www.ddtjournal.com18 Drug Discoveri

www.ddtjournal.com
18 Drug Discoveries & Therapeutics. 2012; 6(1):18-23.
Identification and evaluation of agents isolated from traditionally
used herbs against Ophiophagus hannah venom
Rima Salama1, Jintana Sattayasai2, Arun Kumar Gande1, Nison Sattayasai3, Mike Davis1,
Eric Lattmann1,*
1 Division of Pharmacy, School of Life and Health Sciences, Aston University, Birmingham, England;
2 Department of Pharmacology, Faculty of Medicine, Khon Kaen University, Khon Kaen, Thailand;
3 Department of Biochemistry, Faculty of Science, Khon Kaen University, Khon Kaen, Thailand.
*Address correspondence to:
Dr. Eric Lattmann, Division of Pharmacy, School of
Life and Health Sciences, Aston University, Aston
Triangle, Birmingham B4 7ET, England.
E-mail: [e-mail]
ABSTRACT: The aim of this study was firstly to
identify active molecules in herbs, that are traditionally
used for the treatment of snake bite, such as Curcuma
antinaia, Curcuma contravenenum, Andrographis
paniculata, and Tanacetum parthenium; secondly to
test similar structurally related molecules and finally
to prepare and evaluate an efficient formulation
against Ophiophagus hannah venom intoxification.
Three labdane based compounds, including labdane
dialdehyde, labdane lactone, and labdane trialdehyde
and two lactones including 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolide
and parthenolide were isolated by
column chromatography and characterised. Using
the isolated rat phrenic nerve-hemidiaphragm
preparation, the antagonistic effect of crude extracts,
isolated compounds and prepared formulations
were measured in vitro on the inhibition of the
neuromuscular transmission. Inhibition on muscle
contraction, produced by the 5 μg/mL venom, was
reversed by test agents in organ bath preparations. A
labdane trialdehyde, isolated from C. contravenenum,
was identified as the best antagonising agent in the
low micromolar range. Tests on formulations of the
most potent C. contravenenum extract showed, that
the suppository with witepsol H15 was an effective
medicine against O. hannah venom. This study
elucidated the active compounds, accounting for the
antivenin activity of traditionally used herbs and
suggested the most suitable formulation, which may
help to develop potent medicines for the treatment of
snake bite in the future.
Keywords: Antivenin activity, rat nerve-hemidiapragm,
labdane dialdehyde, labdane trialdehyde, parthenolide,
desoxy-andrographolide
1. Introduction
The actual incidence and the severity of snake poisoning
are currently highly undervalued (1). The importance
of snake bites is considered a major occupational
disease causing both disabilities and mortalities. This
disease is causing devastation to individuals, who are
involved in agricultural work in the tropical regions
worldwide. Inaccurate epidemiological data resulted
in the underestimation of this international problem,
which requires both high attention and sincere efforts to
alleviate its burden (2). Based on these facts, the World
Health Organization (WHO) is calling for new, proven
and affordable treatments. Traditional medicine or
herbal medicine has long been used for the treatment of
snake bite worldwide for its affirmed effectiveness, easy
availability, and fine economic affordability. However,
the active ingredients contained in these herbs and most
effective formulations are still needed to be elucidated.
We have previously reported a labdane dialdehyde
structure (Figure 1), which was isolated from a
novel Curcuma zedoaroides species and exhibited
well antivenin activity (3). Species in the genus
Curcuma including Curcuma antinaia and Curcuma
contravenenum were in regular use in Thailand against
cobra intoxication, but they are very hard to find on local
markets in Isarn today. Besides of those herbs, another
two medical plants including Andrographis paniculata
and Tanacetum parthenium are widely applied for the
treatment of snake bite in India and China. Andrographis
paniculata is in use in India as a snake venom antidote.
DOI: 10.5582/ddt.2012.v6.1.18 Brief Report
Figure 1. Chemical structure of labdane dialdehyde.
H
O
O
www.ddtjournal.com
Drug Discoveries & Therapeutics. 2012; 6(1):18-23.
The leaves of A. paniculata, locally known as Nilavembu,
were grinded into a paste and applied topically at the site
of the snake's bite (4). Tanacetum parthenium, a member
of the Asteraceae family, which is also known as the
Compositae family, represents a herb well known for its
medicinal properties. Since ancient times this herb was
used by the Greeks and the Egyptians as well as the early
Europeans for the treatment of a number of illnesses,
such as headaches, stomach ache, menstrual pain, joint
pain, fever. The Chinese used this herb due to its healing
properties against insects and snake bites (5). In order to
further elucidate the ingredients, that account for antivenin
activity of these herbs and develop formulations, that are
effective against snake venom, we prepared and tested the
in vitro antivenin activity of the crude extracts, purified
compounds and certain formulations against Ophiophagus
hannah venom in the present study.
2. Materials and Methods
2.1. Materials
Lyophilized O. hannah venom was obtained from the
Queen Suavabha Memorial Institute, Bangkok, Thailand.
The venom was dissolved in normal saline, aliquoted
and kept at –20°C as stock solution. Herbs including
C. zedoaroides, C. antinaia, C. contravenenum, A.
paniculata, and T. parthenium were purchased from the
King Cobra Village, Khon Kaen Province, Thailand. The
chemicals and solvents were purchased from Aldrich
(Gillingham, UK) and Lancaster Synthesis (Lancaster,
UK). Mass spectra were obtained by Atmospheric
Pressure Chemical Ionisation (APCI), using a Hewlett-
Packard 5989b quadrupole instrument (Vienna, Austria).
Both proton and carbon NMR spectra were obtained on
a Brucker AC 250 instrument (Follanden, Switzerland),
calibrated with the solvent reference peak. Infra-red
spectra were plotted from KBr discs on a Mattson 300
FTIR spectrophotometer (Coventry, UK).
Laboratory and HPLC grade dichloromethane,
petroleum ether 60-80ºC, ethyl acetate, chloroform-d
and methanol were purchased from Fisher-Scientific
(Waltham, MA, USA). The Soxhlet extraction system
was the Quickfit (C5/23) model with (24/29) joint from
BÜCHI, Switzerland. The heating mantle used was
the Heidolph EKT 3001 from Sigma-Aldrich, UK.
The rotary evaporator used was the BÜCHI Rotavapor
Model R-144, Switzerland. 1H-NMR and 13C-NMR were
recorded in Bruker advance 400 in chloroform-d. Column
chromatography was carried out on silica gel and thinlayer
chromatography (TLC) on TLC-silica gel 60 F254.
2.2. Preparation of crude extracts and isolation of the
tested compounds
The rhizomes of C. zedoaroides, C. antinaia, and C.
contravenenum (30 g of the dried, powdered rhizomes)
were extracted with dichloromethane using a Soxhlet
extraction apparatus, respectively. Once the Soxhlet
extractions were completed the solvent was removed under
reduced pressure from the round bottom flasks using a
rotary evaporator. The extract content of C. zedoaroides,
C. antinaia, and C. contravenenum were gathered and the
entry code Kae1, Mia3, and Rat7 was assigned. Column
chromoatography of the crude extract was performed using
petroleum ether:ethyl acetate (60:40) as solvent system and
the compounds were detected with UV light, permanganate,
and 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH). The Kae1
extract finally provided labdane dialdehyde; Mia3 extract
finally provided labdane dialdehyde and labdane lactone;
Rat7 extract finally provided labdane dialdehyde, labdane
lactone, and labdane trialdehyde. The spectra data of these
three compounds are shown in the Appendix.
Fifty grams of dried and ground leaves of A.
paniculata were extracted with 500 mL of methanol
using to a Soxhlet extractor. The solvent was evaporated
off solvent using rotary evaporation. TLC analysis was
performed with a dichloromethane:methanol (95:5) solvent
mixture, and both andrographolide and 14-deoxy-11,12-
didehydroandrographolide, were purified by column
chromatography. The spectra data of 14-deoxy-11,12-
didehydroandrographolide are shown in the Appendix.
Fifty grams of grinded plant material T. parthenium
was extracted with 500 mL of chloroform using a Soxhlet
extractor. The extraction was monitored by TLC with
ethyl acetate:petroleum ether 60-80°C (70:30) and the TLC
plate was developed with vanillin reagent and heated at
400°C for 1 min. Two point five gram of crude extract was
dissolved in a minimum volume of ethyl acetate in the heat
and 1/3 of the volume of petrol ether was added and cooled
on ice. The yellowish sample was recrystallised from ethyl
acetate:petroleum ether (70:30) to give parthenolide, 130 mg,
as an off white powder. The spectra data of this compound
are shown in the Appendix.
2.3. Preparation of C. contravenemum formulations
Ethanolic solution (entry code: OHRat7): For the preparation
of the ethanolic solution, 0.5 g of the concentrated
extract of C. contravenemum was dissolved in 5 mL of
ethanol and divided into two portions of 2.5 mL each. To one
of the samples OHRat7 3 drops of trifluoroacetic acid were
added. Both samples were incubated at 36°C for a period of 1
week, then tested.
Water for injection (entry code: AqRat7): For the preparation
of a solution for the injection, 2.5 equivalents of an
aqueous solution of 10% Na2S2O5 to 0.2 g of the extract in
0.1 mL DMSO were mixed until homogenous and water was
added until a final volume of 4 mL.
Suppositories (entry code: Rat7S): Suppositories (3
g) containing 30% active ingredients were prepared by the
fusion method as previously described (6). Sixty six grams
of C. contravenemum rhizomes, giving 1.98 g crude extract,
were extracted with 300 mL of acetone as described. The
19
www.ddtjournal.com
20 Drug Discoveries & Therapeutics. 2012; 6(1):18-23.
3. Results and Discussion
3.1. In vitro antivenin activity of crude extracts from the

