive
control.
2.4. Experimental animals and diets
Twenty-four Golden Syrian male hamsters weighing between 100
and 130 g were randomly divided into four groups, and acclimatized
for two weeks in colony cages (six hamsters per cage), at 25 ± 2 C and
under a 12-h light:dark cycle. Group 1 was fed with a standard diet
(normal control), group 2 was fed with a standard diet and tamarind
extract, group 3 was fed with a standard diet plus 1% cholesterol
(hypercholesterolemic control), and group 4 was fed with a standard diet
plus 1% cholesterol and tamarind extract. Food and liquid intakes were
monitored daily in all groups. The water in groups 2 and 4 was replaced by
5% tamarind extract after complete resuspension in water, for a period of
10 weeks.
The dose of T. indica used in this study (5%) was chosen based on a
concentration–response study, which determined the antioxidant activity
of the extract regarding the lipid peroxidation process. Also, 5% concentration
is the concentration usually present in juice consumed by the
human population.
2.5. Measurement of body weight and biochemical parameters
Animals were anesthetized using a CO2 chamber and the blood
samples obtained by cardiac puncture; the body weight of each hamster
was determined prior and after treatment. AST, ALT, glucose, serum total
cholesterol, high-density lipoprotein (HDL) cholesterol, and triglyceride
levels from each animal were determined in triplicate using an Abbott VP
Super System Autoanalyser (Abbott, Irving, TX) in conjunction with
commercial enzymatic kits (Labtest, Montes Claros, MG, Brazil). Measurement
of HDL cholesterol in serum was carried out after precipitation
of apo-B containing lipoproteins, with dextran sulfate and magnesium
chloride (Warnick et al., 1982). Results were expressed as non-HDL
(VLDL + IDL + LDL) cholesterol instead of LDL cholesterol, because
the Friedewald equation (Friedewald et al., 1972) is not applicable to
hamsters. Thus, the concentration of lipoprotein (non-HDL) cholesterol
was calculated by subtracting HDL cholesterol concentrations from total
serum cholesterol.
2.6. Preparation of tissue samples
Livers were rapidly removed, washed in cold 0.15 mol/l NaCl solution,
blotted onto filter paper, weighed and homogenized in 9 ml ice-cold
potassium phosphate buffer. After homogenization in Potter–Elvehjen, the
homogenates were centrifuged at 13,000g for 4 min at 4 C and the
supernatant assayed.
2.7. Determination of TBARS levels in serum and liver
The levels of TBARS were determined as described above (Section
2.3.1) in hamster sera and liver homogenates.
