Digoxigenin tagging of Cpn60 gene f

Digoxigenin tagging of Cpn60 gene fragments by direct PCR incorporation of
digoxigenin-11-dUTP. Extraction of crude DNA from bacterial cultures by the
Instagene method (Bio-Rad Laboratories, Richmond, Calif.) was performed
according to the manufacturer’s protocol, except that instead of picking a single
colony from a blood agar plate, a disposable inoculating loop was used to sweep
across the culture plate to harvest multiple colonies. The PCR protocol was as
described in reference 16. The primers for PCR were those described in the
following section. The digoxigenin-labeled Cpn60 PCR products, without purification,
were diluted 1:100 in hybridization buffer (53 SSC [13 SSC is 0.15 M
NaCl and 0.015 M sodium citrate], 50% formamide, 2% Boehringer Mannheim
blocking reagent, 0.1% N-lauryl sarcosine, 0.02% SDS and used directly for
reverse checkerboard hybridization.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Digoxigenin แท็กบางส่วนของยีน Cpn60 โดยจดทะเบียนบริษัท PCR โดยตรงของdigoxigenin-11-dUTP สกัดน้ำมันดิบดีเอ็นเอจากแบคทีเรียวัฒนธรรมโดยการดำเนินการวิธี Instagene (เชื้อ ริชมอนด์ รัฐแคลิฟอร์เนีย)ตามโพรโทคอลผู้ผลิต ยกเว้นที่แทนการเบิกสินค้าเดียวโคโลนีจากจานวุ้นเลือด ทิ้งที่ inoculating loop ใช้กวาดข้ามแผ่นวัฒนธรรมเกี่ยวอาณานิคมหลาย โพรโทคอล PCR เป็นอธิบายไว้ในการอ้างอิง 16 ไพรเมอร์สำหรับ PCR ถูกที่อธิบายไว้ในการส่วนต่อไปนี้ ป้าย digoxigenin Cpn60 PCR ผลิตภัณฑ์ ไม่บริสุทธิ์ที่เจือจาง 1: 100 ในบัฟเฟอร์ hybridization (53 SSC [13 SSC คือ 0.15 เมตรNaCl และ 0.015 M โซเดียมซิเตรต], formamide 50%, 2% Boehringer มานไฮม์ปิดกั้นรีเอเจนต์ 0.1% N-lauryl สิ่งที่ sarcosine, 0.02% SDS และใช้โดยตรงสำหรับกลับ hybridization ตารางหมากรุก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การติดแท็ก digoxigenin ของ Cpn60 เศษยีนโดยการรวมตัวกัน PCR โดยตรงของ
digoxigenin-11-dUTP การสกัดดีเอ็นเอน้ำมันดิบจากวัฒนธรรมแบคทีเรียโดย
วิธี Instagene (Bio-Rad ห้องปฏิบัติการริชมอนด์, Calif.) ได้ดำเนินการ
ตามโปรโตคอลของผู้ผลิตยกเว้นว่าแทนที่จะเลือกเดียว
อาณานิคมจากแผ่นวุ้นเลือดห่วงฉีดวัคซีนทิ้งถูกนำมาใช้ จะกวาด
ทั่วแผ่นวัฒนธรรมที่จะเก็บเกี่ยวหลายอาณานิคม โปรโตคอล PCR เป็น
อธิบายในการอ้างอิง 16 ไพรเมอร์สำหรับพีซีอาร์มีผู้อธิบายไว้ใน
ส่วนต่อไปนี้ ผลิตภัณฑ์ Cpn60 วิธี PCR digoxigenin ป้ายโดยไม่ต้องฟอก
เจือจาง 1: 100 ในบัฟเฟอร์ hybridization (53 SSC [13 SSC คือ 0.15 M
NaCl และ 0.015 M โซเดียมซิเตรต] 50% formamide, 2% Boehringer Mannheim
ปิดกั้นสาร 0.1% N sarcosine -lauryl, SDS 0.02% และใช้โดยตรงสำหรับ
การผสมพันธุ์หมากรุกย้อนกลับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ติดแท็กของ cpn60 ยีนโดยวิธี PCR โดยการแตกdigoxigenin-11-dutp . การสกัดดีเอ็นเอจากแบคทีเรียบวัฒนธรรมโดยวิธี instagene ( ไบโอ ราดห้องปฏิบัติการ , ริชมอนด์ , แคลิฟอร์เนีย ) กำหนดตามขั้นตอนของผู้ผลิต ยกเว้นที่แทนการเลือกเดียวอาณานิคมจากเลือดวุ้น จาน ณห่วงใช้กวาดทิ้งข้ามวัฒนธรรมจานเพื่อเก็บเกี่ยวหลายอาณานิคม pcr protocol คืออธิบายไว้ในการอ้างอิง 16 ไพรเมอร์สำหรับ PCR เป็นผู้อธิบายในส่วนต่อไปนี้ . ที่ติดฉลากผลิตภัณฑ์ PCR cpn60 โดยไม่บริสุทธิ์ลดเบส 100 ในบัฟเฟอร์ ( 53 SSC [ 13 SSC เป็น 0.15 เมตร3 M โซเดียมคลอไรด์และโซเดียมซิเตรต ] 50% Formamide 2% Boehringer Mannheimการปิดกั้นรีเอเจนต์ , 0.1% n-lauryl ซาร์โคซีน 0.02 % SDS และใช้โดยตรงสำหรับย้อนกลับทันตาเห็นลูกผสม