ResultsProduction of transgenic lim

Results
Production of transgenic lime plants and analysis of
expression of the CTVp25 CP transgene
Transgenic plants of Mexican lime were produced to
express the full-length p25 CP gene of CTV. Based
on the presence of the p25 CP gene, 42 transgenic
lines were selected, 25 carrying the p25 CP gene from
the severe CTV strain T-305, and 17 transformed with
the p25 CP gene from the mild strain T-317. Lines
harboring the p25 CP gene from T-305 were referred
to as S(from severe)CP.1 to SCP.17, SCP.19, SCP.25
to SCP.29, SCP.41 and SCP.42, and those with the
p25 CP gene from T-317 were called as M(from mild-
)CP.18, MCP.20 to MCP.24 and MCP.30 to MCP.40.
Transgene integration patterns were usually complex
with almost half of the plants showing T-DNA truncations
(Domínguez et al. (2000); results not shown).
Copy number of the p25 CP transgene was also variable
in the transgenic lines, ranging from one to six
(Table 1). Accumulation of the p25 CP protein was
detected in all transgenic lines, except SCP.2. SCP.4,
SCP.18 and SCP.19 (Figure 1; results not shown), and
p25 CP accumulation was estimated to range between
1 and 4, by measuring band intensity with the
MacBas Image program (Table 1). No correlation was
found between p25 CP transgene copy number and
p25 protein accumulation.
Protection of transgenic lime plants against CTV
inoculated by grafting
CTV T-305 causes severe symptoms in Mexican lime,
as vein clearing, leaf distortion, stem pitting, vein
corking and marked stunting, whereas CTV T-317
causes only mild vein clearing (Moreno et al. 1993).
To investigate PDR against the homologous and heterologous
strains, CTV T-305 was graft-inoculated
onto both transgenic lines carrying T-305- and T-317-
derived p25 CP transgenes.
In the initial challenge assays, two plants from
each transgenic line were inoculated and observed for
CTV symptoms in three successive flushes after inoculation.
Those lines showing symptoms similar to
those of non-transformed controls were discarded,
and only lines exhibiting any level of protection were
selected for further evaluation.
Sixteen independent transgenic lines were used in
a new experiment, SCP.1, SCP.6, SCP.10, SCP.11,
SCP.13 to SCP.16, SCP.19, SCP.25, MCP.18, and
MCP.20 to MCP.24. Eight to ten propagated plants
from each transgenic line and the same number of
non-transformed lime controls were inoculated with
CTV T-305 and evaluated for resistance. All plants
were individually tested for the presence of CTV in
the scion by PC-RT-NESTED-PCR, and upon virus
detection, the inoculum bark chip was removed to
limit the inoculum dose (Figure 2). Symptoms started
to appear in the first flush after inoculation in all the
control plants, whereas transgenic lines showed
symptoms at different times and could be separated
in two groups: those that showed typical CTV T-305
symptoms developing basically in the same way as
non-transformed controls (SCP.1, SCP.6, SCP.14,
MCP.18, SCP.19, MCP.20 to MCP.23 and SCP.25),
and those exhibiting different levels of protection
against the virus (SCP.10, SCP.11, SCP.13, SCP.15,
SCP.16 and MCP.24) (Table 1).
Lines in the first group showed the same infection
rate as the control plants, and their symptom intensity
and virus accumulation were also comparable
throughout the three flushes investigated (Table 1).
Lines included in the second group showed some