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

www.ddtjournal.comค้นพบยาเสพติด 18 และ Therapeutics 2012 6 (1): 18-23การระบุและประเมินตัวแทนแยกต่างหากจากแบบดั้งเดิมสมุนไพรที่ใช้กับฮันนาห์ Ophiophagus พิษริม่า Salama1 จินตนา Sattayasai2 อรุณ Kumar Gande1, Nison Sattayasai3 ไมค์ Davis1Eric Lattmann1, *กองเภสัชกรรม โรงเรียนชีวิต และ วิทยาศาสตร์สุขภาพ มหาวิทยาลัยแอสตัน เบอร์มิงแฮม ประเทศอังกฤษ 12 ภาควิชาเภสัชวิทยา คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น ขอนแก่น ไทย3 ภาควิชาชีวเคมี คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น ขอนแก่น ไทย* ที่อยู่ติดต่อ:ดร. Eric Lattmann ฝ่ายเภสัชกรรม โรงเรียนชีวิตและวิทยาศาสตร์สุขภาพ มหาวิทยาลัยแอสตัน แอสตันสามเหลี่ยม เบอร์มิงแฮม B4 7ET อังกฤษอีเมล์: [e-mail]บทคัดย่อ: จุดประสงค์ของการศึกษานี้คือประการแรกการระบุโมเลกุลใช้ในสมุนไพร ที่เป็นแบบดั้งเดิมใช้สำหรับการรักษางูกัด เช่นใช้ขมิ้นชันantinaia, contravenenum ใช้ขมิ้นชัน ยาแคปซูลฟ้าทะลายโจร และ Tanacetum parthenium ประการที่สองเพื่อทดสอบโมเลกุลคล้าย structurally ที่เกี่ยวข้อง และสุดท้ายการเตรียมประเมินกำหนดที่มีประสิทธิภาพกับฮันนาห์ Ophiophagus พิษ intoxificationLabdane สามตามสาร รวม labdanedialdehyde, labdane lactone และ labdane trialdehydeและสอง lactones 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolideและ parthenolide ถูกแบ่งแยกคอลัมน์ chromatography และดำเนินการ โดยใช้การแยกราษฎร์ phrenic ประสาท-hemidiaphragmผลของสารสกัดหยาบ ต่อต้าน เตรียมสอบแยกสารและสูตรที่เตรียมไว้มีวัดในหลอดในการยับยั้งการส่งกล้าม ยับยั้งในกล้ามเนื้อหดตัว ผลิต โดยพิษ μg 5 mL ถูกกลับ โดยตัวแทนทดสอบในอวัยวะน้ำเตรียม Alabdane trialdehyde, C. contravenenum โดดเดี่ยวระบุได้เป็นตัวแทนส่วน antagonising ในการช่วง micromolar ต่ำ ทดสอบสูตรสารสกัดจาก C. contravenenum มีศักยภาพมากที่สุดที่พบ ที่suppository กับ witepsol H15 มีประสิทธิภาพยาต่อต้านพิษโอฮันนาห์ การศึกษานี้elucidated สารใช้งาน การบัญชีสำหรับการกิจกรรม antivenin สมุนไพรใช้ประเพณี และแนะนำที่กำหนดเหมาะสมที่สุด ซึ่งอาจช่วยในการพัฒนายาที่มีศักยภาพในการรักษางูกัดในอนาคตคำสำคัญ: กิจกรรม Antivenin ราษฎร์ประสาท-hemidiapragmlabdane dialdehyde, labdane trialdehyde, parthenolidedesoxy-andrographolide1. บทนำอุบัติการณ์ที่เกิดขึ้นจริงและความรุนแรงของพิษงูกำลังสูง undervalued (1) ความสำคัญของงูกัดถือว่าเป็นหลักการอาชีวโรคที่ทำให้เกิดความพิการและ mortalities นี้โรคที่เป็นสาเหตุทำลายล้างบุคคลเกี่ยวข้องกับงานด้านการเกษตรในเขตร้อนทั่วโลก ส่งผลให้ข้อมูลความไม่ถูกต้องใน underestimation ปัญหานี้นานาชาติที่ต้องใช้ทั้งความสูงและความจริงใจบรรเทาภาระของ (2) ตามข้อเท็จจริง โลกสุขภาพองค์กรผู้ถูกเรียกสำหรับพิสูจน์ใหม่และรักษาราคาไม่แพง แพทย์ หรือใช้ยาสมุนไพรในการรักษานานงูกัดทั่วโลก affirmed ประสิทธิผล ง่ายความพร้อมใช้งาน และสามารถในการจ่ายเศรษฐกิจดี อย่างไรก็ตามส่วนผสมที่มีอยู่ในสมุนไพรเหล่านี้และส่วนใหญ่สูตรมีประสิทธิภาพยังคงจำเป็นต้องมี elucidatedเราได้เคยรายงาน labdane dialdehydeโครงสร้าง (รูปที่ 1), ซึ่งถูกแยกต่างหากจากการพันธุ์ zedoaroides ใช้ขมิ้นชันนวนิยาย และจัดแสดงดี antivenin กิจกรรม (3) สปีชีส์ในสกุลนี้ใช้ขมิ้นชันที่ใช้ขมิ้นชัน antinaia และใช้ขมิ้นชันcontravenenum มีการใช้ทั่วไปในประเทศไทยกับงูเห่า intoxication แต่พวกเขามากหายากในท้องถิ่นตลาดในอีสานวันนี้ นอกจากนั้นสมุนไพร อื่นสองแพทย์พืชรวมทั้งทะลายและ Tanacetum parthenium ที่มีใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการรักษางูกัดในอินเดียและจีน ยาแคปซูลฟ้าทะลายโจรใช้อยู่ในอินเดียเป็นเป็นยาแก้พิษงูดอย: 10.5582/ddt.2012.v6.1.18 รายงานโดยย่อรูปที่ 1 โครงสร้างทางเคมีของ labdane dialdehydeHOOwww.ddtjournal.comค้นพบยาเสพติดและ Therapeutics 2012 6 (1): 18-23ใบของฟ้าทะลายโจรอ. เฉพาะเรียกว่า Nilavembuมี grinded ในการวาง และใช้ topically ที่ไซต์ของงูกัด (4) Tanacetum parthenium สมาชิกของครอบครัว Asteraceae ซึ่งเรียกว่าการตระกูล Compositae แสดงสมุนไพรที่รู้จักกันดีสำหรับของคุณสมบัติของยา ตั้งแต่โบราณครั้งสมุนไพรนี้ ได้ใช้กรีก และอียิปต์ เป็นช่วงชาวยุโรปในการรักษาโรค จำนวนอาการปวดหัว ปวดท้อง ปวดประจำเดือน ร่วมความเจ็บปวด ไข้ จีนใช้สมุนไพรนี้เนื่องจากการรักษาคุณสมบัติต่อต้านแมลงและงูกัด (5) เพื่อเพิ่มเติม elucidate ส่วนผสม ที่บัญชี antiveninกิจกรรมของสมุนไพรเหล่านี้ และพัฒนาสูตร ที่มีผลต่อต้านพิษงู เราเตรียม และทดสอบการกิจกรรม antivenin ที่เพาะในสารสกัดจากน้ำมัน บริสุทธิ์สารและบางสูตรกับ Ophiophagusพิษฮันนาห์ในการศึกษาปัจจุบัน2. วัสดุและวิธีการ2.1. วัสดุLyophilized ฮันนาห์โอพิษได้รับจากการควีน Suavabha อนุสรณ์ สถาบัน กรุงเทพ ประเทศไทยพิษที่ละลายในน้ำเกลือปกติ aliquotedและเก็บไว้ที่ –20 ° C เป็นโซลูชันหุ้น สมุนไพรรวมทั้งC. zedoaroides, C. antinaia, C. contravenenum อ.