Materials and MethodsSeeds of two I

Materials and Methods
Seeds of two Indian accessions of Jatropha curcas viz. “RSAD” accession was
obtained from Rain Shadow Area Development Department of Andhra Pradesh
(A.P.) State Government, (Hyderabad, India), whereas the “KM” accession was
collected from Venkatapur Village, Sircilla Mandal of Karimnagar District, A.P.
at 18.43o N 79.15o E latitude. Both accessions were raised in the Experimental
Botanical Garden, Department of Botany, Osmania University, Hyderabad,
India.
Preliminary experiments were carried out with to selecting the most
responsive explants. The hypocotyl and epicotyl explants were obtained from
six‐days‐old seedlings, cotyledonary node (CN) explants were obtained from 21‐
days‐old seedlings and the axillary node (AN), shoot‐tip (ST), petiole (P) and leaf
(L) explants from two‐year‐old mother plants growing in the Botanical Garden.
The present study was carried out only with CN, AN and ST explants since the
other explants did not respond. The explants were thoroughly surface‐sterilized
using 10% (v/v) hydrogen peroxide, 50% (v/v) ethanol, 0.1% (w/v) mercuric
chloride and Tween‐20, rinsed with sterile distilled water and inoculated with a
pair of sterile forceps into 25 × 150 mm culture tubes on autoclaved and cooled
MS supplemented with 3% (w/v) sucrose and solidified with 0.8% (w/v) Phytaagar
(Himedia). The pH of the medium was adjusted to 5.8 before autoclaving.
Forty explants were inoculated for each experiment with three replicates
amounting to a total of 120 explants per accession. All the cultures were
maintained in a sterile growth room with 16 hrs photoperiod at 25 ± 2ºC with
light intensity of 60 μ Em2/s and 50 % relative humidity. Different culture media
based on MS with supplementation of growth regulators were used. Citric acid
(CA) 520.5 μM (w/v) was supplemented to all the media to prevent browning of
tissue due to exudation of latex from explants. Compositions of the media (Table
1) are given below.
Medium‐A: MS supplemented with IAA (2, 8 μM), Kn (13.93 μM), AS (27.14
μM), Glutamine (Glu) (684.2 μM) and CA (520.5 μM). Medium‐B: MS
supplemented with 2, 4‐D (9.04 μM), Kn (4.6 μM), Glu (684.2 μM) and CA (520.5
μM). Medium‐C: MS supplemented with 2, 4‐D (1.80 μM), BA (1.7 μM), Glu
(684.2 μM) and CA (520.5 μM).
Development of Efficient Micropropagation Protocols 233
Shoots which proliferated from all explants on medium‐A were sub‐cultured
on medium‐D for shoot elongation: Medium‐D: MS supplemented with GA3 (5.7
μM), BA (4.4 μM), Glu (684.2 μM) and CA (520.5 μM).
Calluses which developed from explants on medium‐B were sub‐cultured on
medium‐E for shoot induction: Medium‐E: MS supplemented with NAA (2.68
μM), BA (4.4 μM), Glu (684.2 μM) and CA (520.5 μM).
Explants with somatic embryos (from medium‐C) were transferred to
medium‐F for conversion of somatic embryos to plantlets.
Medium‐F: MS supplemented with BA (6.6 μM), Glu (684.2 μM) and CA
(520.5 μM).
Healthy, well developed and elongated shoots (3 cm) were transferred to
medium‐G for root induction: Medium‐G: Half strength MS supplemented with
IBA (14.7 μM), Glu (684.2 μM) and CA (520.5 μM).
Healthy plantlets with well‐developed roots were transferred to pots and
gradually acclimated in the glasshouse in the shade for two weeks by enclosing
the pots in polythene bags. Subsequently, the plants were transferred to the
sunny areas of the glasshouse and later to the field.
Each experiment was repeated twice with three replicates/treatments Data
pertaining to the study was recorded, statistically analyzed and presented as
mean + standard error of the three replicates.
