A multiplex loop-mediated isotherma

A multiplex loop-mediated isothermal amplification-RFLP (mLAMP-RFLP) was developed and validated for simultaneous detection of Salmonella strains and Shigella strains in milk. In this system, two sets of LAMP primers were designed to specifically target invA of Salmonella spp. and ipaH of Shigella spp. Under isothermal conditions at 63 °C, ladder pattern of DNA bands could be amplified within 60 min in the presence of genomic DNAs of Salmonella strains and Shigella strains, which could be distinguished between Salmonella spp. and Shigella spp. simultaneously based on the different ladder pattern of DNA bands and subsequent restriction enzyme analysis. The overall analysis time was approximately 20 h including the enrichment of the bacterial cells, which greatly saved detection time. The sensitivity of mLAMP was found to be 100 fg DNA/tube with genomic DNAs of Salmonella strains and Shigella strains, comparatively, multiplex PCR was 1 pg DNA/tube. The mLAMP allowed the detection of milk sample artificially contaminated by Salmonella strains and Shigella strains at initial inoculation levels of approximate 5 CFU/10 mL. In conclusion, the mLAMP described here can potentially facilitate simultaneous monitoring of Salmonella and Shigella in a large number of food samples, which could be used as a primary screening method and as a supplement to classical detection method.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การ multiplex mediated วน isothermal ขยาย-RFLP (mLAMP-RFLP) ได้พัฒนา และตรวจสอบพร้อมตรวจระดับสายพันธุ์และสายพันธุ์ของ Shigella ในนม ในระบบนี้ ไพรเมอร์ไฟสองชุดถูกออกแบบโดยเฉพาะเป้าหมาย invA ของโอซัลและ ipaH ของ Shigella โอ บันไดรูปแบบของแถบดีเอ็นเอสามารถขยายภายใน 60 นาทีในต่อหน้าของ genomic DNAs สายสายพันธุ์และสายพันธุ์ Shigella ซึ่งอาจแตกต่างระหว่างโอซัลและ Shigella โอพร้อมกันตามบันไดต่าง ๆ รูปแบบของแถบดีเอ็นเอและเอนไซม์จำกัดต่อมาวิเคราะห์ สภาวะ isothermal ที่ 63 ° C เมื่อวิเคราะห์โดยรวมประมาณ 20 h รวมถึงเพิ่มความสมบูรณ์ของเซลล์แบคทีเรีย ซึ่งบันทึกเวลาที่ตรวจสอบมากขึ้น ความไวของ mLAMP พบเป็น 100 fg ดีเอ็นเอ/ท่อกับสายพันธุ์ของ DNAs ซัล genomic และ Shigella สาย พันธุ์ ดีอย่างหนึ่ง การ multiplex PCR เป็น 1 pg ท่อ/ดีเอ็นเอ MLAMP การตรวจตัวอย่างน้ำนมปนเปื้อนสารสมยอม โดยสายสายพันธุ์และสายพันธุ์ของ Shigella ที่ระดับ inoculation เริ่มต้นประมาณ 5 CFU/10 mL ได้ เบียดเบียน mLAMP ที่อธิบายไว้ที่นี่สามารถอาจช่วยในการตรวจสอบพร้อมสายและ Shigella ในจำนวนตัวอย่างอาหาร ซึ่งสามารถใช้ เป็นวิธีคัดกรองหลัก และอาหารเสริมวิธีตรวจหาคลาสสิก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ห่วงพึ่ง multiplex ขยาย-RFLP isothermal (mLAMP-RFLP) ได้รับการพัฒนาและตรวจสอบสำหรับการตรวจสอบพร้อมกันของสายพันธุ์และสายพันธุ์เชื้อ Salmonella Shigella ในนม ในระบบนี้สองชุดของไพรเมอร์โคมไฟถูกออกแบบมาเพื่อกำหนดเป้​​าหมายเฉพาะ invA ของเชื้อ Salmonella spp และ ipaH ของ Shigella spp ภายใต้เงื่อนไขที่อุณหภูมิคงที่ 63 องศาเซลเซียสบันไดรูปแบบของวงดีเอ็นเออาจจะขยายภายใน 60 นาทีในการปรากฏตัวของดีเอ็นเอจีโนมของสายพันธุ์และสายพันธุ์เชื้อ Salmonella Shigella ซึ่งอาจจะแตกต่างระหว่างเชื้อ Salmonella spp และ Shigella spp ตามพร้อมกันในรูปแบบที่แตกต่างกันของบันไดวงดนตรีและการวิเคราะห์ดีเอ็นเอเอนไซม์ จำกัด ตามมา เวลาวิเคราะห์โดยรวมอยู่ที่ประมาณ 20 ชั่วโมงรวมทั้งการเพิ่มคุณค่าของเซลล์แบคทีเรียซึ่งบันทึกเวลาการตรวจสอบอย่างมาก ความไวของ mLAMP ที่ได้รับพบว่ามีดีเอ็นเอ 100 FG / หลอด DNAs จีโนมของสายพันธุ์และสายพันธุ์เชื้อ Salmonella Shigella, เปรียบเทียบ multiplex PCR 1 หน้าดีเอ็นเอ / หลอด mLAMP ได้รับอนุญาตการตรวจสอบการปนเปื้อนของตัวอย่างนมเทียมโดยสายพันธุ์และสายพันธุ์เชื้อ Salmonella Shigella ในระดับเริ่มต้นของการฉีดวัคซีนประมาณ 5 CFU / 10 มิลลิลิตร สรุปได้ว่า mLAMP อธิบายไว้ที่นี่อาจจะสามารถอำนวยความสะดวกในการตรวจสอบพร้อมกันของเชื้อ Salmonella และ Shigella ในจำนวนมากของตัวอย่างอาหารซึ่งสามารถนำมาใช้เป็นวิธีการตรวจคัดกรองหลักและเป็นอาหารเสริมเพื่อวิธีการตรวจสอบคลาสสิก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

i wish you a merry christmas today is not a cold shiver.i wish you a merry christmas today is not a cold shiver.i wish you a merry christmas today is not a cold shiver.i wish you a merry christmas today is not a cold shiver.i wish you a merry christmas today is not a cold shiver.