Total genomic DNA was extracted usi

Total genomic DNA was extracted using a phenol/
chloroform method (Sambrook et al. 1989). A 590 base
pair (bp) fragment of the mitochondrially encoded
NADH dehydrogenase subunit 4 gene (ND-4) was
amplified using standard polymerase chain reaction
(PCR) protocols (Palumbi 1996a). Sequencing reactions
were performed using the Big dye terminators (Applied
Biosystems, Foster City, CA) and primers ND4LB
(Bielawski and Gold 2002) and SnapHND4 (5’-
GTGGGCTTTAGGGAGTCAGAG-3’) for each DNA
template. Cycle-sequenced products were electrophoresed
on an automated sequencer (ABI 377, Applied
Biosystems, Foster City, CA). Sequences were aligned
and protein coding was verified using SEQUENCHER (v 4.1,
Gene Codes, Ann Arbor, MI). The computer program
MACCLADE 4.0 (Maddison and Maddison 2000) was used
to identify individual mtDNA haplotypes. Sequences of
all haplotypes were deposited in GENBANK. Accession
numbers for the 60 haplotypes of L. campechanus are
AY600304–AY600318, AY600320–AY600357, and
AY600359–AY600365; accession numbers for 4 haplotypes
of L. peru are AY600366–AY600369

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอการรวมถูกสกัดโดยใช้ฟีนอล /คลอโรฟอร์มวิธี (Sambrook et al. 1989) 590 ที่ฐานคู่ (bp) ส่วนของรหัส mitochondriallyได้ NADH dehydrogenase ย่อย 4 ยีน (ND-4)ขยายโดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสที่มาตรฐาน(PCR) โพรโทคอล (Palumbi 1996a) ปฏิกิริยาการจัดลำดับดำเนินการโดยใช้สีย้อมใหญ่ต่อ (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ เมืองฟอสเตอร์ CA) และไพรเมอร์ ND4LB(Bielawski และทอง 2002) และ SnapHND4 (5'-GTGGGCTTTAGGGAGTCAGAG-3') สำหรับดีเอ็นเอแต่ละแม่แบบ ผลิตภัณฑ์เรียงลำดับรอบที่ electrophoresedบน sequencer การอัตโนมัติ (ABI 377 ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ เมืองฟอสเตอร์ CA) มีจัดลำดับและรหัสโปรตีนถูกตรวจสอบโดยใช้ SEQUENCHER (v 4.1MI ของรหัส Ann Arbor ยีน) โปรแกรมคอมพิวเตอร์ใช้ MACCLADE 4.0 (Maddison และ Maddison 2000)ระบุแต่ละ mtDNA haplotypes ลำดับของทั้งหมด haplotypes ที่ฝากใน GENBANK ภาคยานุวัติเลขสำหรับ 60 haplotypes L. campechanusAY600304 – AY600318, AY600320 – AY600357 และAY600359 – AY600365 หมายเลขทะเบียนสำหรับ 4 haplotypesL. เปรูเป็น AY600366 – AY600369

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้ฟีนอล /
วิธีคลอโรฟอร์ม (Sambrook et al. 1989) 590 ฐาน
คู่ (BP) ส่วนของเข้ารหัส mitochondrially
NADH dehydrogenase subunit 4 ยีน (ND-4) ถูก
ขยายโดยใช้วิธี Polymerase chain reaction มาตรฐาน
(PCR) โปรโตคอล (Palumbi 1996a) ปฏิกิริยา Sequencing
ถูกดำเนินการโดยใช้สีย้อม Terminators บิ๊ก (Applied
Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) และไพรเมอร์ ND4LB
(Bielawski และสีทอง 2002) และ SnapHND4 (5'-
GTGGGCTTTAGGGAGTCAGAG-3 ') สำหรับแต่ละดีเอ็นเอ
แม่แบบ ผลิตภัณฑ์รอบติดใจถูก electrophoresed
ในซีเควนอัตโนมัติ (ABI 377 ประยุกต์
Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) ลำดับถูกจัดชิด
และการเข้ารหัสโปรตีนถูกตรวจสอบโดยใช้ SEQUENCHER (V 4.1
รหัสยีน Ann Arbor, MI) โปรแกรมคอมพิวเตอร์ที่
MACCLADE 4.0 (Maddison และ Maddison 2000) ถูกนำมาใช้
เพื่อระบุ haplotypes mtDNA ของแต่ละบุคคล ลำดับของ
haplotypes ทั้งหมดถูกฝากไว้ใน GenBank ภาคยานุวัติ
หมายเลข 60 haplotypes ลิตร campechanus มี
AY600304-AY600318, AY600320-AY600357 และ
AY600359-AY600365; หมายเลขภาคยานุวัติ 4 haplotypes
ลิตรเปรู AY600366-AY600369

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รวมจีโนมดีเอ็นเอโดยใช้ฟีนอล /วิธีคลอโรฟอร์ม ( sambrook et al . 1989 ) มันเป็นฐานคู่ ( BP ) ส่วนของ mitochondrially การเข้ารหัสNADH dehydrogenase ซึ่ง 4 ยีน ( nd-4 ) คือขยายการใช้มาตรฐานการใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส( PCR ) โปรโตคอล ( palumbi 1996a ) ปฏิกิริยาลำดับการใช้จักรกลสังหารสีใหญ่ ( ใช้ซึ่ง ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย ) และไพรเมอร์ nd4lb( bielawski และทอง 2002 ) และ snaphnd4 ( " - 5gtgggctttagggagtcagag-3 " ) แต่ละ ดีเอ็นเอแม่แบบ รอบนี้สินค้ามี electrophoresedในมูลค่า ( ABI 377 , ประยุกต์ซึ่ง ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย ) ลำดับ ชิดและการเข้ารหัสโปรตีนยืนยันใช้ sequencher ( V 4.1 ,รหัส , Ann Arbor ยีน มิ ) โปรแกรมคอมพิวเตอร์macclade 4.0 ( แมดดิสัน และ แมดดิสัน 2000 ) ถูกใช้เพื่อระบุบุคคลแสดงผล . ลำดับของทุกคนแฮปฝากเงินบริเวณ ภาคยานุวัติหมายเลข 60 มี campechanus haplotypes Lay600304 – ay600318 ay600320 – ay600357 , และ ,ay600359 – ay600365 ; เข้าเลข 4 ผลของเปรู ay600366 – ay600369 L