ฟ้าทะลายโจร และต. parthenium ซื้อจากคิงหมู่บ้านงูเห่า จังหวัดขอนแก่น ไทย ที่ซื้อสารเคมีและหรือสารทำละลายจาก Aldrich(Gillingham, UK) และสังเคราะห์แลงคาสเตอร์ (แลงคาสเตอร์สหราชอาณาจักร) แรมสเป็คตราโดยรวมได้รับมา โดยอากาศความดันสารเคมี Ionisation (APCI), ใช้ Hewlett-Packard 5989b quadrupole ตรา (เวียนนา ออสเตรีย)โปรตอนและคาร์บอน NMR แรมสเป็คตราได้รับในเครื่องมือ Brucker AC 250 (Follanden สวิตเซอร์แลนด์),ปรับเทียบกับจุดอ้างอิงเป็นตัวทำละลายสูงสุด ซาวแรมสเป็คตราถูกพล็อตจากดิสก์ KBr บน 300 รับเชิญFTIR เครื่องทดสอบกรดด่าง (ทุน UK)ห้องปฏิบัติการและ HPLC เกรด dichloromethaneปิโตรเลียมอีเทอร์ 60 80ºC เอทิล acetate คลอโรฟอร์ม-dและซื้อเมทานอลจาก Fisher วิทยาศาสตร์(Waltham, MA สหรัฐอเมริกา) ระบบสกัด Soxhletรูปแบบ Quickfit (C5/23) กับร่วม (24/29) จากบือ สวิตเซอร์แลนด์ หิ้งความร้อนใช้ได้Heidolph EKT 3001 จากซิก Aldrich, UKEvaporator โรตารี่ที่ใช้เป็น Rotavapor บือรุ่น R-144 สวิตเซอร์แลนด์ 13C-NMR และ 1H NMRบันทึกใน Bruker ล่วงหน้า 400 ในคลอโรฟอร์ม-d คอลัมน์chromatography ทำออกซิลิก้าเจลและ thinlayerchromatography (TLC) บน TLC ซิลิก้าเจล 60 F2542.2 การเตรียมสารสกัดหยาบและแยกสารทดสอบเหง้าของ C. zedoaroides, C. antinaia และ ccontravenenum (ของเหง้าแห้ง ผง 30 กรัม)ถูกสกัด ด้วย dichloromethane ใช้ Soxhlet เป็นเครื่องสกัด ตามลำดับ เมื่อ Soxhletสกัดได้เสร็จสมบูรณ์แล้วตัวทำละลายถูกเอาออกภายใต้ลดแรงดันจากน้ำด้านล่างรอบที่ใช้เป็นevaporator โรตารี่ แยกเนื้อหาของ C. zedoaroides, C. antinaia และ C. contravenenum ได้รวบรวมและกำหนดรายการรหัส Kae1, Mia3 และ Rat7 คอลัมน์chromoatography ของสารสกัดหยาบที่ดำเนินการโดยใช้petroleum ether:ethyl acetate (60:40) as solvent system andthe compounds were detected with UV light, permanganate,and 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH). The Kae1extract finally provided labdane dialdehyde; Mia3 extractfinally provided labdane dialdehyde and labdane lactone;Rat7 extract finally provided labdane dialdehyde, labdanelactone, and labdane trialdehyde. The spectra data of thesethree compounds are shown in the Appendix.Fifty grams of dried and ground leaves of A.paniculata were extracted with 500 mL of methanolusing to a Soxhlet extractor. The solvent was evaporatedoff solvent using rotary evaporation. TLC analysis wasperformed with a dichloromethane:methanol (95:5) solventmixture, and both andrographolide and 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolide, were purified by columnchromatography. The spectra data of 14-deoxy-11,12-didehydroandrographolide are shown in the Appendix.Fifty grams of grinded plant material T. partheniumwas extracted with 500 mL of chloroform using a Soxhletextractor. The extraction was monitored by TLC withethyl acetate:petroleum ether 60-80°C (70:30) and the TLCplate was developed with vanillin reagent and heated at400°C for 1 min. Two point five gram of crude extract wasdissolved in a minimum volume of ethyl acetate in the heatand 1/3 of the volume of petrol ether was added and cooledon ice. The yellowish sample was recrystallised from ethylacetate:petroleum ether (70:30) to give parthenolide, 130 mg,as an off white powder. The spectra data of this compoundare shown in the Appendix.2.3. Preparation of C. contravenemum formulationsEthanolic solution (entry code: OHRat7): For the preparationof the ethanolic solution, 0.5 g of the concentratedextract of C. contravenemum was dissolved in 5 mL ofethanol and divided into two portions of 2.5 mL each. To oneof the samples OHRat7 3 drops of trifluoroacetic acid wereadded. Both samples were incubated at 36°C for a period of 1week, then tested.Water for injection (entry code: AqRat7): For the preparationof a solution for the injection, 2.5 equivalents of anaqueous solution of 10% Na2S2O5 to 0.2 g of the extract in0.1 mL DMSO were mixed until homogenous and water wasadded until a final volume of 4 mL.Suppositories (entry code: Rat7S): Suppositories (3g) containing 30% active ingredients were prepared by thefusion method as previously described (6). Sixty six gramsof C. contravenemum rhizomes, giving 1.98 g crude extract,were extracted with 300 mL of acetone as described. The19www.ddtjournal.com20 Drug Discoveries & Therapeutics. 2012; 6(1):18-23.3. Results and Discussion3.1. In vitro antivenin activity of crude extracts from the