Histological studies were conducted to identify the morphogenetic pathway
(organogenesis or somatic embryogenesis) either directly from explants or
indirectly from callus according to Luna (1998). The materials were fixed in
alcohol and glacial acetic acid 3 : 1. The fixed tissue was passed through a series
of dehydration steps in tertiary butyl alcohol (30 ‐ 70%), and xylene was used as
a clearing agent to make the tissue translucent. The material was then
impregnated with paraffin (56 ‐ 58ºC) and placed in the embedding unit
(Electron Corporation, model Shandon Histocenter‐3). The tissue was processed
by Citadel‐2000 Thermo Shandon and stained with haemotoxylin and eosin,
using an automated Leica Auto stainer‐Xl. These blocks were mounted and
trimmed using a microtome (Leica model RM 2155) for very thin microsections
of 6 ‐ 8 μm. The sections were mounted on slides, dewaxed and observed under
the microscope‐ (Leitz Diaplan) and microphotographs of different stages of
shoot‐bud induction or somatic embryogenesis were obtained with a digital
camera.
234 Naresh et al.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการเมล็ดของ accessions อินเดียสองของสบู่ดำ curcas ได้แก่ "RSAD" ทะเบียนถูกได้รับจากฝนเงาพื้นที่พัฒนากรมของรัฐอานธรประเทศ(อ่าวนาง) รัฐรัฐบาล, (ไฮเดอราบัด อินเดีย), ในขณะที่มีทะเบียน "KM"รวบรวมจากอ่าวนาง Venkatapur วิลเลจ Sircilla Mandal ของ Karimnagar อำเภอที่ 18.43o N 79.15o E แล ทั้ง accessions ขึ้นใน Experimentalสวนพฤกษศาสตร์ ภาควิชาพฤกษศาสตร์ Osmania มหาวิทยาลัย ไฮเดอราบัดอินเดียการทดลองเบื้องต้นได้ดำเนินการด้วยการเลือกมากสุดexplants ตอบสนอง Explants hypocotyl และ epicotyl ได้รับมาจากกล้าไม้ six‐days‐old, explants cotyledonary โหน (CN) ได้รับจาก 21‐กล้าไม้ days‐old และโหนรักแร้ (AN), shoot‐tip (ST), petiole (P) และใบไม้(L) explants จาก two‐year‐old แม่พืชเติบโตในสวนพฤกษศาสตร์ทำการศึกษานำเสนอออกมาเท่ากับ CN, AN และเซนต์ explants ตั้งแต่การexplants อื่นไม่ตอบสนอง Explants ใบได้อย่างทั่วถึง surface‐sterilizedใช้ 10% (v/v) ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ เอทานอล 50% (v/v) 0.1% (w/v) mercuricคลอไรด์และ Tween‐20, rinsed ด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ และ inoculated ด้วยการคู่ของคีมกอซเป็น 25 × 150 มม.วัฒนธรรมหลอด autoclaved และเย็น ๆMS เสริม ด้วยซูโครส 3% (w/v) และหล่อกับ 0.8% (w/v) Phytaagar(Himedia) PH ของตัวกลางมีการปรับปรุงไป 5.8 ก่อน autoclavingสี่สิบ explants ถูก inoculated สำหรับแต่ละการทดลองด้วยเหมือนกับสามเกินจำนวน explants 120 ต่อทะเบียน มีวัฒนธรรมทั้งหมดรักษาในห้องฆ่าเชื้อเติบโต 16 น.