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์ผลิตมะนาวถั่วเหลืองพืชและวิเคราะห์นิพจน์ของ transgene CTVp25 CPมีผลิตพืชถั่วเหลืองของมะนาวเม็กซิกันแสดงยีน CP ปราศจาก p25 ของ CTV ตามในสถานะของยีน p25 CP ถั่วเหลือง 42ได้เลือกรายการ 25 ยีน CP p25 จากการถือครองสายพันธุ์ CTV รุนแรง T 305 และ 17 ที่แตกต่างยีน CP p25 จากพันธุ์อ่อน T-317 บรรทัดharboring ยีน CP p25 จาก T-305 ถูกอ้างอิงจะเป็น S (จาก severe)CP.1 เพื่อ SCP.17, SCP.19, SCP.25SCP.29, SCP.41 และ SCP.42 และมีการเรียกว่ายีน CP p25 จาก T-317 เป็น M (จากไมลด์-) CP.18, MCP.20 กับ MCP.24 และ MCP.30 เพื่อ MCP.40รูปรวม Transgene ได้มักจะซับซ้อนมีเกือบครึ่งหนึ่งของพืชที่แสดง truncations T-ดีเอ็นเอ(Domínguez et al. (2000) ไม่แสดงผล)สำเนาจำนวน p25 CP transgene ยังเป็นตัวแปรในถั่วเหลืองใบ ตั้งแต่ 1-6(ตาราง 1) มีการสะสมของโปรตีน CP p25พบในถั่วเหลืองทุกรายการ ยกเว้น SCP.2 SCP.4SCP.18 และ SCP.19 (รูปที่ 1 ไม่แสดงผล), และp25 สะสม CP ได้ประมาณช่วงระหว่าง1 และ 4 โดยการวัดความเข้มของวงด้วยการโปรแกรม MacBas รูป (ตารางที่ 1) ความสัมพันธ์ไม่ได้พบระหว่าง p25 CP transgene สำเนาหมายเลข และp25 โปรตีนสะสมป้องกันพืชถั่วเหลืองมะนาวกับ CTVinoculated โดย graftingCTV T 305 ทำให้เกิดอาการรุนแรงในเม็กซิกันมะนาวเป็นเส้นเลือดหัก ใบไม้บิดเบือน เกิด pitting เส้นเลือดcorking และทำเครื่องหมาย stunting ในขณะที่ CTV T-317สาเหตุที่ไม่รุนแรงเท่าเส้นเลือดล้าง (Moreno และ al. 1993)การตรวจสอบลาว homologous และ heterologousสายพันธุ์ CTV T 305 ได้ inoculated รับสินบนบนบรรทัดทั้งถั่วเหลืองดำเนิน T 305 - และ T-317-มา p25 CP transgenesในการเริ่มต้นท้าทาย assays สองพืชจากinoculated และสังเกตสำหรับแต่ละบรรทัดถั่วเหลืองอาการ CTV ในล้างต่อเนื่องสามหลัง inoculationบรรทัดแสดงอาการคล้ายกับผู้ควบคุมไม่ใช่แปลงถูกละทิ้งและเฉพาะบรรทัดอย่างมีระดับป้องกันระดับใดเลือกการประเมินเพิ่มเติมสิบหกบรรทัดถั่วเหลืองอิสระถูกใช้ในทดลองใหม่ SCP.1, SCP.6, SCP.10, SCP.11SCP.13 SCP.16, SCP.19, SCP.25, MCP.18 และMCP.20 กับ MCP.24 พืชเผยแพร่ 8-10จากแต่ละบรรทัดถั่วเหลืองจำนวนเท่ากันตัวควบคุมไม่ใช่แปลงมะนาวได้ inoculated ด้วยCTV T 305 และค่าการต้านทาน พืชทั้งหมดทดสอบสำหรับของ CTV ในแต่ละไซออน PC-RT-ซ้อน-PCR และ เมื่อไวรัสตรวจสอบ ชิเปลือก inoculum ถูกเอาออกไปจำกัดปริมาณ inoculum (2 รูป) อาการเริ่มต้นปรากฏขึ้นในการลบรายการบัญชีแรกหลังจาก inoculation ในทุกควบคุมพืช ในขณะที่ถั่วเหลืองบรรทัดแสดงอาการเวลาที่แตกต่างกัน และสามารถแยกในกลุ่มที่สอง: ที่พบทั่วไป CTV T-305พัฒนาโดยทั่วไปในแบบเดียวกับอาการไม่เปลี่ยนตัวควบคุม (SCP.1, SCP.6, SCP.14MCP.18, SCP.19, MCP.20 MCP.23 และ SCP.25),และการป้องกันในระดับที่แตกต่างอย่างมีระดับต่อต้านไวรัส (SCP.10, SCP.11, SCP.13, SCP.15SCP.16 และ MCP.24) (ตารางที่ 1)รายการในกลุ่มแรกพบเชื้อเดียวกันอัตราเป็นพืชควบคุม และความรุนแรงของอาการและสะสมไวรัสยังเปรียบเทียบได้ตลอดล้างสามตรวจสอบ (ตาราง 1)พบว่าบางรายการที่รวมอยู่ในกลุ่มที่สอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลการผลิตของพืชมะนาวพันธุ์และการวิเคราะห์การแสดงออกของยีนCTVp25 CP พืชดัดแปรพันธุกรรมของมะนาวเม็กซิกันเป็นจำนวนมากในการแสดงความยาวเต็มรูปแบบ P25 ยีน CP ของ CTV ขึ้นอยู่กับสถานะของยีน P25 ซีพี 42 พันธุ์สายได้รับการคัดเลือก25 ถือ P25 ยีน CP จากสายพันธุ์ที่รุนแรงCTV T-305, 17 และเปลี่ยนกับP25 ยีน CP จากสายพันธุ์ที่ไม่รุนแรง T-317 สายเก็บงำ P25 ยีน CP จาก T-305 ถูกเรียกว่า S (จากรุนแรง) CP.1 เพื่อ SCP.17, SCP.19, SCP.25 เพื่อ SCP.29, SCP.41 และ SCP.42 และผู้ที่มีP25 ยีน CP จาก T-317 ถูกเรียกว่าเป็น M (จาก mild-) CP.18, MCP.20 เพื่อ MCP.24 และ MCP.30 เพื่อ MCP.40. ยีนรูปแบบบูรณาการก็มักจะเป็นที่ซับซ้อนที่มีเกือบครึ่งหนึ่งของพืชที่แสดงtruncations T-DNA. (Domínguez, et al (2000). ผลไม่แสดง) คัดลอกจำนวนยีน P25 ซีพียังเป็นตัวแปรในสายพันธุ์ตั้งแต่1-6 (ตารางที่ 1) การสะสมของโปรตีน P25 ซีพีได้รับการตรวจพบในสายพันธุ์ทั้งหมดยกเว้นSCP.2 SCP.4, SCP.18 และ SCP.19 (รูปที่ 1 ผลลัพธ์ไม่แสดง) และP25 CP สะสมประมาณช่วงระหว่าง1 และ 4 โดยการวัดความเข้มของวงดนตรีที่มีโปรแกรมภาพMacBas (ตารางที่ 1) ความสัมพันธ์ไม่มีการพบกันระหว่าง P25 จำนวนสำเนายีน CP และการสะสมโปรตีนP25. คุ้มครองพืชมะนาวพันธุ์กับ CTV เชื้อโดยการปลูกถ่ายอวัยวะCTV T-305 ทำให้เกิดอาการที่รุนแรงในมะนาวเม็กซิกัน, เป็นสำนักหักบัญชีหลอดเลือดดำบิดเบือนใบลำต้นบ่อหลอดเลือดดำcorking และการทำเครื่องหมาย แคระแกร็นขณะ CTV T-317 ทำให้เกิดเพียงล้างหลอดเลือดดำอ่อน (เรโน et al. 1993). เพื่อตรวจสอบกับสปปคล้ายคลึงกันและ heterologous สายพันธุ์ CTV T-305 เป็นสินบน-เชื้อลงบนสายพันธุ์ทั้งแบกT-305- และยืด 317- มา transgenes P25 ซีพี. ในการตรวจความท้าทายเริ่มต้นจากสองโรงงานแต่ละบรรทัดยีนถูกเชื้อและสังเกตอาการCTV ในสามวูบวาบต่อเนื่องหลังจากการฉีดวัคซีน. สายเหล่านั้นแสดงอาการคล้ายกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้เปลี่ยนถูกโยนทิ้ง, และมีเพียง เส้นแสดงระดับของการป้องกันใด ๆ ที่ถูกเลือกสำหรับการประเมินผลต่อไป. สิบหกสายพันธุ์ที่เป็นอิสระถูกนำมาใช้ในการทดลองใหม่ SCP.1, SCP.6, SCP.10, SCP.11, SCP.13 เพื่อ SCP.16, SCP.19 , SCP.25, MCP.18 และMCP.20 เพื่อ MCP.24 แปดสิบพืชขยายพันธุ์จากพันธุ์แต่ละบรรทัดและหมายเลขเดียวกันของที่ไม่ได้เปลี่ยนการควบคุมมะนาวได้รับเชื้อด้วยCTV T-305 และประเมินผลความต้านทาน พืชทุกชนิดถูกนำมาทดสอบเป็นรายบุคคลสำหรับการปรากฏตัวของ CTV ในปลูกถ่ายอวัยวะโดยPC-RT-PCR ซ้อน-และเมื่อไวรัสตรวจสอบชิปเปลือกหัวเชื้อจะถูกลบออกเพื่อจำกัด ปริมาณเชื้อ (รูปที่ 2) อาการเริ่มต้นจะปรากฏในการล้างครั้งแรกหลังจากการฉีดวัคซีนในทุกพืชควบคุมในขณะที่สายพันธุ์พบว่ามีอาการเวลาที่ต่างกันและอาจจะแยกออกเป็นสองกลุ่มคือผู้ที่แสดงให้เห็นโดยทั่วไปCTV T-305 อาการโดยทั่วไปในการพัฒนาเช่นเดียวกับที่ไม่ได้เปลี่ยนการควบคุม (SCP.1, SCP.6, SCP.14, MCP.18, SCP.19, MCP.20 เพื่อ MCP.23 และ SCP.25) และผู้จัดแสดงนิทรรศการระดับที่แตกต่างของการป้องกันต่อต้านไวรัส (SCP.10 , SCP.11, SCP.13, SCP.15, SCP.16 และ MCP.24) (ตารางที่ 1). สายในกลุ่มแรกที่แสดงให้เห็นว่าการติดเชื้อเดียวกันอัตราการเป็นพืชควบคุมอาการและความรุนแรงของพวกเขาและการสะสมไวรัสนั้นยังมีเปรียบได้ตลอดวูบวาบสอบสวนสาม (ตารางที่ 1). สายรวมอยู่ในกลุ่มที่สองแสดงให้เห็นบางส่วน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การผลิตพืชต้นมะนาวและผล

