Air-dried, powdered leaves (1 kg) w

Air-dried, powdered leaves (1 kg) were
homogenized in H2O/acetone (30:70, v/v, 22 L) at room temperature.
The filtered homogenate was concentrated in vacuo to 1.5 L at
temperatures not exceeding 40 °C. The concentrated homogenate was
applied to a Diaion HP-20 (5 i.d. × 50 cm) column and eluted with
H2O, MeOH/H2O (40:60, v/v), MeOH, and acetone, successively, to
give the corresponding H2O (116 g), MeOH/H2O (40:60) (52 g),
MeOH (12.4 g), and acetone (0.629 g) fractions, respectively. The
respective fractions were fractionated by monitoring normal- and
reversed-phase HPLC. The MeOH/H2O (40:60, v/v) fraction (52 g)
was divided into two equal portions (26 g each). Each portion was
separately subjected to a Toyopearl HW-40 (coarse) column (2.2 i.d.
× 65 cm) and eluted with EtOH/H2O (50:50 → 70:30, v/v), EtOH/
H2O (70:30, v/v)/acetone/H2O (70:30, v/v) (90:10 → 80:20 →
70:30 → 50:50, v/v), and acetone/H2O (70:30, v/v), successively,
collecting 500 mL fractions. The corresponding fractions from both
Toyopearl columns were combined as seven Toyopearl (T1) fractions
(T1−7).
The T1 fraction 3 (6.12 g), eluted with EtOH/H2O (70:30, v/v)/
acetone/H2O (70:30, v/v) (90:10, v/v), was subjected to the same
Toyopearl (coarse) column and eluted with EtOH/H2O (70:30, v/v),
EtOH/H2O (70:30, v/v)/acetone/H2O (70:30, v/v) (90:10), and
acetone/H2O (70:30, v/v), successively, collecting 900 drop fractions,
to give 700 Toyopearl (T2) fractions. The T2 fractions 158−183 (322
mg), eluted with EtOH/H2O (70:30, v/v), were subjected to an MCIgel
CHP-20P column (1.1 i.d. × 35 cm) with H2O and H2O/MeOH
(85:15 → 80:20 → 75:25 → 70:30 and 0:100, v/v). The H2O−MeOH
(80:20, v/v) eluate (31 mg) was rechromatographed over an MCI-gel
CHP-20P column (1.1 i.d. × 21 cm) with H2O and H2O/MeOH
(85:15 → 80:20 and 0:100, v/v). A preparative HPLC purification
with solvent I of the late eluate with H2O/MeOH (85:15, v/v) (7 mg)
yielded a pure sample of nilotinin M5 (1) (2.1 mg). Rechromatography
of the H2O/MeOH (80:20, v/v) eluate (63 mg) over the same
MCI-gel CHP-20P column and by the same elution pattern afforded a
H2O/MeOH (75:25, v/v) eluate (19.8 mg), which upon preparative
HPLC purification with solvent II gave nilotinin D10 (4) (4.5 mg).
The T2 fractions 184−210 (297 mg), eluted with EtOH/H2O (70:30,
v/v), were subjected to an MCI-gel CHP-20P column (1.1 i.d. × 35
cm) with H2O and H2O/MeOH (85:15 → 80:20 → 75:25 → 70:30
and 0:100, v/v). The early eluate with H2O/MeOH (80:20, v/v) (33.7
mg) was rechromatographed over an MCI-gel CHP-20P column (1.1
i.d. × 21 cm) isocratically with H2O/MeOH (85:15, v/v), followed by
preparative HPLC purification of the eluate (21 mg) with solvent II,
affording an additional pure sample (8.2 mg) of nilotinin M5 (1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มี air-dried ผงใบไม้ (1 กิโลกรัม)homogenized เป็นกลุ่มใน H2O/อะ ซีโตน (30:70, v/v, 22 L) ที่อุณหภูมิห้องHomogenate กรองเข้มข้นใน vacuo ไป 1.5 L ที่อุณหภูมิไม่เกิน 40 องศาเซลเซียส Homogenate เข้มข้นได้ใช้เป็น Diaion HP-20 (ประชาชน 5 × 50 ซม.) คอลัมน์ และ eluted ด้วยH2O ทา นอ/H2O (40:60, v/v), ทานอ และอะซิ โตน ติด ๆ กัน การให้ H2O ที่สอดคล้องกัน (116 กรัม), H2O ทานอ (40:60) (52 กรัม),ทานอ (12.4 กรัม), และเศษ ส่วนอะซีโตน (0.629 กรัม) ตามลำดับ ที่ส่วนเกี่ยวข้องถูกแบ่ง โดยการตรวจสอบปกติ - และระยะกลับ HPLC ทา นอ/H2O (40:60, v/v) เศษส่วน (52 กรัม)ถูกแบ่งออกเป็นสองส่วนเท่ากัน (26 กรัมละ) แต่ละส่วนได้แยกต่างหากภายใต้คอลัมน์ Toyopearl HW-40 (หยาบ) (2.2 ประชาชน× 65 ซม.) และ eluted กับ EtOH/H2O (คนละครึ่ง→ 70:30, v/v), EtOH /เอชทูโอ (70:30, v/v) อะซี โตน/H2O (70:30, v/v) (90:10 → 80:20 →คนละครึ่ง→ 70:30, v/v), และอะซี โตน/H2O (70:30, v/v), ติด ๆ กันรวบรวมเศษขนาด 500 มล. ส่วนที่เกี่ยวข้องจากทั้งสองคอลัมน์ Toyopearl ถูกรวมเป็นเจ็ดส่วน Toyopearl (T1)(T1−7)T1 เศษส่วน 3 (6.12 กรัม), eluted กับ EtOH/H2O (70:30, v/v) /อะซี โตน/H2O (70:30, v/v) (90:10, v/v), ถูกต้องเหมือนกันคอลัมน์ (หยาบ) Toyopearl และ eluted กับ EtOH/H2O (70:30, v/v),EtOH/H2O (70:30, v/v) อะซี โตน/H2O (70:30, v/v) (90:10), และอะซี โตน/H2O (70:30, v/v), ติด ๆ กัน รวบรวมเศษส่วนปล่อย 900เพื่อให้เศษ Toyopearl (T2) 700 158−183 เศษส่วน T2 (322mg), eluted กับ EtOH/H2O (70:30, v/v) MCIgel ถูกต้องคอลัมน์ CHP - 20P (1.1 ประชาชน× 35 cm) กับ H2O H2O/ทา นอ(85:15 → 80:20 → 75:25 → 70:30 และ 0:100, v/v) H2O−MeOH(80:20, v/v) eluate (31 มิลลิกรัม) มี rechromatographed ผ่านการ MCI-เจคอลัมน์ CHP - 20P (1.1 ประชาชน× 21 cm) กับ H2O H2O/ทา นอ(85:15 → 80:20 และ 0:100, v/v) การ preparative HPLC ฟอกด้วยตัวทำละลายฉัน eluate สายกับ H2O/ทา นอ (85:15, v/v) (7 มิลลิกรัม)หาตัวบริสุทธิ์อย่าง nilotinin M5 (1) (2.1 มิลลิกรัม) Rechromatographyของ eluate H2O/ทา นอ (80:20, v/v) (63 มิลลิกรัม) มากกว่าเหมือนกันคอลัมน์ CHP - 20P MCI เจล และรูป elution แบบเดียวกันนี่เป็นH2O/ทา นอ (75:25, v/v) eluate (19.8 มิลลิกรัม), ซึ่งเมื่อ preparativeHPLC ฟอก ด้วยตัวทำละลาย II ให้ nilotinin D10 (4) (4.5 mg)184−210 เศษส่วน T2 (297 มิลลิกรัม), eluted กับ H2O EtOH (70:30v/v), คอลัมน์ที่มี MCI เจ CHP - 20 P (1.1 ประชาชน× 35 ถูกต้องcm) กับ H2O H2O/ทา นอ (85:15 → 80:20 → 75:25 → 70:30และ 0:100, v/v) Eluate ต้นกับ H2O/ทา นอ (80:20, v/v) (33.7mg) มี rechromatographed ผ่านคอลัมน์ที่มี MCI เจ CHP - 20 P (1.1ประชาชน× 21 cm) isocratically กับ H2O/ทา นอ (85:15, v/v), ตามด้วยpreparative HPLC ฟอกของ eluate (21 มิลลิกรัม) กับตัวทำละลาย IIaffording บริสุทธิ์ตัวอย่างเพิ่มเติม (8.2 มิลลิกรัม) ของ nilotinin M5 (1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อากาศแห้ง, ผงใบ (1 กิโลกรัม)
ถูกปั่นในH2O / อะซิโตน (30:70, ปริมาตร / ปริมาตร 22 ลิตร) ที่อุณหภูมิห้อง.