ชั่วโมงที่ 25 ± 2ºC ด้วยแสงความเข้มของ 60 μ Em2/s และ 50% ความชื้นสัมพัทธ์ สื่อวัฒนธรรมแตกต่างกันตาม MS กับแห้งเสริมโตใช้เร็คกูเลเตอร์ กรดซิตริก(CA) 520.5 μM (w/v) ได้เสริมกับสื่อทั้งหมดให้ browning ของเนื้อเยื่อจาก exudation ของยางจาก explants องค์ประกอบการสื่อ (ตาราง1) จะได้รับด้านล่างMedium‐A: MS เสริมกับ IAA (2, 8 μM), ช็อปปิ้ง (13.93 μM), เป็น (27.14ΜM), Glutamine (Glu) (684.2 μM) และ CA (520.5 μM) Medium‐B: MSเสริม ด้วย 2, 4‐D (9.04 μM), ช็อปปิ้ง (4.6 μM), Glu (684.2 μM) และ CA (520.5ΜM) Medium‐C: MS เสริมกับ 2, 4‐D (1.80 μM), BA (1.7 μM), Glu(684.2 μM) และ CA (520.5 μM)พัฒนาโปรโตคอลมีประสิทธิภาพ Micropropagation 233ถ่ายภาพที่ proliferated จาก explants ทั้งหมดใน medium‐A ได้ sub‐culturedใน medium‐D สำหรับยิง elongation: Medium‐D: MS เสริม ด้วย GA3 (5.7ΜM), BA (4.4 μM), Glu (684.2 μM) และ CA (520.5 μM)Calluses ซึ่งพัฒนาจาก explants ใน medium‐B มา sub‐culturedmedium‐E สำหรับยิงเหนี่ยวนำ: Medium‐E: MS เสริม ด้วย NAA (2.68ΜM), BA (4.4 μM), Glu (684.2 μM) และ CA (520.5 μM)Explants กับโคลน somatic (จาก medium‐C) ได้โอนย้ายไปmedium‐F สำหรับแปลงโคลน somatic plantletsMedium‐F: MS เสริม ด้วย BA (6.6 μM), Glu (684.2 μM) และ CA(520.5 ΜM)มีโอนถ่ายภาพสุขภาพ พัฒนา และดีอีลองเกต (3 ซม.)medium‐G สำหรับเหนี่ยวนำราก: Medium‐G: MS เสริมด้วยแรงครึ่งอิบา (14.7 μM), Glu (684.2 μM) และ CA (520.5 μM)Plantlets สุขภาพ มีราก well‐developed ถูกโอนย้ายไปยังหม้อ และค่อย ๆ acclimated ในเรือนกระจกสำหรับปลูกต้นไม้ในร่มสำหรับสองสัปดาห์ด้วยหม้อในถุง polythene ในเวลาต่อมา พืชถูกโอนย้ายไปพื้นที่แดดเรือนกระจกสำหรับปลูกต้นไม้ และต่อ ไปยังเขตข้อมูลการทดลองแต่ละไม่ซ้ำสองกับสามเหมือนกับ/บริการข้อมูลเกี่ยวข้องกับการศึกษาบันทึก ทางสถิติวิเคราะห์ และนำเสนอเป็นมัชฌิม + ข้อผิดพลาดมาตรฐานของเหมือนกับสามได้ดำเนินการศึกษาสรีรวิทยาระบุทางเดิน morphogenetic(การเกิดของอวัยวะหรือการเกิดเอ็มบริโอ somatic) โดยตรงจาก explants หรือโดยทางอ้อมจากแคลลัสตามลูน่า (1998) วัสดุไม่ถาวรในแอลกอฮอล์และกรดอะซิติกน้ำแข็ง 3:1 เนื้อเยื่อถาวรถูกส่งผ่านชุดขั้นตอนการคายน้ำในระดับตติยภูมิส้ม butyl แอลกอฮอล์ (30 ‐ 70%), และไซถูกใช้เป็นตัวแทนหักบัญชีจะทำให้เนื้อเยื่อโปร่งแสง วัสดุถูกแล้วimpregnated กับพาราฟิน (56 ‐ 58ºC) และอยู่ในหน่วย embedding(อิเล็กตรอน Corporation รุ่นแชนดอน Histocenter‐3) เนื้อเยื่อมีการประมวลผลโดยแชนดอนเทอร์โม Citadel‐2000 และทิ้งคราบ haemotoxylin และ eosinใช้ stainer‐Xl เป็นไลอัตโนมัติอัตโนมัติ บล็อกเหล่านี้ถูกติดตั้ง และตัดใช้ microtome (ไลก้ารุ่น RM 2155) microsections มากของ μm ‐ 8 6 ส่วนถูกติดตั้งบนภาพนิ่ง dewaxed และสังเกตภายใต้microscope‐ (Leitz Diaplan) และ microphotographs ของระยะต่าง ๆ ของเหนี่ยวนำ shoot‐bud หรือ somatic เกิดเอ็มบริโอได้รับกับแบบดิจิตอลกล้อง234 Naresh et al

