2. Materials and methods2.1. Resear

2. Materials and methods
2.1. Research materials
Aspergillus terreus, the enzyme producing fungi, was obtained as
gift culture from the Department of Botany, Govt Arts and Science
College, Nandanam, Chennai, India.
2.2. Enzyme production by solid state fermentation (SSF)
Crude enzyme possessing the activities of
a-and b-galactosidase
was obtained by solid state fermentation using A. terreus. In this
method, wheat bran and water in the ratio of 1:1, containing 2.5%
(w/v) sodium chloride was used as substrate after autoclaving. A
culture containing 1200 spores/ml was used as inoculum for 100 g
solid substrate. A. terreus inoculated substrate was incubated at
37
C for 72 h to accomplish enzyme production by fermentation.
The fermented substrate was extracted by using 0.2 M acetate
buffer pH 5.0, to get the enzyme solution. The crude extract, thus
obtained was used for further studies like assay of galactosidases
and its efficacy to hydrolyse carbohydrates and proteoglycans from
the skin matrix.

2.3. Assay of
a-galactosidase activity
A suitably diluted enzyme solution obtained by acetate buffer
extraction was used for
a-galactosidase activity assay, according to
the method of Dey and Pridham (1972). Briefly, to 0.1 ml enzyme
aliquot was added 0.8 ml of 0.2 M acetate buffer, pH 5.0 and 0.1 ml
of 2 mM p-nitrophenyla-D-galactopyanoside
(PNPG). The solution
was mixed and incubated at 50
C for 15 min. The reaction was then
arrested by adding 3 ml of 0.2 Msodium carbonate solution and the
absorbance was measured. A standard was prepared by using
known concentration of PNPG with other reagents except the

enzyme. One unit of enzyme activity was defined as the amount of
enzyme which produced 1
mmol of p-nitrophenol min
under
assay condition. Activity of
a-galactosidase produced by SSF was
expressed as units/g dry fermented mass.
2.4. Assay of
b-galactosidase activity
b-galactosidase activity of the enzyme solution was assayed in
the same manner as
a-galacotosidase except that the substrate
used for this enzyme was O-nitrophenylb-D-galactopyanoside.
In
this assay, the amount of O-nitrophenol formed was determined by
measuring the absorbance at 420 nm (Miller, 1972).
2.5. Fibre opening study
In this study, salted goatskins (4e6 sqft area) were chosen as the
starting material which was dehaired conventionally and used as
substrate.
1