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3.3. ซูเปอร์ออกไซด์ไอออน scavenging กิจกรรมคือซูเปอร์ออกไซด์ไอออน scavenging กิจกรรมของสารสกัด indica ต.กำหนดตาม Parejo et al. (2002), วัดที่ซูเปอร์ออกไซด์อนุมูลสร้างขึ้นในหลอดทดลอง โดยระบบ xanthine/xanthine oxidaseส่วนผสมของปฏิกิริยา เป็นเสียงสุดท้ายของ 1 ml ประกอบด้วย 50 มิลลิโมล/ลิตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.5), EDTA (0.05 mmol/l), xanthine(0.2 โมล/ลิตร), NBT (1 mmol/l), และ 0.1 มล.น้ำมันดิบแยกที่แตกต่างกันความเข้มข้น incubated ที่ 25 C, 10 นาที ปฏิกิริยาการเริ่มต้น โดยการเพิ่มของ xanthine oxidase (1 U ll) และดำเนินการที่25 C, 20 นาที หลังจากช่วงเวลานี้ หยุดปฏิกิริยาโดยนอกเหนือจาก CuCl (50 lmol/l), และค่าที่วัดได้560 nm ผลลัพธ์จะแสดงเป็นการยับยั้งเปอร์เซ็นต์ของการNBT ลดสัมพันธ์กับส่วนผสมของปฏิกิริยาโดยตัวอย่าง (บัฟเฟอร์เท่านั้น) ใช้ butylated hydroxytoluene (บาท 1 mg/dl) เป็นบวกการควบคุม2.4. ทดลองสัตว์และอาหารยี่สิบสี่ทองซีเรียชายแฮมสเตอร์น้ำหนักระหว่าง 100และ 130 กรัมถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสี่กลุ่ม และการปรับสภาพสำหรับสองสัปดาห์ในอาณานิคม (หกแฮมสเตอร์ต่อกรง), กรงที่ 25 ± 2 C และภายใต้วงจรแสง 12 h: มืด กลุ่ม 1 ถูกเลี้ยงกับอาหารมาตรฐาน(ควบคุม), กลุ่ม 2 ถูกเลี้ยง ด้วยอาหารมาตรฐานและมะขามสารสกัดจาก กลุ่ม 3 ถูกเลี้ยง ด้วยอาหารมาตรฐานบวก 1% คอเลสเตอร(hypercholesterolemic control), และกลุ่ม 4 ถูกเลี้ยงกับอาหารมาตรฐานบวก 1% สารสกัดจากมะขามและคอเลสเตอร บริโภคอาหารและของเหลวได้ตรวจสอบทุกวันในกลุ่มทั้งหมด น้ำในกลุ่ม 2 และ 4 ถูกแทนที่ด้วยสารสกัดจากมะขาม 5% หลังจากสมบูรณ์ resuspension ตะกอนในน้ำ ระยะเวลา10 สัปดาห์เลือกปริมาณของ T. indica ที่ใช้ในการศึกษานี้ (5%) ตามศึกษาความเข้มข้น – การตอบสนอง ซึ่งกำหนดกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดเกี่ยวกับกระบวนการ peroxidation ของไขมัน นอกจากนี้ ความเข้มข้น 5%คือความเข้มข้นมักจะอยู่ในน้ำผลไม้ที่บริโภคโดยการประชากรมนุษย์2.5 การวัดน้ำหนักและค่าพารามิเตอร์ทางชีวเคมีสัตว์ถูกด้วยใช้ห้อง CO2 และเลือดตัวอย่างที่ได้รับ โดยเจาะหัวใจ น้ำหนักตัวของหนูแฮมสเตอร์แต่ละพิจารณาก่อน และ หลังการรักษา AST, ALT กลูโคส รวมเซรั่มไขมัน ไลโปโปรตีนความหนาแน่นสูง (HDL) คอเลสเตอร และไตรกลีเซอไรด์ระดับจากสัตว์แต่ละตัวถูกลข้อใช้ VP บริษัทแอ๊บบอตซุปเปอร์ระบบ Autoanalyser (แอ๊บ เออร์วิง TX) ร่วมกับเชิงพาณิชย์เอนไซม์ชุด (Labtest, Montes Claros, MG บราซิล) การวัดของ HDL คอเลสเตอรในซีรั่มได้ดำเนินการหลังฝนของ apo B ที่ประกอบด้วยเนื้อ เดกซ์แทรนซัลเฟตและแมกนีเซียมคลอไรด์ (Warnick et al. 1982) ผลลัพธ์ถูกแสดงเป็นไม่ใช่ HDL(VLDL + IDL และ LDL) คอเลสเตอรอลและ แทนเนื่องจากไม่สามารถใช้สมการ Friedewald (Friedewald et al. 1972)แฮมสเตอร์ ดังนั้น ความเข้มข้นของไลโปโปรตีน (ไม่ใช่ HDL) คอเลสเตอรคำนวณ โดยลบ HDL คอเลสเตอรความเข้มข้นจากทั้งหมดคอเลสเตอรซีรั่ม2.6. การเตรียมตัวอย่างเนื้อเยื่อตับอย่างรวดเร็วออก ล้างในเย็น 0.15 mol/l NaCl โซลูชั่นblotted ลงบนกระดาษกรอง homogenized ใน 9 ml ฉ่ำ และชั่งน้ำหนักโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ หลังจาก homogenization ในพอตเตอร์ – Elvehjen,homogenates ได้จากที่ 13,000g 4 นาทีที่ 4 C และการsupernatant assayed2.7. กำหนดระดับ TBARS ในซีรั่มและตับกำหนดระดับของ TBARS อธิบายข้างต้น (ส่วน2.3.1) ในหนูแฮมสเตอร์ร่าและตับ homogenates2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3.3 superoxide กิจกรรมไอออนไล่
superoxide กิจกรรมไอออนขับของสารสกัดจาก indica ตันได้รับการ
พิจารณาตามเนี่ยลปาเร et al, (2002) โดยการวัด superoxide
อนุมูลสร้างขึ้นในหลอดทดลองโดยระบบ oxidase xanthine / xanthine ได้.