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการเมล็ดพันธุ์ของทั้งสองสายของอินเดีย ได้แก่ สบู่ดำ
"RSAD"
เข้าได้ที่ได้จากการพัฒนาพื้นที่ฝนเงากรมรัฐอานธรประเทศ
(AP) รัฐ (Hyderabad, อินเดีย) ในขณะที่ "KM"
เข้ารับการเก็บรวบรวมจากVenkatapur หมู่บ้าน Sircilla ของดั Karimnagar อำเภอ AP
ที่ 18.43o ไม่มี ละติจูด 79.15o E สายทั้งสองถูกยกขึ้นในการทดลองสวนพฤกษศาสตร์ภาควิชาพฤกษศาสตร์, Osmania มหาวิทยาลัยไฮเดอรา, อินเดีย. การทดลองเบื้องต้นได้ดำเนินการกับการเลือกมากที่สุดชิ้นส่วนที่ตอบสนองต่อ hypocotyl epicotyl และชิ้นส่วนที่ได้รับจากต้นกล้าหกวันเก่าโหนด cotyledonary (CN) ชิ้นส่วนที่ได้รับจาก 21- ต้นกล้าวันเก่าและซอกใบโหนด (เป็น) ยิงปลาย (ST) ก้านใบ (P) และ ใบ(L) ชิ้นจากสองปีแม่ของพืชที่กำลังเติบโตในสวนพฤกษศาสตร์. การศึกษาครั้งนี้ได้ดำเนินการเฉพาะกับ CN, และ ST ชิ้นตั้งแต่ชิ้นส่วนอื่นๆ ที่ไม่ตอบสนอง ชิ้นส่วนได้อย่างทั่วถึงผิวผ่านการฆ่าเชื้อโดยใช้ 10% (v / v) ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 50% (v / v) เอทานอล 0.1% (w / v) ปรอทคลอไรด์และTween-20 ล้างด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและเชื้อด้วยคู่ของคีมผ่านการฆ่าเชื้อเป็น 25 × 150 มิลลิเมตรหลอดวัฒนธรรมเบาและระบายความร้อนด้วยMS เสริมด้วย 3% (w / v) และผลึกน้ำตาลซูโครสกับ 0.8% (w / v) Phytaagar (HIMEDIA) ค่า pH ของกลางที่ได้รับการปรับให้ 5.8 ก่อนที่จะนึ่งฆ่าเชื้อ. ชิ้นสี่สิบถูกเชื้อสำหรับการทดสอบแต่ละคนมีสามซ้ำมูลค่ารวม 120 ชิ้นต่อการเข้า วัฒนธรรมทั้งหมดถูกเก็บรักษาไว้ในห้องที่มีการเจริญเติบโตที่ผ่านการฆ่าเชื้อแสง 16 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 25 ±2ºCกับความเข้มของแสง60 μ EM2 / วินาทีและความชื้นสัมพัทธ์ 50% สื่อวัฒนธรรมที่แตกต่างกันขึ้นอยู่กับ MS ที่เสริมควบคุมการเจริญเติบโตถูกนำมาใช้ กรดซิตริก(CA) 520.5 ไมครอน (w / v) ก็ตบท้ายกับสื่อทั้งหมดเพื่อป้องกันการเกิดสีน้ำตาลของเนื้อเยื่อเนื่องจากการexudation น้ำยางจากชิ้นส่วน องค์ประกอบของสื่อ (ตารางที่1) ได้รับด้านล่าง. กลาง A: MS เสริมด้วย IAA (2, 8 ไมครอน) Kn (13.93 ไมครอน), AS (27.14 ไมครอน) กลูตา (Glu) (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย ( 520.5 ไมครอน) กลาง B: MS เสริมด้วย 2, 4-D (9.04 ไมครอน) Kn (4.6 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน) กลาง C: MS เสริมด้วย 2, 4-D (1.80 ไมครอน), BA (1.7 ไมครอน) ผู้หญิง(684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน). การพัฒนาที่มีประสิทธิภาพโปรโตคอลการขยาย 