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 การวิจัยวัสดุTerreus aspergillus เอนไซม์ผลิตเชื้อ ได้รับเป็นวัฒนธรรมของขวัญจากภาควิชา พฤกษศาสตร์ รัฐบาลศิลปะ และวิทยาศาสตร์วิทยาลัย Nandanam เจนไน อินเดีย2.2. เอนไซม์ผลิต โดยหมักสถานะของแข็ง (SSF)มีกิจกรรมของเอนไซม์ดิบการ-b galactosidase และได้รับ โดยสถานะของแข็งหมักใช้ A. terreus ในการนี้วิธี รำข้าวสาลี และน้ำในอัตราส่วน 1:1 ประกอบด้วย 2.5%(w/v) โซเดียมคลอไรด์ถูกใช้เป็นพื้นหลังสปอร์ Aวัฒนธรรมที่ประกอบด้วย 1200 สปอร์/มล.ใช้เป็น inoculum สำหรับ 100 กรัมพื้นผิวแข็ง A. terreus พื้น inoculated incubated ที่37C สำหรับ 72 ชั่วโมงเพื่อให้บรรลุการผลิตเอนไซม์ โดยการหมักพื้นผิวหมักถูกแยก โดยใช้ 0.2 M อะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 5.0 จะได้รับโซลูชันเอนไซม์ ดิบสารสกัดจาก ดังนั้นได้ใช้สำหรับการศึกษาต่อเนื่องเช่นการทดสอบของ galactosidasesและ efficacy ของการ hydrolyse คาร์โบไฮเดรตและ proteoglycans จากเมตริกซ์ผิว2.3 การทดสอบของกิจกรรมที่ galactosidaseทางเอนไซม์เจือจางเหมาะสมได้ โดยบัฟเฟอร์ acetateใช้สำหรับดูดกิจกรรมที่ galactosidase assay ตามวิธีการของ Dey และ Pridham (1972) Briefly การเอนไซม์ 0.1 มล.ส่วนลงตัวเพิ่ม 0.8 ml ของบัฟเฟอร์ acetate 0.2 M, pH 5.0 และ 0.1 mlของ 2 มม. p nitrophenyla D galactopyanoside(PNPG) การแก้ปัญหาผสม และรับการกกน.C 15 นาที ปฏิกิริยาได้แล้วจับเพิ่ม 3 ml ของ 0.2 Msodium คาร์บอเนตโซลูชั่น และการค่าที่ถูกวัด จัดทำมาตรฐาน โดยใช้เรียกว่าความเข้มข้นของ PNPG กับเปื้อนอื่น ๆ ยกเว้นการเอนไซม์ หน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ซึ่งผลิต 1โมลของ p-nitrophenol นาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรมของเป็นต่อ-galactosidase โดย SSFแสดงเป็นหน่วย/กรัมแห้งหมักมวล2.4 การทดสอบของกิจกรรม b-galactosidaseกิจกรรม b-galactosidase โซลูชันเอนไซม์ถูก assayed ในลักษณะเดียวกันเป็นa galacotosidase ยกเว้นที่พื้นผิวใช้สำหรับเอนไซม์นี้ O nitrophenylb D galactopyanosideในทดสอบนี้ กำหนดจำนวน O-nitrophenol ที่เกิดขึ้นโดยวัดค่าที่ 420 nm (Miller, 1972)2.5. ไฟเบอร์เปิดศึกษาในการศึกษานี้ goatskins เค็ม (4e6 ตารางฟุตพื้นที่) ถูกเลือกให้เป็นวัตถุดิบเริ่มต้นที่ dehaired ตามอัตภาพ และใช้เป็นพื้นผิว1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . วิจัยวัสดุAspergillus terreus ที่ , เอนไซม์ที่ผลิตได้ เช่น เชื้อราของขวัญวัฒนธรรมจากภาควิชาพฤกษศาสตร์ ศิลปะ วิทยาศาสตร์ และรัฐบาลวิทยาลัย , nandanam , เชนไน , อินเดีย2.2 . การผลิตเอนไซม์จากการหมักของแข็ง ( SSF )เอนไซม์มีกิจกรรมและ b-galactosidaseได้จากการหมักของแข็งใช้ A . terreus ที่ . ในนี้วิธีการรำข้าวสาลี และน้ำ ในอัตราส่วน 1 : 1 , 2.5 % ประกอบด้วย( w / v ) โซเดียม คลอไรด์ที่ใช้เป็นวัตถุดิบตามอัตราส่วนโฟกัส . เป็นวัฒนธรรมที่มี 1200 สปอร์ต่อมิลลิลิตรปริมาณ 100 กรัม ใช้สำหรับของแข็งพื้นผิว A . terreus ที่ถูกบ่มเชื้อที่พื้นผิว37C เป็นเวลา 72 ชั่วโมงเพื่อให้บรรลุการผลิตเอนไซม์จากการหมักวัสดุหมักสกัดโดยใช้ 0.2 M อะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 5.0 จะได้รับสารละลายเอนไซม์ . สกัด จึงได้ถูกใช้สำหรับการศึกษาของ galactosidases เช่นการทดสอบและของหลักสูตรจึง cacy สุดคาร์โบไฮเดรตและ proteoglycans จากผิวหนังเมทริกซ์2.3 การทดสอบของกิจกรรม a-galactosidaseเป็นสามารถเจือจางสารละลายเอนไซม์ที่ได้จากอะซิเตทบัฟเฟอร์การสกัดที่ใช้สำหรับa-galactosidase กิจกรรมวิเคราะห์ตามวิธีการของพวกเขา และ pridham ( 1972 ) บรี fl Y , เอนไซม์ 0.1 มิลลิลิตรส่วนที่หารลงตัวเพิ่ม 0.8 มล. 0.2 M acetate buffer , pH 5.0 และ 0.1 มิลลิลิตรp-nitrophenyla-d-galactopyanoside 2 มม.( pnpg ) โซลูชั่นผสมบ่มที่อุณหภูมิ 50 และC เป็นเวลา 15 นาที ปฏิกิริยาแล้วจับเพิ่ม 3 มล. 0.2 msodium โซลูชั่นและคาร์บอเนตการดูดกลืนแสง คือ วัด มาตรฐานที่เตรียมไว้โดยใช้ความเข้มข้นของสารเคมีอื่น ๆที่รู้จักกัน pnpg ด้วยยกเว้นเอนไซม์ หนึ่งหน่วยของเอนไซม์คือ เดอ จึงเป็นยอดของเน็ดเอนไซม์ที่ผลิต 1p-nitrophenol มิลลิโมลของมินภายใต้ทดสอบเงื่อนไข กิจกรรมของa-galactosidase SSF ถูกผลิตโดยแสดงเป็นหน่วย / กรัมหมักมวล2.4 . การทดสอบของกิจกรรม b-galactosidaseb-galactosidase กิจกรรมของเอนไซม์ในสารละลายเอนไซม์ในลักษณะเดียวกัน เช่นa-galacotosidase ยกเว้นที่พื้นผิวใช้เอนไซม์มี o-nitrophenylb-d-galactopyanoside .ในวิธีนี้ ยอดเงินของ o-nitrophenol ก่อตั้งโดยกำหนดวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 420 nm ( มิลเลอร์ , 1972 )2.5 ไฟเบอร์ การศึกษาในการศึกษานี้ goatskins เค็ม ( พื้นที่ 4e6 ตารางฟุต ) ถูกเลือกเป็นวัสดุเริ่มต้นที่ dehaired ซึ่งใช้เป็นพื้นผิว1