[3H]-Thymidine Incorporation.Cell p

[3H]-Thymidine Incorporation.
Cell proliferation was deter-
mined by measuring the incorporation of [3H]-thymidine into DNA
of cells cultured in 24-well plates.
17,18 After induction of quiescence, the
cells were stimulated with high glucose (30 mM) or normal glucose
concentration (5.5 mM) in the presence or absence of EGCG for the
indicated times. Thereafter, [3H]-thymidine (1μCi/mL) was added to
the growth medium of each well 6 h prior to the measurements. At the
end of incubation, the medium was removed and the cells were treated
with 0.25 mL of 0.05% trypsin
0.53 mmol/L EDTA for 5 min and
diluted to 10 mL with a balanced electrolyte solution. The cells were
then treated with 10% trichloroacetic acid to precipitate acid-insoluble
materials from which the DNA was extracted with 0.1 N NaOH. The
DNA was collected on a Whatman GF/B filter and washed twice with
5 mL of ice-cold PBS. The filter was then cut and shaken in 3.5 mL of
scintillation fluid for 24 h before counting in a liquid scintillation counter
(Beckman LS6500). Data are presented as [
3
H]-thymidine uptake per
microgram of protein. The protein refers to the total protein of the cell
sample.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

[3H] -Thymidine ประสานถูกขัดขวางการงอกเซลล์-ขุด โดยวัดประสาน [3H] -thymidine เป็นดีเอ็นเอเซลล์อ่างในดี 24 แผ่น17,18 หลังจากการเหนี่ยวนำของ quiescence การเซลล์ที่ถูกกระตุ้น ด้วยปกติน้ำตาลกลูโคสหรือกลูโคสสูง (30 mM)ความเข้มข้น (5.5 mM) ในหรือ EGCG ในการระบุเวลา หลังจากนั้น, [3H] -thymidine (มล 1μCi) ถูกเพิ่มเข้าไปขนาดกลางเจริญเติบโตของแต่ละ h 6 ดีก่อนการประเมิน ที่จุดสิ้นสุดของคณะทันตแพทยศาสตร์ สื่อที่ถูกเอาออก และเซลล์ได้รับการรักษากับ 0.25 mL ของทริปซิน 0.05%0.53 mmol/L EDTA ใน 5 นาที และผสมกับ 10 mL กับการแก้ปัญหาสมดุลอิเล็กโทร เซลล์ได้รับ 10% กรด trichloroacetic เพื่อ precipitate ไม่ละลายกรดแล้ววัสดุที่ดีเอ็นเอถูกแยก ด้วย 0.1 N NaOH ที่ดีเอ็นเอถูกรวบรวมในตัวกรอง Whatman GF/B และล้างสองครั้งด้วย5 mL ของ PBS ฉ่ำ ตัวกรองถูกตัด แล้วเขย่าใน 3.5 mL ของน้ำมัน scintillation ใน 24 ชมก่อนตรวจนับเคาน์เตอร์ scintillation เหลว(Beckman LS6500) ข้อมูลจะแสดงเป็น[3H] -ดูดซับ thymidine ต่อmicrogram โปรตีน โปรตีนถึงโปรตีนทั้งหมดของเซลล์ตัวอย่างการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

[3H] -Thymidine จดทะเบียน.
การแพร่กระจายของเซลล์ได้รับการยับยั้ง
การทำเหมืองโดยการวัดการรวมตัวกันของ [3H] -thymidine เป็น DNA
ของเซลล์เพาะเลี้ยงในแผ่น 24 หลุม.
17,18 หลังจากการเหนี่ยวนำความสงบ
เซลล์ถูกกระตุ้นด้วยน้ำตาลสูง ( 30 มิลลิเมตร) หรือกลูโคสปกติ
ความเข้มข้น (5.5 มิลลิเมตร) ในการแสดงตนหรือไม่มี EGCG สำหรับ
เวลาที่ระบุไว้ หลังจากนั้นเป็นต้นมา [3H] -thymidine (1μCi / มิลลิลิตร) ถูกบันทึกอยู่ใน
สื่อการเจริญเติบโตของแต่ละดี 6 ชั่วโมงก่อนที่จะมีการตรวจวัด ใน
ตอนท้ายของการบ่มกลางจะถูกลบออกและเซลล์ได้รับการรักษา
ด้วย 0.25 มิลลิลิตร trypsin 0.05%
0.53 มิลลิโมล EDTA / ลิตรเป็นเวลา 5 นาทีและ
ลดลงเหลือ 10 มิลลิลิตรสารละลายอิเลสมดุล เซลล์ที่ได้รับ
การรักษาแล้วด้วยกรดไตรคลอโร 10% ที่จะเกิดการตกตะกอนกรดที่ไม่ละลายน้ำ
ซึ่งวัสดุจากดีเอ็นเอถูกสกัดด้วย 0.1 N NaOH
ดีเอ็นเอถูกรวบรวมไว้ใน Whatman GF / B กรองและล้างครั้งที่สองมี
5 มิลลิลิตรพีบีเอสเย็น กรองจากนั้นก็ตัดและเขย่า 3.5 มิลลิลิตรของ
ของเหลวประกายเป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อนที่จะนับในประกายของเหลวเคาน์เตอร์
(เบคค์ LS6500) ข้อมูลจะถูกนำเสนอในฐานะ [
3
H] การดูดซึม -thymidine ต่อ
ไมโครกรัมของโปรตีน โปรตีนหมายถึงโปรตีนรวมของเซลล์
ตัวอย่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

[ 3 ] - เพียงบริษัท เซลล์ถูกขัดขวาง proliferation
-
ขุดโดยการวัดการ [ 3 ] - เพียงเป็นดีเอ็นเอของเซลล์เพาะเลี้ยง 24 ดี

17,18 จาน หลังจากการเหนี่ยวนำการเงียบสงบ ,
เซลล์ได้รับการกระตุ้นด้วยกลูโคสสูง ( 30 มม. ) หรือปกติ ความเข้มข้นของกลูโคส
( 5.5 มม. ) ในการแสดงตนหรือขาดของ EGCG ใน
พบครั้ง หลังจากนั้น[ 3 ] - ไทมิดีน ( 1 μ CI / ml ) คือการเพิ่มการเจริญเติบโตปานกลางของแต่ละอย่างดี
6 H ก่อนการวัด ที่ 1
จบ สื่อจะถูกลบออกและเซลล์จะถูก
0.25 มิลลิลิตรมีค่าเท่ากับ 0.05 %
มิลลิโมล / ลิตรตามลำดับเป็นเวลา 5 นาทีและ
10 มล. เจือจางด้วยสารละลายอิเล็กโทรไลต์สมดุล เซลล์ถูก
งั้นรักษาด้วย 10% กรดไตรคลอโรอะซิติกให้ตะกอนที่ไม่ละลายในกรด
วัสดุที่ดีเอ็นเอด้วย 0.1 N NaOH
เก็บดีเอ็นเอบน whatman GF / B กรองและล้างสองครั้งกับ
5 ml ของ PBS เย็นน้ำแข็ง ตัวกรองที่ถูกตัดแล้ว และหวั่นไหวใน 3.5 ml ของของเหลว 24 H
ข้อมูลก่อนที่จะนับในประกายน้ำเคาน์เตอร์
( แบคแมน ls6500 ) ข้อมูลจะแสดงเป็น [
3
h ] - เพียงใช้ต่อ
ไมโครกรัมโปรตีนโปรตีนหมายถึงโปรตีนทั้งหมดในเซลล์
ตัวอย่าง