homogenate กรองเข้มข้นในสุญญากาศ 1.5
ลิตรที่อุณหภูมิไม่เกิน40 องศาเซลเซียส homogenate
เข้มข้นถูกนำไปใช้กับDiaion HP-20 (5 รหัส× 50 ซม.) และคอลัมน์ชะกับ
H2O, เมธานอล / H2O (40:60, v / v),
เมธานอลและอะซีโตนอย่างต่อเนื่องเพื่อให้สอดคล้องH2O ( 116 กรัม), เมธานอล / H2O (40:60) (52 กรัม),
เมธานอล (12.4 กรัม) และอะซีโตน (0.629 กรัม) เศษส่วนตามลำดับ
เศษส่วนนั้นถูก fractionated
โดยการตรวจสอบจำหน่ายทั่วไปกลับเฟสHPLC เมธานอล / H2O (40:60, v / v) ส่วน (52 กรัม)
แบ่งออกเป็นสองส่วนเท่ากัน (26 กรัม) ส่วนที่แต่ละคนได้รับภายใต้แยกไป Toyopearl HW-40 (หยาบ) คอลัมน์ (2.2 รหัส× 65 ซม.) และชะด้วย EtOH / H2O (50:50 → 70:30, v / v), EtOH / H2O (70:30, v / v) / อะซิโตน / H2O (70:30, v / v) (90:10 →→ 80:20 70:30 50:50 →, v / v) และอะซีโตน / H2O (70:30, v / โวลต์) อย่างต่อเนื่อง, การจัดเก็บภาษี 500 มิลลิลิตรเศษส่วน โดยเศษที่สอดคล้องกันจากทั้งคอลัมน์ Toyopearl ถูกรวมกันเป็นเจ็ด Toyopearl (T1) เศษส่วน (T1-7). เศษ T1 3 (6.12 กรัม) ชะด้วย EtOH / H2O (70:30, v / v) / อะซิโตน / H2O ( 70:30, v / v) (90:10, v / v) ถูกยัดเยียดให้เดียวกันToyopearl (หยาบ) และคอลัมน์ชะด้วย EtOH / H2O (70:30, v / v), EtOH / H2O (70: 30 v / v) / อะซิโตน / H2O (70:30, v / v) (90:10) และอะซีโตน/ H2O (70:30, v / v) อย่างต่อเนื่องการจัดเก็บภาษีลดลง 900 เศษส่วน, ที่จะให้ 700 Toyopearl (T2) เศษส่วน โดยเศษ T2 158-183 (322 มก.) ชะด้วย EtOH / H2O (70:30, v / v) ถูกยัดเยียดไปยัง MCIgel คอลัมน์ CHP-20P (1.1 รหัส× 35 ซม.) กับ H2O H2O และ / เมธานอล(85 : 15 →→ 80:20 75:25 70:30 →และ 0: 100 v / v) H2O-เมธานอล(80:20, v / v) eluate (31 มก.) ได้รับการ rechromatographed กว่าเเมเจลคอลัมน์CHP-20P (1.1 รหัส× 21 ซม.) กับ H2O H2O และ / เมธานอล(85:15 80:20 → และ 0: 100 v / v) บริสุทธิ์ HPLC เพื่อเตรียมกับI ตัวทำละลายของ eluate ปลายกับ H2O / เมธานอล (85:15, v / v) (7 มก.) ให้ผลตัวอย่างบริสุทธิ์ nilotinin M5 (1) (2.1 มก.) Rechromatography ของ H2O / เมธานอล (80:20, v / v) eluate (63 มก.) ในช่วงเดียวกันเเมเจลคอลัมน์CHP-20P และรูปแบบการชะเดียวกันอึดH2O / เมธานอล (75:25, v / v) eluate (19.8 มก.) ซึ่งเมื่อเตรียมการทำให้บริสุทธิ์ด้วยHPLC สองตัวทำละลายให้ nilotinin D10 (4) (4.5 มก.) โดยเศษ T2 184-210 (297 มก.) ชะด้วย EtOH / H2O (70:30, v / v) ถูกยัดเยียดให้กับเเมเจลคอลัมน์ CHP-20P (1.1 รหัส× 35 ซม.) กับ H2O H2O และ / เมธานอล (85:15 80:20 →→→ 75:25 70:30 และ 0: 100 v / v) . eluate ต้นกับ H2O / เมธานอล (80:20, v / v) (33.7 มก.) ได้รับการ rechromatographed กว่าเเมเจลคอลัมน์ CHP-20P (1.1 รหัส× 21 ซม.) isocratically กับ H2O / เมธานอล (85:15, v / โวลต์) ตามด้วยการทำให้บริสุทธิ์HPLC เตรียมของ eluate นี้ (21 มก.) ที่มีตัวทำละลายที่สองเจตนารมณ์ตัวอย่างบริสุทธิ์เพิ่มเติม(8.2 มก.) ของ nilotinin M5 (1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เครื่องอบแห้ง , ใบผง ( 1 กก. )
บดใน H2O / อะซิโตน ( 30 : 70 , V / V , 22 ลิตร ) ที่อุณหภูมิห้อง กรองแยก
ข้นใน vacuo 1.5 ลิตรที่อุณหภูมิไม่เกิน 40 องศา C .

แบบแยกเป็นใช้กับ diaion hp-20 ( 5 ไอดี× 50 เซนติเมตร ) และคอลัมน์ตัวอย่างที่มีปริมาณ /
H2O H2O ( 40 : 60 , V / V ) , ปริมาณ , และอะซีโตน อย่างต่อเนื่อง

ให้ H2O ที่สอดคล้องกัน ( 116 กรัม )ปริมาณ / H2O ( 40 : 60 ) ( 52 G )
เมทิลแอลกอฮอล์ ( 12.4 กรัม ) และอะซิโตน ( 0.629 กรัม ) ส่วน ตามลำดับ
ส่วนเกี่ยวข้องถูกพบโดยการตรวจสอบปกติและ
reversed-phase HPLC . ส่วนปริมาณ / H2O ( 40 : 60 , V / V ) เศษส่วน ( 52 g )
ถูกแบ่งออกเป็นสองส่วนเท่ากัน ( 26 กรัมแต่ละครั้ง ) แต่ละส่วนถูก
ต่างหากต้อง toyopearl hw-40 ( หยาบ ) คอลัมน์ ( 2.2 บัตรประจำตัว
× 65 ซม. ) และตัวอย่างกับเอโตะ / H2O ( 50 :50 → keyboard - key - name 70 : 30 , v / v ) , เอโตะ /
H2O ( 70 : 30 , v / v ) / อะซิโตน / H2O ( 70 : 30 , v / v ) ( → keyboard - key - name 80 90 : 10 กุมภา 50 → keyboard - key - name → keyboard - key - name
, v / v ) และอะซิโตน / H2O ( 70 : 30 , v / v ) อย่างต่อเนื่อง
เก็บ 500 มล. เศษส่วน เศษส่วนที่สอดคล้องกันทั้ง
toyopearl คอลัมน์รวมเป็นเจ็ด toyopearl ( T1 ) เศษส่วน
( T1 − 7 )
3 ( T1 ) 6.12 กรัม ) , ตัวอย่างกลุ่ม / H2O ( 70 : 30 , v / v )