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

www.ddtjournal.com
18 การค้นพบยาเสพติดและการบำบัด 2012; 6 (1):. 18-23
การระบุและการประเมินผลของสารที่แยกได้จากประเพณี
สมุนไพรมาใช้กับฮันนาห์ Ophiophagus พิษ
Rima Salama1, จินตนา Sattayasai2 อรุณมาร์ Gande1, Nison Sattayasai3 ไมค์ Davis1,
เอริค Lattmann1 *
ที่ 1 ส่วนเภสัชศาสตร์โรงเรียน ชีวิตและวิทยาศาสตร์สุขภาพมหาวิทยาลัยแอสตันเบอร์มิงแฮมประเทศอังกฤษ
2 ภาควิชาเภสัชวิทยาคณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยขอนแก่น, ขอนแก่น, ประเทศไทย
. 3 ภาควิชาชีวเคมีคณะวิทยาศาสตร์มหาวิทยาลัยขอนแก่น, ขอนแก่น, ประเทศไทย
* ที่อยู่ จดหมายไปที่:
ดร. เอริค Lattmann กองเภสัชศาสตร์โรงเรียน
ชีวิตและวิทยาศาสตร์สุขภาพมหาวิทยาลัยแอสตันแอสตัน
สามเหลี่ยมเบอร์มิงแฮม B4 7ET อังกฤษ.
E-mail: [e-mail]
บทคัดย่อ: จุดมุ่งหมายของการศึกษาครั้งนี้เป็นครั้งแรกที่จะ
ระบุ โมเลกุลของการใช้งานในสมุนไพรที่ได้รับการแบบดั้งเดิม
ที่ใช้สำหรับการรักษางูกัดเช่นขมิ้น
antinaia, Curcuma contravenenum, ฟ้าทะลาย
โจรและ Tanacetum parthenium; ประการที่สองการ
ทดสอบโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับโครงสร้างที่คล้ายกันและในที่สุดก็
เพื่อเตรียมความพร้อมและประเมินสูตรที่มีประสิทธิภาพ
กับฮันนาห์ Ophiophagus พิษ intoxification.
สามสารประกอบตามแลบเดนรวมทั้งแลบเดน
dialdehyde, lactone แลบเดนและ trialdehyde แลบเดน
และสอง lactones รวม 14 Deoxy-11,12-didehydroandrographolide
และ parthenolide ที่แยกได้จาก
คอลัมน์และโดดเด่น ใช้
หนูที่แยก phrenic ประสาท hemidiaphragm
เตรียมปฏิปักษ์ผลของสารสกัดหยาบ
สารที่แยกและสูตรที่เตรียมไว้
ถูกวัดในหลอดทดลองในการยับยั้งการ
ส่งผ่านประสาทและกล้ามเนื้อ ยับยั้งกล้ามเนื้อ
หดตัวที่ผลิตโดย 5 ไมโครกรัมพิษ / มิลลิลิตรเป็น
ตรงกันข้ามกับตัวแทนการทดสอบในอวัยวะเตรียมอาบน้ำ
trialdehyde แลบเดนที่แยกได้จากซี contravenenum,
ถูกระบุว่าเป็นตัวแทนขุ่นข้องหมองใจที่ดีที่สุดใน
ช่วง micromolar ต่ำ การทดสอบในสูตรของ
ซีมีศักยภาพมากที่สุดแสดงให้เห็นว่าสารสกัดจาก contravenenum ที่
เหน็บกับ witepsol H15 มีประสิทธิภาพเป็น
ยาพิษกับฮันนาห์ทุม การศึกษาครั้งนี้
โฮล์มสารบัญชีสำหรับ
กิจกรรม antivenin ของสมุนไพรที่ใช้แบบดั้งเดิมและ
แนะนำสูตรที่เหมาะสมที่สุดซึ่งอาจ
ช่วยในการพัฒนายารักษาโรคที่มีศักยภาพในการรักษา
งูกัดในอนาคต.
คำสำคัญ: กิจกรรม antivenin หนูประสาท hemidiapragm,
แลบเดน dialdehyde, แลบเดน trialdehyde, parthenolide,
desoxy-andrographolide
1 บทนำ
อุบัติการณ์ที่เกิดขึ้นจริงและความรุนแรงของพิษงู
กำลังสูงเท่าไหร่ (1) ความสำคัญ
ของงูกัดถือเป็นอาชีพที่สำคัญ
ที่ก่อให้เกิดโรคทั้งพิการและตาย นี้
เป็นโรคที่เป็นสาเหตุของความเสียหายให้กับประชาชนที่มี
ส่วนร่วมในการทำงานเกษตรในภูมิภาคเขตร้อน
ทั่วโลก ข้อมูลทางระบาดวิทยาที่ไม่ถูกต้องส่งผลให้
ในเบาของปัญหาระหว่างประเทศนี้
ซึ่งจะต้องมีทั้งความสนใจสูงและความพยายามอย่างจริงใจที่จะ
แบ่งเบาภาระของ (2) ขึ้นอยู่กับข้อเท็จจริงเหล่านี้โลก
องค์การอนามัย (WHO) เรียกร้องให้ใหม่ได้รับการพิสูจน์
และการรักษาที่เหมาะสม ยาแผนโบราณหรือ
ยาสมุนไพรได้รับการใช้ในการรักษา
งูกัดทั่วโลกเพื่อให้เกิดประสิทธิภาพคงเดิมมันง่าย
พร้อมใช้งานและการจ่ายทางเศรษฐกิจที่ดี แต่
ส่วนผสมที่ใช้งานที่มีอยู่ในสมุนไพรเหล่านี้และส่วนใหญ่
สูตรที่มีประสิทธิภาพมีความจำเป็นที่ยังคงที่จะอธิบาย.
เราได้รายงานไปก่อนหน้า dialdehyde แลบเดน
โครงสร้าง (รูปที่ 1) ซึ่งถูกแยกออกจาก
นวนิยาย Curcuma zedoaroides ชนิดและการจัดแสดง
กิจกรรม antivenin ดี (3) . สายพันธุ์ในสกุล
ขมิ้นรวมทั้ง antinaia ขมิ้นและขมิ้น
contravenenum อยู่ในการใช้งานปกติในประเทศไทยกับ
พิษงูเห่า แต่พวกเขาจะยากมากที่จะพบในท้องถิ่น
อีสานตลาดในวันนี้ นอกจากนี้ของสมุนไพรเหล่านั้นอีก
สองพืชทางการแพทย์รวมทั้งฟ้าทะลายโจร
และ Tanacetum parthenium ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับ
การรักษางูกัดในอินเดียและจีน ทะลาย
โจรมีการใช้งานในประเทศอินเดียเป็นยาแก้พิษงู.
ดอย: 10.5582 / ddt.2012.v6.1.18 รายงานบทสรุป
. รูปที่ 1 โครงสร้างทางเคมีของ dialdehyde แลบเดน
H
O
O
www.ddtjournal.com
การค้นพบยาเสพติดและการบำบัด 2012; 6 (1):. 18-23
ใบของฟ้าทะลายโจรเอเป็นที่รู้จักเฉพาะ Nilavembu,
ถูกบดเป็นวางและใช้ topically ที่เว็บไซต์
ของกัดงู (4) Tanacetum parthenium สมาชิก
ของครอบครัวแอสเทอซึ่งเป็นที่รู้จักกันเป็น
ครอบครัว Compositae หมายถึงสมุนไพรที่รู้จักกันดีสำหรับ
คุณสมบัติของสมุนไพร ตั้งแต่สมัยโบราณสมุนไพรนี้ถูก
ใช้โดยชาวกรีกและชาวอียิปต์เช่นเดียวกับในช่วงต้นของ
ยุโรปสำหรับการรักษาจำนวนของการเจ็บป่วย
เช่นปวดหัว, ปวดท้อง, ปวดประจำเดือน, ร่วม
ปวดไข้ จีนใช้สมุนไพรนี้เนื่องจากการรักษาของ
คุณสมบัติต่อต้านแมลงและงูกัด (5) เพื่อที่จะ
อธิบายต่อไปส่วนผสมที่บัญชีสำหรับ antivenin
กิจกรรมของสมุนไพรเหล่านี้และพัฒนาสูตรที่มี
ประสิทธิภาพในการป้องกันพิษงูเราจัดทำและการทดสอบ
ในหลอดทดลองกิจกรรม antivenin ของสารสกัดบริสุทธิ์
และสูตรสารบางอย่างกับ Ophiophagus