ผสมปฏิกิริยาที่ปริมาณสุดท้ายของ 1 มิลลิลิตรบรรจุ 50 มิลลิโมล / ลิตร
บัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต (pH 7.5) EDTA (0.05 มิลลิโมล / ลิตร) xanthine
(0.2 มิลลิโมล / ลิตร) NBT (1 มิลลิโมล / ลิตร) และ 0.1 มล. ของสารสกัดที่แตกต่างกัน
มีความเข้มข้นถูกบ่มที่ 25 C, 10 นาที ปฏิกิริยาที่ถูก
ริเริ่มโดยนอกเหนือจาก xanthine oxidase (1 U / LL) และดำเนินการที่
25 C เป็นเวลา 20 นาที หลังจากช่วงเวลานี้การเกิดปฏิกิริยาก็หยุดโดย
นอกเหนือจาก CuCl (50 lmol / L) และการดูดกลืนแสงวัดที่
560 นาโนเมตร ผลที่จะได้แสดงถึงการยับยั้งอัตราร้อยละของ
การลด NBT ในความสัมพันธ์กับผสมปฏิกิริยาโดยไม่ต้องตัวอย่าง (buffer
เท่านั้น) hydroxytoluene butylated (บาท 1 mg / dL) ถูกใช้เป็นบวก
การควบคุม.
2.4 สัตว์ทดลองและอาหาร
ยี่สิบสี่โกลเด้นแฮมสเตอร์ชายซีเรียชั่งน้ำหนักระหว่าง 100
และ 130 กรัมแบ่งออกเป็นสี่กลุ่มและปรับสภาพ
เป็นเวลาสองสัปดาห์ในกระชังอาณานิคม (หกแฮมสเตอร์ต่อกรง) ณ วันที่ 25 ± 2 องศาเซลเซียสและ
ภายใต้ 12-H แสง: วงจรมืด กลุ่มที่ 1 ได้รับการเลี้ยงด้วยอาหารมาตรฐาน
(การควบคุมปกติ), กลุ่มที่ 2 ได้รับการเลี้ยงด้วยอาหารที่ได้มาตรฐานและมะขาม
สารสกัด, กลุ่มที่ 3 ได้รับการเลี้ยงด้วยอาหารมาตรฐานบวก 1% คอเลสเตอรอล
(ควบคุมโคเลสเตอรอลสูง) และกลุ่มที่ 4 เป็นอาหารที่มีมาตรฐาน อาหาร
บวก 1% คอเลสเตอรอลและสารสกัดจากมะขาม อาหารและการบริโภคของเหลวที่ถูก
ตรวจสอบเป็นประจำทุกวันในทุกกลุ่ม น้ำในกลุ่ม 2 และ 4 ก็ถูกแทนที่ด้วย
สารสกัดจากมะขาม 5% หลังจาก resuspension สมบูรณ์ในน้ำเป็นระยะเวลา
10 สัปดาห์.
ปริมาณของ T. indica ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ (5%) ได้รับเลือกให้อยู่บนพื้นฐานของ
การศึกษาความเข้มข้นของการตอบสนอง ซึ่งกำหนดฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ
ของสารสกัดจากเกี่ยวกับกระบวนการ peroxidation ไขมัน นอกจากนี้ความเข้มข้น 5%
คือความเข้มข้นมักจะอยู่ในน้ำบริโภคโดย
ประชากรมนุษย์.