) / H2O ( 70 : 30 , v / v / v ) ( 90 : 10 , )อยู่ภายใต้การ toyopearl เดียวกัน
( หยาบ ) และกลุ่มคอลัมน์ตัวอย่าง / H2O ( 70 : 30 , v / v )
เอโตะ / H2O ( 70 : 30 , v / v ) / อะซิโตน / H2O ( 70 : 30 , v / v ) ( รูป ) และ
H2O ( 70 : 30 ) / V / V ) อย่างต่อเนื่องเก็บ 900 ลดลงเศษส่วน
ให้ 700 toyopearl ( T2 ) เศษส่วน โดย T2 เศษส่วน 158 − 183 ( 322
มิลลิกรัม ) ตัวอย่างกลุ่ม / H2O ( 70 : 30 , v / v ) ได้รับการ mcigel
chp-20p คอลัมน์ ( 1.1 บัตรประจำตัว× 35 ซม. ) และปริมาณ h2o h2o /
( 85:15 → keyboard - key - name 80 → keyboard - key - name 5 → keyboard - key - name 70 : 30 และ 0 v / v ) h2o −เมทิลแอลกอฮอล์
( 80 , V / V ) สารละลาย ( eluate ) ( 31 มิลลิกรัม ) คือ rechromatographed กว่า MCI เจล
chp-20p คอลัมน์ ( 1.1 บัตรประจำตัว× 21 ซม. ) และปริมาณ h2o h2o /
( 85:15 → keyboard - key - name 80 : 20 0 v / v ) เป็นค่าบำบัดน้ำเสียด้วยตัวทำละลาย HPLC
ชั้นของสารละลาย ( eluate ) สายกับ H2O / เมทิลแอลกอฮอล์ ( 85:15 , V / V ) ( 7 มก. )
) อย่างบริสุทธิ์ ของ nilotinin M5 ( 1 ) ( 11 มิลลิกรัม ) rechromatography
ของ H2O / เมทิลแอลกอฮอล์ ( 80 , V / V ) สารละลาย ( eluate ) ( 63 มิลลิกรัม ) ผ่านคอลัมน์ MCI เจล chp-20p เดียวกันและรูปแบบเดียวกัน

( ช่วย H2O / เมทิลแอลกอฮอล์ ( 5 V / V ) สารละลาย ( eluate ) ( 19.8 มิลลิกรัม ) ซึ่งเมื่อฟอก HPLC =
2 nilotinin D10 ให้กับตัวทำละลาย ( 4 ) ( 4.5 มิลลิกรัม )
4 T2 184 − 210 ( มก. 297 ) ตัวอย่างกลุ่ม / H2O ( 70 : 30 ,
v / V ) ได้ภายใต้การ MCI เจล chp-20p คอลัมน์ ( 11 ไอดี× 3
ซม. ) และปริมาณ h2o h2o / ( 85:15 → keyboard - key - name 80 → keyboard - key - name 5 → keyboard - key - name และค่า
0 v / v ) ในสารละลาย ( eluate ) ต้นกับ H2O / เมทิลแอลกอฮอล์ ( 80 , v / v ) ( 33.7
มิลลิกรัม ) คือ rechromatographed กว่ามิลลิคูรี เจล chp-20p คอลัมน์ ( 1.1
ไอดี× 21 ซม. ) isocratically กับ H2O / เมทิลแอลกอฮอล์ ( 85:15 , V / V )
2 = ตามด้วยบริสุทธิ์ของสารละลาย ( eluate ) ( 20 มิลลิกรัม ) ด้วยตัวทำละลาย II
ตัวอย่าง , ทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติม ( 82 มิลลิกรัม ) ของ nilotinin M5 ( 1 )