พิษฮันนาห์ ในการศึกษาปัจจุบัน.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุ
Lyophilized ทุมพิษฮันนาห์ที่ได้รับจาก
สมเด็จพระราชินี Suavabha อนุสรณ์สถาบัน, Bangkok, Thailand.
พิษถูกละลายในน้ำเกลือ, aliquoted
และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสเป็นวิธีแก้ปัญหาสต็อก สมุนไพรรวมทั้ง
ซี zedoaroides ซี antinaia ซี contravenenum ก
ฟ้าทะลายโจรและต parthenium ซื้อจาก
คิงคอบร้าวิลเลจจังหวัดขอนแก่นประเทศไทย
สารเคมีและตัวทำละลายที่ซื้อมาจากดิช
(จิลลิ่งสหราชอาณาจักร) และการสังเคราะห์แลงแคสเตอร์ (Lancaster,
สหราชอาณาจักร) สเปกตรัมมวลที่ได้จากบรรยากาศ
ความดันเคมี Ionisation (APCI) โดยใช้ Hewlett-
Packard ตราสาร quadrupole 5989b (กรุงเวียนนาประเทศออสเตรีย).
ทั้งสองโปรตอนและคาร์บอน NMR สเปกตรัมที่ได้รับใน
Brucker กระแสสลับ 250 ตราสาร (Follanden วิตเซอร์แลนด์),
การสอบเทียบกับ สูงสุดอ้างอิงตัวทำละลาย อินฟาเรด
เปคตรัมที่ถูกพล็อตจากแผ่น KBr ใน Mattson 300
spectrophotometer FTIR (โคเวนทรี, สหราชอาณาจักร).
ห้องปฏิบัติการและ HPLC ไดคลอโรมีเทนเกรด
ปิโตรเลียมอีเทอร์60-80ºC, เอทิลอะซิเตคลอโรฟอร์ม-d
และเมทานอลซื้อจาก Fisher-วิทยาศาสตร์
(วอลแทม MA, USA) ระบบการสกัดวิธีการสกัดแบบ
เป็น QuickFit (C5 / 23) รุ่นที่มี (24/29) ร่วมกันจาก
BÜCHIวิตเซอร์แลนด์ เสื้อคลุมความร้อนที่ใช้เป็น
Heidolph EKT 3001 จาก Sigma-Aldrich สหราชอาณาจักร.
ระเหยแบบหมุนใช้เป็นBÜCHI Rotavapor
รุ่น R-144, วิตเซอร์แลนด์ 1H-NMR และ 13C-NMR ถูก
บันทึกไว้ใน Bruker ล่วงหน้า 400 ในคลอโรฟอร์ม-d คอลัมน์
โครมาได้ดำเนินการในซิลิกาเจลและ thinlayer
โค (TLC) ในเจล TLC ซิลิกา 60 F254.
2.2 การเตรียมสารสกัดและแยก
การทดสอบสาร
เหง้าของ zedoaroides ซีซี antinaia และซี
contravenenum (30 กรัมแห้งเหง้าผง)
ถูกสกัดด้วยไดคลอโรมีเทนใช้วิธีการสกัดแบบ
เครื่องสกัดตามลำดับ เมื่อวิธีการสกัดแบบ
เสร็จสมบูรณ์สกัดด้วยตัวทำละลายจะถูกลบออกภายใต้
ความดันลดลงจากขวดด้านล่างรอบโดยใช้
เครื่องระเหยแบบหมุน เนื้อหาสารสกัดจาก zedoaroides ซี
ซี antinaia และซี contravenenum ถูกรวบรวมและ
รหัสรายการ Kae1, Mia3 และ Rat7 ที่ได้รับมอบหมาย คอลัมน์
chromoatography ของสารสกัดที่ได้ดำเนินการโดยใช้
ปิโตรเลียมอีเทอร์: เอทิลอะซิเต (60:40) เป็นระบบตัวทำละลายและ
สารที่ถูกตรวจพบด้วยแสงยูวี, แมงกานีส,
และ 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) Kae1
สารสกัดที่สุดให้แลบเดน dialdehyde; สารสกัดจาก Mia3
ที่สุดให้แลบเดน dialdehyde และ lactone แลบเดน;
Rat7 ดึงให้ในที่สุดแลบเดน dialdehyde, แลบเดน
lactone และแลบเดน trialdehyde ข้อมูลสเปกตรัมของทั้ง
สามสารประกอบที่แสดงอยู่ในภาคผนวก.
ห้าสิบกรัมของใบแห้งและพื้นดินของก
ฟ้าทะลายโจรถูกสกัดด้วย 500 มลเมทานอล
ใช้ในการระบายวิธีการสกัดแบบ ตัวทำละลายที่ได้รับการระเหย
ตัวทำละลายออกโดยใช้การระเหยแบบหมุน การวิเคราะห์ TLC ได้รับการ
ดำเนินการกับไดคลอโรมีเทน: เมทานอล (95: 5) เป็นตัวทำละลาย
ผสมและทั้งสอง andrographolide และ 14 Deoxy-11,12-
didehydroandrographolide ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยคอลัมน์
โครมา ข้อมูลสเปกตรัมของ 14 Deoxy-11,12-
didehydroandrographolide จะแสดงในภาคผนวก.
ห้าสิบกรัมของวัสดุจากพืชบดตัน parthenium
ถูกสกัดด้วย 500 มลคลอโรฟอร์มใช้วิธีการสกัดแบบ
แยก การสกัดที่ได้รับการตรวจสอบโดย TLC กับ
เอทิลอะซิเต: ปิโตรเลียมอีเทอร์ 60-80 ° C (70:30) และ TLC
จานรับการพัฒนาด้วยสารวานิลและให้ความร้อนที่
400 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที สองจุดห้ากรัมของสารสกัดหยาบถูก
กลืนหายไปในปริมาณต่ำสุดของน้ำนมในความร้อน
และ 1/3 ของปริมาณน้ำมันของอีเธอร์ถูกบันทึกและระบายความร้อน
บนน้ำแข็ง ตัวอย่างสีเหลืองได้รับการ recrystallised จากเอทิล
อะซิเตท: ปิโตรเลียมอีเทอร์ (70:30) เพื่อให้ parthenolide 130 มิลลิกรัม
เป็นผงสีขาวออก ข้อมูลสเปกตรัมของสารนี้
จะแสดงในภาคผนวก.
2.3 การจัดทำซีสูตร contravenemum
แก้ปัญหาเอทานอล (รหัสรายการ: OHRat7): สำหรับการเตรียมความพร้อม
ของการแก้ปัญหาเอทานอล 0.5 กรัมเข้มข้น
สารสกัดจากซี contravenemum ถูกละลายใน 5 มิลลิลิตรของ
เอทานอลและแบ่งออกเป็นสองส่วนของ 2.5 มิลลิลิตรแต่ละ ให้เป็นหนึ่งใน
ตัวอย่าง OHRat7 3 หยดกรด TRIFLUOROACETIC ถูก
เพิ่ม กลุ่มตัวอย่างทั้งสองถูกบ่มที่ 36 องศาเซลเซียสเป็นระยะเวลา 1
สัปดาห์ที่ผ่านการทดสอบแล้ว.
น้ำสำหรับฉีด (รหัสรายการ: AqRat7): สำหรับการเตรียมความพร้อม
ของการแก้ปัญหาสำหรับการฉีด 2.5 เทียบเท่าของ
สารละลาย Na2S2O5 10% ถึง 0.2 กรัมของสารสกัดใน
0.1 มิลลิลิตร DMSO ถูกผสมจนเป็นเนื้อเดียวกันและน้ำที่ถูก
เพิ่มจนถึงเล่มสุดท้ายของ 4 มล.
เหน็บ (รหัสรายการ: Rat7S): เหน็บ (3
กรัม) ที่มีส่วนผสมที่ใช้งาน 30% ถูกจัดทำขึ้นโดย
วิธีการฟิวชั่นไว้ก่อนหน้านี้ อธิบาย (6) หกสิบหกกรัม
ซีเหง้า contravenemum ให้ 1.98 กรัมสารสกัดหยาบ,
ถูกสกัดด้วย 300 มลอะซีโตนตามที่อธิบายไว้
19
www.ddtjournal.com
20 การค้นพบยาเสพติดและการบำบัด 2012; 6 (1): 18-23.
3 ผลการทดลองและการอภิปราย
3.1 ในกิจกรรม antivenin หลอดทดลองของสารสกัดหยาบจาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