2.5 การวัดน้ำหนักของร่างกายและพารามิเตอร์ทางชีวเคมี
สัตว์ที่ถูกยาสลบโดยใช้ห้อง CO2 และเลือด
ตัวอย่างที่ได้จากการเจาะหัวใจ; น้ำหนักตัวของแต่ละหนูแฮมสเตอร์
ก็ตัดสินใจก่อนและหลังการรักษา AST, ALT กลูโคสรวมในซีรั่ม
คอเลสเตอรอลสูง density lipoprotein (HDL) คอเลสเตอรอลและไตรกลีเซอไรด์
ระดับจากสัตว์แต่ละได้รับการพิจารณาในการเพิ่มขึ้นสามเท่าโดยใช้แอ็บบอทรองประธาน
ซูเปอร์ระบบ Autoanalyser (แอ็บบอทเออร์วิง, เท็กซัส) ร่วมกับ
ชุดของเอนไซม์ในเชิงพาณิชย์ ( labtest, Montes Claros, MG, บราซิล) วัด
ของ HDL คอเลสเตอรอลในซีรั่มได้ดำเนินการหลังจากการตกตะกอน
ของ APO-B ที่มี lipoproteins กับซัลเฟต dextran และแมกนีเซียม
คลอไรด์ (Warnick et al., 1982) ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็น Non-HDL
(VLDL + IDL + LDL) แทนคอเลสเตอรอลเพราะ
สม Friedewald (Friedewald et al., 1972) ไม่สามารถใช้ได้กับ
หนูแฮมสเตอร์ ดังนั้นความเข้มข้นของไลโปโปรตีน (Non-HDL) คอเลสเตอรอล
ที่คำนวณได้โดยการลบความเข้มข้นของ HDL คอเลสเตอรอลจากทั้งหมด
คอเลสเตอรอลในเลือด.
2.6 การเตรียมการของตัวอย่างเนื้อเยื่อ
ตับถูกถอดออกอย่างรวดเร็วล้างในการแก้ปัญหา 0.15 mol / L NaCl เย็น
เปื้อนลงบนกระดาษกรองชั่งน้ำหนักและหดหาย 9 มล. เย็น
บัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต หลังจากที่เป็นเนื้อเดียวกันในพอตเตอร์ Elvehjen ที่
homogenates ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 13,000g 4 นาทีที่ 4 C และ
ใส assayed.
2.7 การกำหนดระดับ TBARS ในซีรั่มและตับ
ระดับของ TBARS ได้รับการพิจารณาตามที่อธิบายไว้ข้างต้น (ข้อ
2.3.1) ในหนูแฮมสเตอร์ซีรั่มและตับ homogenates.
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3.3 . Superoxide anion การกิจกรรมSuperoxide anion การกิจกรรมของ สารสกัด ที จาก คือพิจารณาตาม parejo et al . ( 2002 ) โดยการวัดออกไซด์อนุมูลอิสระที่เกิดขึ้นในหลอดทดลองโดยของเอนไซม์แซนทีน / ระบบปฏิกิริยาที่ผสมในเล่มสุดท้าย 1 มิลลิลิตร ประกอบด้วย 50 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.5 ) , EDTA ( 0.05 mmol / L ) , แซนทีน( 0.2 มิลลิโมล / ลิตร ) , NBT ( 1 มิลลิโมล / ลิตร ) และ 0.1 มิลลิลิตร สารสกัดที่แตกต่างกันโดยมีอุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส นาน 10 นาที ปฏิกิริยา คือเริ่มต้นโดยการเพิ่มของเอนไซม์ ( 1 u / ll ) และดำเนินการที่25 C เป็นเวลา 20 นาที หลังจากช่วงเวลานี้ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยนอกจากนี้ของเปอร์ ( 50 lmol / L ) และทำการวัดค่าการดูดกลืนแสง560 นาโนเมตร ผลลัพธ์ที่ได้จะแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์การยับยั้งของNBT