233 ข้าวกล้าที่แพร่กระจายออกมาจากชิ้นส่วนทั้งหมดที่อยู่บนกลาง เท่ากับย่อยที่เพาะเลี้ยงบนอาหาร-D สำหรับการยืดตัวยิง: Medium-D: MS เสริมด้วย GA3 (5.7 ไมครอน), BA (4.4 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน). แคลลัสซึ่งพัฒนามาจากชิ้นส่วนบน ขนาด B เป็นย่อยเลี้ยงบนกลาง-E สำหรับการเหนี่ยวนำการถ่าย: Medium-E: MS เสริมด้วย NAA (2.68. ไมครอน), BA (4.4 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน) ชิ้นส่วนที่มีตัวอ่อนร่างกาย (จากขนาด C) ถูกย้ายไปกลาง-F สำหรับการแปลงตัวอ่อนร่างกายจะต้น. Medium-F: MS เสริมด้วย BA (6.6 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และ CA. (520.5 ไมครอน) สุขภาพ, การพัฒนาอย่างดีและ หน่อยาว (3 ซม.) ถูกย้ายไปกลาง-G สำหรับการเหนี่ยวนำราก: Medium-G: ความแข็งแรงครึ่ง MS เสริมด้วยไอบีเอ(14.7 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน). ต้นสุขภาพที่มีรากการพัฒนาที่ดี ถูกย้ายไปหม้อและค่อยๆปรับตัวในเรือนกระจกในที่ร่มเป็นเวลาสองสัปดาห์โดยแนบหม้อในถุงพลาสติก ต่อจากนั้นพืชที่ถูกย้ายไปอยู่ในพื้นที่ที่มีแดดของเรือนกระจกและต่อมาไปที่สนาม. แต่ละทดลองซ้ำเป็นครั้งที่สองกับสามซ้ำ / การรักษาข้อมูลที่เกี่ยวข้องกับการศึกษาได้รับการบันทึกวิเคราะห์ทางสถิติและนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย+ ข้อผิดพลาดมาตรฐานของสามซ้ำ . การศึกษาทางจุลกายวิภาคได้ดำเนินการในการระบุเส้นทาง morphogenetic (อวัยวะหรือร่างกาย embryogenesis) โดยตรงจากชิ้นส่วนหรือโดยอ้อมจากแคลลัสตามลูน่า(1998) วัสดุที่ได้รับการแก้ไขในเครื่องดื่มแอลกอฮอล์และกรดอะซิติกน้ำแข็ง 3: 1. เนื้อเยื่อคงถูกส่งผ่านไปผ่านชุดของขั้นตอนการคายน้ำในแอลกอฮอล์บิวทิลตติยภูมิ(30-70%) และไซลีนที่ใช้เป็นตัวแทนหักบัญชีจะทำให้เนื้อเยื่อโปร่งแสง วัสดุที่ถูกแล้วชุบด้วยพาราฟิน (56 - 58ºC) และวางไว้ในหน่วยฝัง (อิคอร์ปอเรชั่นรุ่น Shandon Histocenter-3) เนื้อเยื่อได้รับการประมวลผลโดยป้อม-2000 เทอร์โมชานตงและย้อมด้วยสี haemotoxylin และ Eosin, ใช้ Leica อัตโนมัติ Auto Stainer-XL บล็อกนี้ได้รับการติดตั้งและตัดการใช้ microtome (ที่ Leica รุ่น RM 2155) สำหรับ microsections บางมากของ6-8 ไมโครเมตร ส่วนที่ได้รับการติดตั้งอยู่บนสไลด์ dewaxed และสังเกตภายใต้microscope- (Leitz Diaplan) และ microphotographs ของขั้นตอนต่างๆของการเหนี่ยวนำการยิงตูมหรือembryogenesis ร่างกายได้รับพร้อมดิจิตอลกล้อง. 234 Naresh et al,

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
เมล็ดสองสายพันธุ์สบู่ดำของอินเดียได้แก่ " rsad " หนังสือคือ
ได้จากบริเวณเงาฝน ฝ่ายพัฒนาของรัฐอานธรประเทศ
( เอพี ) และรัฐบาลมลรัฐ ( Hyderabad , อินเดีย ) ส่วน " km " หนังสือคือ
เก็บจาก venkatapur หมู่บ้าน sircilla Mandal ของกรีมนคร อำเภอ เอ. พี.