www.ddtjournal . com
18 การค้นพบยา& ) . 2012 ; 6 ( 1 ) : 18-23 .
การจำแนกและการประเมินผลของตัวแทนที่แยกจากผ้า
ใช้สมุนไพรต่อต้านพิษงูกะปะ ริมะ salama1 จินตนาพิษ
Hannah , sattayasai2 อรุณกุมาร , gande1 อติ sattayasai3 davis1 , ไมค์ , เอริค lattmann1
*
1 กองเภสัชกรรม โรงเรียนแห่งชีวิตและสุขภาพ มหาวิทยาลัยแอสตันเบอร์มิงแฮม อังกฤษ ;
,2 ภาควิชาเภสัชวิทยา คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น , ขอนแก่น , ประเทศไทย ;
3 ภาควิชาชีวเคมี คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น จังหวัดขอนแก่น .
* ที่อยู่ :
ดร. อีริค lattmann กองเภสัชกรรมสำนัก
ชีวิตและสุขภาพ แอสตันมหาวิทยาลัยแอสตัน 7et b4
สามเหลี่ยม , เบอร์มิงแฮม , อังกฤษ e.lattmann @
-
โดย ac.uk แอ .จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้คือ ประการแรกระบุโมเลกุลที่ใช้งานอยู่ใน