ลดความสัมพันธ์กับปฏิกิริยาผสม โดยไม่มีตัวอย่าง ( บัฟเฟอร์เท่านั้น ) จักรภพ ( บาท 1 มก. / ดล. ) ถูกใช้เป็นบวกควบคุม2.4 . สัตว์ทดลอง และ อาหารยี่สิบสี่ทองหนักระหว่าง 100 แฮมสเตอร์ซีเรีย ชายและ 130 กรัม แบ่งเป็นกลุ่ม 4 กลุ่ม และปรับสภาพเป็นเวลาสองสัปดาห์ในกรง ( กรงแฮมสเตอร์ต่อหมู่ 6 ) , 25 ± 2 องศาเซลเซียสภายใต้ 12-h แสง วงจรของความมืด กลุ่มที่ 1 เลี้ยงด้วยอาหารมาตรฐาน( การควบคุมปกติ ) กลุ่มทดลองที่ 2 ได้รับอาหารมาตรฐาน และมะขามสารสกัด , กลุ่มที่ 3 ถูกเลี้ยงด้วยอาหารมาตรฐานบวก 1% คอเลสเตอรอล( การควบคุมทำได้ ) และกลุ่มที่ 4 คือ เลี้ยงด้วยอาหารมาตรฐานบวก 1% คอเลสเตอรอลและสารสกัดมะขาม . อาหารและอาหารเหลวคือตรวจสอบทุกวันในทุกกลุ่ม น้ำในกลุ่ม 2 และ 4 แทน5% สารสกัดมะขาม หลัง resuspension สมบูรณ์ในน้ำ สำหรับรอบระยะเวลา10 สัปดาห์ปริมาณของ ที จากที่ใช้ในการศึกษา ( ร้อยละ 5 ) ถูกเลือกขึ้นอยู่กับการศึกษาการตอบสนองของงานซึ่งกำหนดสารต้านอนุมูลอิสระสารสกัดเกี่ยวกับการเกิด lipid peroxidation ในกระบวนการ และเพิ่มความเข้มข้นเป็นสมาธิที่มักจะอยู่ในน้ำบริโภคโดยประชากรมนุษย์2.5 การวัดน้ำหนักและพารามิเตอร์ทางชีวเคมีสัตว์ถูกวางยาสลบโดยใช้ห้อง CO2 และเลือดตัวอย่างที่ได้จากการเจาะหัวใจ ; น้ำหนักแต่ละแฮมสเตอร์ตั้งใจว่าก่อนและหลังการรักษา AST , ALT , กลูโคส , เซรั่มทั้งหมดคอเลสเตอรอลไลโปโปรตีนความหนาแน่นสูง ( HDL ) คอเลสเตอรอล และไตรกลีเซอร์ไรด์ระดับจากสัตว์แต่ละตัวอย่างทั้งสามใบใช้แอ๊บบอตฯautoanalyser ระบบซูเปอร์ ( Abbott , เออร์วิง , เท็กซัส ) ร่วมกับโฆษณาชุด ( labtest เญินคลารอส , เอนไซม์ , Mg , บราซิล ) การวัดของคอเลสเตอรอล HDL ในเลือดพบว่าหลังจากการตกตะกอนของ apo-b ที่มีไลโปโปรตีนที่มีซัลเฟต Dextran และแมกนีเซียมคลอไรด์ ( วอร์นิก et al . , 1982 ) ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นไม่ได้ต่อไป( VLDL + IDL + LDL คอเลสเตอรอล คอเลสเตอรอล ) แทน เพราะสมการในไฟร์ดเดวาล์ด ( ไฟร์ดเดวาล์ด et al . , 1972 ) ไม่สามารถใช้ได้กับแฮมสเตอร์ ดังนั้นความเข้มข้นของไลโปโปรตีน ( ไม่ใช่ HDL ) คอเลสเตอรอลคำนวณด้วยการลบคอเลสเตอรอลความเข้มข้นจากทั้งหมดคอเลสเตอรอลในเลือด2.6 การเตรียมตัวอย่างเนื้อเยื่อตับได้อย่างรวดเร็วลบล้างเย็น 0.15 โมลต่อลิตร เกลือโซลูชั่นที่เปื้อนบนกระดาษกรอง และโฮโม หนัก 9 ml เย็นโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ หลังจากการ elvehjen พอตเตอร์ ) ,homogenates เป็นระดับที่ 13000g 4 นาทีที่ 4 C และปริมาณสูง .2.7 . การกำหนดระดับปกติในเลือดและตับระดับปกติเป็นตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ( มาตรา2.3.1 ) ในเซราหนูแฮมสเตอร์และ homogenates ตับ2