2.2.2. Total DNA extraction from cane juice
An improved CTAB procedure was used to extract total DNA
from sugarcane juice. A total of 2 mL of each mixed juice sample
was transferred to a 2.0 mL tube and centrifuged at 12,000 rpm for
10 min. The pellet was resuspended in 300 mL sterile distilled water,
dissolved in 600 mL of 2% CTAB buffer (pre-warmed to 65 C) and
incubated at 65 C for 1 h (with gentle mixing every 20 min). Then,
600 mL of chloroform/isoamyl alcohol (24:1) was added, and the
samplewas mixed thoroughly for 30 s and centrifuged for 10 min at
12,000 rpm. Next, 700 mL of supernatantwas transferred to a 1.5 mL
tube and mixed gently with 700 mL of chloroform/isoamyl alcohol
(24:1). The sample was then centrifuged at 12,000 rpm for 10 min.
A total of 650 mL supernatant was transferred to a new 1.5 mL tube
and mixed with two-thirds volume of isopropanol. After incubation
at 20 C for 4 h or overnight, the sample was centrifuged at
12,000 rpm for 10 min at 4 C. The pellet was washed twice with
70% ethanol, dried, resuspended in 30 mL of sterile water and stored
at 20 C
2.2.2 สกัดดีเอ็นเอรวมจากน้ำอ้อย
ขั้นตอนการปรับปรุง CTAB ถูกใช้ในการสกัดดีเอ็นเอทั้งหมด
จากน้ำอ้อย ทั้งหมด 2 มิลลิลิตรของตัวอย่างน้ำผลไม้ผสมแต่ละ
ถูกย้ายไปยังหลอดมล 2.0 และหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ
10 นาที เม็ดถูก resuspended ใน 300 มิลลิลิตรน้ำกลั่นปลอดเชื้อ
ละลายใน 600 มล 2% CTAB บัฟเฟอร์ (pre- อุ่นถึง 65? C) และ
บ่มที่อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง (ด้วยความอ่อนโยนผสมทุก 20 นาที) จากนั้น
600 มลคลอโรฟอร์ม / isoamyl เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (24: 1) ถูกบันทึกและ
samplewas ผสมเป็นเวลา 30 วินาทีและปั่นเป็นเวลา 10 นาทีที่
12,000 รอบต่อนาที ถัดไป 700 มล supernatantwas โอนไปยังมล 1.5
หลอดและผสมเบา ๆ ด้วย 700 มลคลอโรฟอร์ม / isoamyl เครื่องดื่มแอลกอฮอล์
(24: 1) กลุ่มตัวอย่างถูกปั่นแล้ว 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที.
รวมเป็น 650 มิลลิลิตรใสถูกย้ายไปอยู่ที่ใหม่ 1.5 หลอดมิลลิลิตร
และผสมกับสองในสามของปริมาณ isopropanol หลังจากการบ่ม
ที่? 20? C เป็นเวลา 4 ชั่วโมงหรือข้ามคืนตัวอย่างที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่
12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส เม็ดถูกล้างครั้งที่สองกับ
70% เอทานอล, อบแห้ง, resuspended ใน 30 มิลลิลิตรของน้ำหมันและเก็บไว้
ที่? 20? C
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.2.2 . การสกัดดีเอ็นเอทั้งหมดจากน้ำอ้อยการปรับปรุงกระบวนการ ctab ใช้สกัดดีเอ็นเอทั้งหมดจากน้ำอ้อย รวมของ 2 มิลลิลิตร ผสมน้ำผลไม้แต่ละตัวอย่างถูกย้ายไปที่หลอดเป็น 2.0 มิลลิลิตรและระดับที่ 12 , 000 รอบต่อนาทีสำหรับ10 นาที เม็ดก็ resuspended ใน 300 มล. ปลอดเชื้อ น้ำกลั่นละลาย 600 มล. 2 % ctab บัฟเฟอร์ ( ก่อนไปถึง 65 C ) และบ่มที่อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ( ด้วยความอ่อนโยนผสมทุก 20 นาที ) จากนั้น600 มิลลิลิตร / แอลกอฮอล์ในปริมาณคลอโรฟอร์ม ( 24 : 1 ) คือการเพิ่มและsamplewas ละเอียดผสม 30 ของไฟฟ้าสำหรับ 10 นาทีที่12 , 000 รอบต่อนาที ถัดไป , 700 มิลลิลิตร supernatantwas ย้ายไป 1.5 มิลลิลิตรหลอดและผสมเบา ๆด้วยคลอโรฟอร์ม / แอลกอฮอล์ในปริมาณ 700 มล.( 24 : 1 ) ตัวอย่างมีแล้วที่ระดับที่ 12 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีทั้งหมด 650 ml สูงถูกส่งไปใหม่ 1.5 ml หลอดและผสมกับสองในสามของปริมาณไอโซโพรพานอล . หลังจากบ่มที่ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมง หรือข้ามคืน กลุ่มตัวอย่างคือ ระดับที่12 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 C ซักสองเม็ด70% เอทานอล , แห้ง , resuspended ใน 30 ml ของน้ำหมัน และเก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียส
การแปล กรุณารอสักครู่..