ผ้า
สมุนไพรที่ใช้ในการรักษางูกัด เช่น ขมิ้นชัน
antinaia contravenenum สมุนไพรฟ้าทะลายโจร ขมิ้นชัน และ tanacetum
, ,

parthenium ; ประการที่สองทดสอบคล้ายโครงสร้างโมเลกุลที่เกี่ยวข้องและในที่สุด

สูตรการเตรียมความพร้อมและประเมินประสิทธิภาพต่อต้านพิษงูกะปะ ฮันนาห์ พิษ intoxification .
3 สารประกอบแลบเดนตาม รวมทั้งแลบเดน
dialdehyde แลบเดน , ข้อมูล และ trialdehyde แลบเดน
2 แลคโตนรวมและแยกได้โดย parthenolide 12-didehydroandrographolide

คอลัมน์โครมาโทกราฟีและลักษณะ . การแยกจากหนู

hemidiaphragm กะบังลม การเตรียมการ ผลของสารสกัดปฏิปักษ์ ,

และแยกสารประกอบที่เตรียมตำรับวัดในหลอดทดลองในการยับยั้ง
ส่งและ . ในการยับยั้งการหดตัวของกล้ามเนื้อ ผลิตโดย μ
5 g / ml พิษ คือ
กลับโดยตัวแทนทดสอบในการเตรียมอาบน้ำออร์แกน a
แลบเดน trialdehyde , แยกจาก contravenenum
, ถูกระบุว่าเป็นดีที่สุด antagonising ตัวแทนใน
ช่วงไมโครโมลาร์น้อยการทดสอบสูตรของ
มีศักยภาพมากที่สุด . . contravenenum สกัดพบว่า
เหน็บกับ witepsol h15 เป็นยาต่อต้านพิษมีประสิทธิภาพ
o . Hannah . การศึกษา
ผลิตภัณฑ์สารประกอบที่ใช้งานอยู่ , การบัญชีสำหรับ
antivenin กิจกรรมของแบบดั้งเดิมและใช้สมุนไพร
แนะนำสูตรที่เหมาะสมที่สุด ซึ่งจะช่วยพัฒนายาต้า

สำหรับรักษางูกัดในอนาคต
คำสำคัญ : กิจกรรม antivenin หนู hemidiapragm , เส้นประสาท , dialdehyde
แลบเดน , trialdehyde แลบเดน parthenolide

, , desoxy แอนโดรกราโฟไลด์ 1 บทนำ
อุบัติการณ์ที่เกิดขึ้นจริงและความรุนแรงของงูพิษ
ในปัจจุบัน undervalued มาก ( 1 ) ความสำคัญของงูกัด

ถือว่าเป็นสาขาอาชีพที่ก่อให้เกิดโรคทั้งพิการและ mortalities . นี้
โรคที่ก่อให้เกิดความเสียหายกับบุคคล ที่เกี่ยวข้องในงานเกษตร

ภูมิภาคเขตร้อนทั่วโลก ข้อมูลทางระบาดวิทยาที่ไม่ถูกต้องก่อให้เกิดปัญหาในการการประเมินค่าต่ำไป