ctvp25 การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนพันธุกรรมพืชของ CP
มะนาวเม็กซิกันถูกผลิต

แสดงเต็มตัว p25 CP ยีนของ CTV . โดย
บนพระพักตร์ของ p25 CP ยีน , ยีน
บรรทัดที่ 42 25 แบก p25 CP (
t-305 CTV รุนแรง ความเครียด และ 17 แปลง ด้วย
การ p25 CP ยีนจาก t-317 สายพันธุ์ไม่รุนแรง สาย
กรมเจ้าท่า p25 CP ยีนจาก t-305 หมายถึง
เป็น S ( รุนแรง ) cp.1 เพื่อ scp.17 scp.19 , SCP , 25
เพื่อ scp.29 scp.41 scp.42 , และ , และผู้ที่มี
p25 CP ยีนจาก t-317 ถูกเรียกว่า M ( จากอ่อน -
) cp.18 mcp.20 , เพื่อ mcp.24 mcp.30 เพื่อและ MCP . 40 รูปแบบการรวมยีนที่ถูกมักจะซับซ้อน

เกือบครึ่งหนึ่งของพืชที่แสดง t-dna truncations
( ดอม โดมิงเกซ et al . ( 2000 ) ; ผลลัพธ์ไม่แสดง ) หมายเลข
สำเนา p25 CP ยีนก็แปร
ในสายพันธุ์ตั้งแต่หนึ่งถึงหก
( ตารางที่ 1 ) การสะสมของโปรตีนที่พบในโปรตีน p25
สายพันธุกรรมทั้งหมด ยกเว้นเซลล์ 2 . SCP . 4
scp.18 scp.19 ( รูปที่ 1 และ ผลไม่แสดง ) , และ
p25 CP สะสมประมาณช่วงระหว่าง
1 และ 4 โดยการวัดความเข้มกับวง
macbas ภาพโปรแกรม ( ตารางที่ 1 ) ไม่พบความสัมพันธ์ระหว่างยีน CP
p25 คัดลอกหมายเลขและสะสมโปรตีน p25
.
คุ้มครองพันธุกรรมพืชมะนาวกับ CTV CTV t-305

แต่โดยการทำให้เกิดอาการรุนแรงในมะนาวเม็กซิกัน
เป็นหลอดเลือดดำการล้างใบ ลำต้น เกิดหลอดเลือดดำ
บิดเบือนสุดยอดและเครื่องหมาย stunting และ CTV t-317
สาเหตุเพียงเล็กน้อยล้างเส้นเลือด ( Moreno et al . 1993 ) .
ศึกษา สปป.ลาวกับความคล้ายคลึงและสายพันธุ์ชนิด
, CTV t-305 เป็นเชื้อลงบนเส้นกราฟทั้งสองยีน
-
และแบก t-305 - t-317 ได้มา p25 CP transgenes .
ในวิธีการเริ่มต้นที่ท้าทายสองพืชแต่ละต้นปลูกเชื้อสายจาก

) และ