ที่ 18.43o N 79.15o E ละติจูดทั้งสองสายพันธุ์มีขึ้นในสวนพฤกษศาสตร์
ทดลองที่ ภาควิชาพฤกษศาสตร์ มหาวิทยาลัย Osmania , ไฮเดอรา ,

จากอินเดีย เบื้องต้นทดลองที่มีให้เลือกมากที่สุด
ตอบสนองการเจริญเติบโต . การย้ายเนื้อเยื่อที่ได้จากการป้อนกลับแบบลบและ‐
6 วัน‐ต้นกล้าอายุ cotyledonary โหนด ( CN ) เนื้อเยื่อที่ได้จาก‐
21วัน‐ต่อมน้ำเหลืองรักแร้ และต้นกล้าเก่า ( ) , ยิง‐ทิป ( ST ) , ก้าน ( P ) และใบ
( L ) อาหารจากสอง‐ปี‐เก่าแม่พืชที่เติบโตในสวนพฤกษศาสตร์
การศึกษาได้ดําเนินการเฉพาะกับ CN , และเซนต์ เลี้ยงตั้งแต่
อาหารอื่น ๆ ไม่ตอบ เนื้อเยื่อผิวโดย‐ฆ่าเชื้อ
ใช้ 10% ( v / v ) ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 50 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) เอทานอล , 0.1% ( w / v )
เมอร์คิวริกคลอไรด์ และ‐ Tween 20 , ล้างด้วยน้ำกลั่นปราศจากเชื้อและคู่ของคีมด้วย
เป็นหมันใน 25 × 150 มม. ท่อบนวัฒนธรรมและสังเคราะห์ด้วย
MS ที่มี 3% ( w / v ) ซูโครสและแข็งกับ 0.8 % ( w / v ) phytaagar
( himedia ) พีเอชของอาหารปรับฐานก่อนอัตราส่วนโฟกัส .
สี่สิบ เลี้ยงปลูกเชื้อในแต่ละการทดลอง 3 ซ้ำ
จำนวนทั้งหมด 120 การเจริญเติบโตต่อเข้า . วัฒนธรรมทั้งหมดถูก
รักษาในห้องปลอดเชื้อ ด้วยการให้แสง 16 ชั่วโมง 25 ± 2 º C
ความเข้มแสง 60 μ em2 / s และ 50 % ความชื้นสัมพัทธ์ . สื่อวัฒนธรรมแตกต่างกัน
ตามบนอาหารสูตร MS ที่มีการเสริมสารควบคุมการเจริญเติบโตแบบ กรดซิตริก
( CA ) 520.5 μ m ( w / v ) เสริมกับสื่อทั้งหมดเพื่อป้องกันการเกิดสีน้ำตาลของ
เนื้อเยื่อเนื่องจาก exudation ยาง จากอาหาร . องค์ประกอบของสื่อ ( โต๊ะ
1 ) จะได้รับด้านล่าง .