ระหว่างประเทศนี้ ที่ต้องใช้ทั้งความตั้งใจสูงจริงใจและความพยายาม

ลดภาระของ ( 2 ) จากข้อมูลเหล่านี้ องค์กรอนามัยโลก ( WHO )

เรียกใหม่ พิสูจน์และการรักษาราคาไม่แพง ยาแบบดั้งเดิมหรือ
สมุนไพรได้ถูกใช้สำหรับการรักษา
งูกัดทั่วโลกของยืนยันประสิทธิภาพ ใช้งานง่าย
, และ affordability เศรษฐกิจดี อย่างไรก็ตาม
ส่วนผสมที่มีอยู่ในสมุนไพรเหล่านี้และส่วนใหญ่
มีประสิทธิภาพสูตรยังเป็นต้องทำการ .
เราได้เคยรายงาน
dialdehyde แลบเดนโครงสร้าง ( รูปที่ 1 ) ซึ่งถูกแยกจากนวนิยาย ขมิ้นชันชนิดและมี zedoaroides

ดี antivenin กิจกรรม ( 3 ) สายพันธุ์ในประเภทได้แก่ ขมิ้นชันขมิ้นชัน ขมิ้นชัน และ antinaia

contravenenum อยู่ปกติใช้ในประเทศไทยกับ
งูเห่าพิษ แต่พวกเขามีมากหายากในตลาดท้องถิ่นอีสาน
ในวันนี้ นอกจากนี้สมุนไพรอื่น
สองพืชทางการแพทย์ ได้แก่ ฟ้าทะลายโจร และ tanacetum parthenium

มีการใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อรักษางูกัดในอินเดียและจีน ฟ้าทะลายโจร เป็นสมุนไพร
ใช้ในอินเดียเป็นงูพิษถอนพิษ

10.5582/ddt.2012.v6.1.18 ดอย : รายงานสั้น ๆ รูปที่ 1 โครงสร้างทางเคมีของแลบเดน dialdehyde .
H
o
O
www.ddtjournal . com
ค้นพบยา& ) . 2012 ; 6 ( 1 ) :
18-23 .ใบของฟ้าทะลายโจรใน A , ที่รู้จักกันเป็น nilavembu
, ถูกบดเป็นวาง และใช้ topically ที่เว็บไซต์
ของการกัดของงู ( 4 ) tanacetum parthenium สมาชิก
ของครอบครัว Asteraceae ซึ่งเป็นที่รู้จักกันเป็น
ครอบครัว Compositae เป็นสมุนไพรที่รู้จักกันดีของ
สมุนไพรสรรพคุณ ตั้งแต่ครั้งโบราณ สมุนไพรนี้คือ
ใช้โดยชาวกรีกและอียิปต์ รวมทั้งต้น
ยุโรปสำหรับการรักษาจำนวนของโรค
เช่นปวดหัว , ปวดท้อง , อาการปวดระดูร่วม
อาการไข้ จีนใช้สมุนไพรนี้เนื่องจากการรักษา
คุณสมบัติกับแมลงและงูกัด ( 5 ) เพื่อ
เพิ่มเติมมากกว่าส่วนผสมที่บัญชีสำหรับ antivenin
กิจกรรมของสมุนไพรเหล่านี้และพัฒนาสูตรที่
ประสิทธิภาพป้องกันงูพิษเราเตรียมและทดสอบในหลอดทดลอง antivenin
กิจกรรมของ สารสกัดบริสุทธิ์ ผสมกับพิษงูกะปะและบางสูตร

Hannah พิษในการศึกษา .
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัสดุแห้ง o .
Hannah พิษได้จาก
ราชินี suavabha อนุสรณ์สถาบัน , กรุงเทพมหานคร , ประเทศไทย .
พิษละลายในน้ำเกลือ aliquoted
,และเก็บไว้ที่ 20 ° C ) เป็นหุ้นโซลูชั่น สมุนไพร รวมทั้ง zedoaroides
C , C . antinaia , C . contravenenum , A .
2 และ ต. parthenium ซื้อจาก
หมู่บ้านงูจงอางจังหวัดขอนแก่นประเทศไทย
สารเคมีและตัวทำละลายที่ซื้อมาจากดิช
( Gillingham , สหราชอาณาจักร ) และ แลงคาสเตอร์ ( แลงแคสเตอร์ , การสังเคราะห์
UK ) มวลสเปกตรัมที่ได้จาก ionisation เคมีความดันบรรยากาศ
( ACPI )ใช้ Hewlett - Packard 5989b
คำเครื่องมือ ( เวียนนา , ออสเตรีย ) .
ทั้งโปรตอนและคาร์บอน NMR spectra ได้รับในการ brucker AC 250 เครื่องดนตรี ( follanden , สวิตเซอร์แลนด์ ) ,
เทียบกับอ้างอิงยอดตัวทำละลาย สีแดง infra
spectra ถูกวางแผนจาก KBR แผ่นดิสก์ในแม็ตสัน 300
( Spectrophotometer ( โคเวนทรี , อังกฤษ ) .
ปฏิบัติการและไดคลอโรมีเทนเกรด HPLC
ปิโตรเลียมอีเทอร์ 60-80 º Cเอทิลอะซิเตท , chloroform-d
และเมทานอล ซื้อมาจาก ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์
( วอลแทม , MA , USA ) ระบบการสกัดไขมัน
เป็น quickfit ( C5 / 23 ) รุ่นด้วย ( 24 / 29 ) ร่วมกันจาก
b Üชิ , สวิตเซอร์แลนด์ เครื่องที่ใช้เป็นเสื้อคลุม
heidolph ekt 3001 จากซิกม่า Aldrich UK .
หมุนระเหยที่ใช้ คือ แบบ B Üชิ rotavapor
r-144 สวิตเซอร์แลนด์ และมี 1h-nmr 13c-nmr
บันทึกไว้ในบรุคเกอร์ล่วงหน้า 400 ในคอลัมน์โครมาโตกราฟี chloroform-d.
ได้ดําเนินการบนซิลิกาเจลและ thinlayer
chromatography ( TLC ) บน TLC ซิลิกาเจล 60 f254 .
2.2 . การเตรียมสารสกัดและแยกสารทดสอบ

zedoaroides เหง้าของ C , C . antinaia และ C .
contravenenum 30 กรัมของผงแห้ง เหง้า )
ถูกสกัดด้วยไดคลอโรมีเทน โดยใช้ 1