Cohesive-end restriction cloning ca

Cohesive-end restriction cloning can be described in a relatively standard series of steps: First, the insert is designed with restriction sites that also occur in the vector multiple cloning site (MCS), but not elsewhere in the insert or vector. Second, the insert and plasmid are digested in separate reactions, using the chosen enzyme(s). Following digestion, the plasmid is dephosphorylated, and both insert and plasmid are purified to remove all enzymes. In the remaining steps the insert is ligated into the plasmid, and the ligated plasmid is transformed into E. coli. Below, the method is described in more detail with added tips that further increase its flexibility

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สามารถอธิบายควบท้ายจำกัดโคลนค่อนข้างมาตรฐานลำดับขั้นตอน: ครั้งแรก การออกแบบการแทรก กับไซต์ข้อจำกัดที่เกิดขึ้นในเวกเตอร์หลายไซต์ cloning (เอ็มซี), แต่ไม่อื่น ๆ แทรกหรือเวกเตอร์ได้ สอง แทรกและ plasmid เป็นเจ่าในปฏิกิริยาแยก ใช้ enzyme(s) ท่าน ต่อการย่อยอาหาร dephosphorylated plasmid และแทรกและ plasmid บริสุทธิ์เอาเอนไซม์ทั้งหมด ในขั้นตอนเหลือ การแทรกจะควบเป็น plasmid และ plasmid ควบแก่น E. coli ด้านล่าง วิธีการอธิบายไว้ในรายละเอียดเพิ่มเติมพร้อมคำแนะนำเพิ่มที่ต่อ เพิ่มความยืดหยุ่นของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เหนียวสิ้นโคลนข้อ จำกัด ที่สามารถอธิบายในชุดที่ค่อนข้างมาตรฐานขั้นตอนแรกใส่ที่ถูกออกแบบมากับเว็บไซต์ข้อ จำกัด ที่เกิดขึ้นในเว็บไซต์ของเวกเตอร์โคลนหลาย (MCS) แต่ไม่ได้ที่อื่น ๆ ในการแทรกหรือเวกเตอร์ ประการที่สองแทรกและพลาสมิดที่มีปฏิกิริยาย่อยที่แยกจากกันโดยใช้เอนไซม์ที่ได้รับการแต่งตั้ง (s) ต่อไปนี้การย่อยอาหารพลาสมิดเป็น dephosphorylated และทั้งสองแทรกและพลาสมิดบริสุทธิ์เอนไซม์ที่จะลบทั้งหมด ในขั้นตอนที่เหลือจะถูกแทรกเข้าไปใน ligated พลาสมิดและพลาสมิด ligated จะเปลี่ยนเป็นเชื้อ E. coli ด้านล่างนี้วิธีการที่จะอธิบายในรายละเอียดมากขึ้นด้วยเคล็ดลับเสริมว่าเพิ่มความยืดหยุ่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปลายเหนียวจำกัดการโคลนนิ่งสามารถอธิบายในชุดค่อนข้างมาตรฐานของขั้นตอนแรก แทรกมาด้วยข้อ จำกัด เว็บไซต์ที่ยังเกิดขึ้นในเวกเตอร์หลายโคลนไซต์ ( MCS ) แต่ไม่อื่นแทรกหรือเวกเตอร์ ที่สอง , การแทรกและพลาสมิดเข้าใจในปฏิกิริยาการแยกโดยใช้เอนไซม์ที่เลือก ( s ) ต่อไปนี้เป็น dephosphorylated การย่อยอาหาร , พลาสมิด ,และทั้งสองแทรกและพลาสมิดจะแยกเอาเอนไซม์ ในขั้นตอนที่เหลือใส่ผูกเข้าสู่พลาสมิดและผูกอยู่ ถูกเปลี่ยนเป็น E . coli . ด้านล่างเป็นวิธีการอธิบายในรายละเอียดเพิ่มมากขึ้นด้วยเคล็ดลับเพิ่มความยืดหยุ่นของ