กลาง‐ : MS ที่มี IAA ( 2 , 8 μ M ) KN ( 13.93 μ M ) , ( 27.14
μ M ) , มีน ( GLU ) ( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ M ) กลาง‐ B : MS ที่เสริมด้วย 2 ‐
4 D ( 9.04 μ M ) KN ( 4.6 μ M ) , GLU ( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5
μ M ) กลาง‐ C : MS ที่มี 2 , 4 ‐ D ( 1.80 μ M ) b ( 1.7 μ M )GLU
( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ M )
การพัฒนาประสิทธิภาพการขยายพันธุ์โปรโตคอล 233
หน่อซึ่งพัฒนาจากอาหารกลาง ‐ได้ซบ‐เลี้ยง
เมื่อกลาง‐ D สำหรับการยิงกลาง‐ D : MS ที่มี GA3 ( 5.7
μ M ) b ( 4.4 μ M ) , GLU ( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ M )
แคลลัสที่ได้รับจากอาหารกลาง ‐ B ถูกย่อย‐
เลี้ยงบนอาหารกลาง‐ E สำหรับการยิงกลาง‐ E : MS ที่มี NAA ( 2.68
μ M ) b ( 4.4 μ M ) , GLU ( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ M )
อาหารกับโซมาติกเอ็มบริโอ ( จากกลาง‐ C ) โอน

‐ F แปลงกลาง โซมาติกเอ็มบริโอจะได้ดีที่สุด ‐
( F : MS ที่มี BA ( 6.6 μ M ) , GLU ( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5

สุขภาพ μ M )พัฒนาได้ดี และยิงยาว 3 ซม. ) ถูกย้ายไป‐ g
ขนาดกลางเหนี่ยวราก : ปานกลาง‐ G : MS แรงครึ่งหนึ่งที่เติม IBA ( 14.7 μ
m ) ซึ่ง ( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ M )
ต้นแข็งแรงดี‐พัฒนาราก คือ หม้อ
ค่อยๆ acclimated ในเรือนกระจกในร่มเป็นเวลาสองสัปดาห์ โดยการปิดล้อม
หม้อในถุงโพลีเทน ต่อมาพืชที่ถูกย้ายไปยัง
พื้นที่แดดของเรือนกระจกและต่อมาเขต .
แต่ละ 3 ซ้ำทำการทดลองซ้ำ 2 ครั้ง / การรักษาข้อมูลที่เกี่ยวข้องกับการศึกษา
บันทึก สถิติวิเคราะห์ และนำเสนอเป็น
หมายถึงความคลาดเคลื่อนมาตรฐานของทั้งสาม ได้แก่ การศึกษามีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาลักษณะทาง

) morphogenetic( แกโนเจเนซิส หรือเซลล์เพาะเลี้ยงจากเนื้อเยื่อ ) ทั้งโดยตรงหรือโดยอ้อมจากแคลลัส
ตามลูน่า ( 1998 ) วัสดุที่ถูกกำหนดในแอลกอฮอล์และกรดแอซีติก
3 : 1 เนื้อเยื่อถาวรที่ผ่านชุดของขั้นตอนในการดื่มแอลกอฮอล์
บิวทิลตติยภูมิ ( 30 ‐ 70 % ) และไซลีนใช้
ตัวแทนล้างเพื่อให้เนื้อเยื่อโปร่งแสง วัสดุแล้ว
ชุบพาราฟิน ( 56 ‐ 58 º C ) และวางไว้ในการฝังตัวหน่วย
( Electron Corporation รุ่น Shandon histocenter ‐ 3 ) เนื้อเยื่อที่ถูกประมวลผล
โดยป้อม‐ 2000 เทอร์โมซ่านและเปื้อนด้วย haemotoxylin และ eosin
ใช้ไลก้าแบบอัตโนมัติ , อัตโนมัติสเตนเนอร์‐ XL . บล็อกเหล่านี้ติดและ
ตัดโดยใช้เครื่องตัดชิ้นเนื้อ ( Leica รุ่น RM 2155 ) สำหรับบางมาก microsections
6 ‐ 8 μม.ส่วนที่ติดบนสไลด์ dewaxed และสังเกต
‐ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ( leitz diaplan ) และ microphotographs ของขั้นตอนที่แตกต่างกันของ
ยิง‐เหนี่ยวนำหน่อหรือเซลล์เพาะเลี้ยงได้ด้วยกล้องดิจิตอล
.
แต่นเรศ et al .