Protoplast fusion: PEG methodThe fo

Protoplast fusion: PEG method
The following protocol for the chemical PEG (polyethylene
glycol) method of protoplast fusion is simple, efficient,
inexpensive and non-toxic to plant protoplasts. Electrofusion
also works quite well (Guo and Deng 1998). Mix
approximately equal volumes of purified protoplasts from
each parental source in BH3 medium (Table 2) and centrifuge
for 4 min at 100 g. Resuspend the pellet of mixed
protoplasts in a volume of BH3 medium equal to 4 9 to
20 9 the volume of the original pellet (10 9 is recommended
for initial experiments, with subsequent adjustments
based on obtained plating efficiencies). Pipette two
drops of the resuspended mixture into 60 9 15 plastic Petri
dishes. Immediately add 2 drops of fresh PEG solution
(40% polyethylene glycol 8000, 0.3 M glucose, and
66 mM CaCl2 at pH = 6) to each fusion Petri dish and
incubate 8 min. If using stored PEG solution, it may be
necessary to readjust the pH. Add 2 drops of A ? B
solution (9:1 v:v mixed immediately prior to use,
A = 0.4 M glucose, 66 mM CaCl2, and 10% dimethylsulfoxide
at pH = 6; and B = 0.3 M glycine at pH = 10.5
using KOH pellets) to each fusion Petri dish. Following
another incubation of 12 min, add 12–15 drops of BH3
medium to the periphery of the fusing protoplasts. After a
5 min incubation, carefully remove the PEG plus [A ? B]
solution with a Pasteur pipette (without removing protoplasts)
and replace it with 15 drops BH3 medium. After
incubating another 10 min, remove the BH3 medium with
a Pasteur pipette and replace it with 12–15 drops fresh BH3
medium. Repeat this washing step two more times, always
carefully avoiding the loss of protoplasts. After the final
wash, protoplasts can be cultured directly in the fusion
Petri dish either in a shallow pool (8–12 drops medium) or

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Protoplast ฟิวชั่น: วิธี PEGโพรโทคอลต่อการตรึงสารเคมี (เอทิลีนglycol) วิธีการหลอมเหลว protoplast เป็นง่าย มี ประสิทธิภาพราคาไม่แพง และไม่เป็นพิษกับพืชโป Electrofusionยัง ทำงานได้ค่อนข้างดี (กัวและเต็ง 1998) ผสมประมาณเท่ากับปริมาณของโปบริสุทธิ์จากแต่ละแหล่งโดยผู้ปกครองในเครื่องหมุนเหวี่ยงและ BH3 ปานกลาง (ตารางที่ 2)ใน 4 นาที 100 กรัม Resuspend เม็ดของผสมโปปริมาณของกลาง BH3 เท่ากับ 9 4 การ20 9 ปริมาตรของเม็ดเดิม (10 9 ขอแนะนำสำหรับการทดลองครั้งแรก มีการปรับปรุงต่อมาตามประสิทธิภาพการชุบได้รับ) ประหยัดพื้นที่ 2หยดส่วนผสม resuspended ใน 60 9 15 Petri พลาสติกอาหาร เพิ่มทันที 2 หยดสด PEG โซลูชัน(40% polyethylene glycol 8000, 0.3 M กลูโคส และ66 มม. CaCl2 ที่ pH = 6) ให้แต่ละจานเพาะเชื้อหลอม และฟัก 8 นาที ถ้าใช้เก็บโซลูชัน PEGจำเป็นต้องปรับเปลี่ยน pH เพิ่ม 2 หยด A Bโซลูชัน (9:1 v: v ผสมทันทีก่อนนำไปใช้A = 0.4 M กลูโคส 66 มม. CaCl2 และ 10% dimethylsulfoxideที่ pH = 6 และ B = 0.3 M glycine ที่ pH = 10.5ใช้เกาะขี้) ให้แต่ละจานเพาะเชื้อฟิวชั่น ต่อไปนี้คณะทันตแพทยศาสตร์อีก 12 นาที เพิ่ม 12-15 หยด BH3ปานกลางถึงยสปริงของโป fusing หลังจากคณะทันตแพทยศาสตร์ 5 นาที รอบคอบเอา PEG บวก [A บี]ด้วยเปตต์ระดับ (โดยไม่ต้องเอาโป)และแทนที่ ด้วยสื่อ 15 หยด BH3 หลังจากincubating อีก 10 นาที เอากลาง BH3 ด้วยระดับการประหยัดพื้นที่ และแทนที่ ด้วย 12-15 หยดสด BH3สื่อ ทำซ้ำขั้นตอนนี้ซักสองครั้ง เสมอระมัดระวังหลีกเลี่ยงการสูญเสียโป หลังสุดท้ายล้าง สามารถ cultured โปในการฟิวชั่นจาน Petri ในสระว่ายน้ำตื้น (8-12 หยดกลาง) หรือ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โปรโตพลาสต์ฟิวชัน : PEG วิธีการ
ว่าด้วยสารเคมี PEG ( polyethylene glycol ต่อไปนี้
) วิธีการโปรหลอมง่าย ประสิทธิภาพสูง ราคาไม่แพง และไม่เป็นพิษต่อพืช
. electrofusion
ยังทำงานได้ค่อนข้างดี ( กัวเตงและ 1998 ) ผสม
ประมาณเท่ากับปริมาณเอนไซม์บริสุทธิ์จากผู้ปกครองในแต่ละแหล่ง bh3
) ( ตารางที่ 2 ) และเหวี่ยง
4 นาทีที่ 100 กรัมresuspend เม็ดผสม
พลาสต์ในปริมาณปานกลาง bh3 เท่ากับ 4 9

20 9 ปริมาณของเม็ดเดิม ( 10
9 แนะนำการทดลองเริ่มต้นด้วยการปรับเปลี่ยนในภายหลัง
ขึ้นอยู่กับประสิทธิภาพ ( ชุบ ) เปตสอง
หยดของ resuspended ผสม 60 9 15 Petri
พลาสติกอาหาร เพิ่มทันที 2 หยดของสารละลาย PEG
สด ( 40% polyethylene glycol 8000 03 เมตรกลูโคสและ
66 มม. ผลิตที่ pH = 6 ) แต่ละแบบและบ่มจานเพาะเชื้อ
8 นาที ถ้าใช้เก็บแพกโซลูชั่น อาจจะต้องปรับ pH เพิ่ม
2 หยด ? b
โซลูชั่น ( 9 : 1 V : V ผสมทันทีก่อนใช้
= 0.4 เมตรกลูโคส , 66 มม. CaCl2 และ 10% ไดเมทิลซัลฟอกไซด์
ที่ pH = 6 ; และ b = 0.3 M glycine pH = 10.5
ใช้เกาะเม็ด ) แต่ละฟิวชั่นจานเพาะเชื้อ ต่อไปนี้
บ่มอีก 12 นาที เพิ่ม 12 – 15 หยด bh3
กลางรอบนอกของการรวมโปรโตพลาสต์ . หลังจาก
5 นาทีระยะเวลาอย่างเอาหมุดพลัส [ ? b ]
โซลูชั่นกับปาสเตอร์เปต ( โดยไม่ต้องถอดโปรโตพลาสต์ )
และแทนที่ด้วย 15 หยด bh3 ปานกลาง หลังจาก
เพาะอีก 10 นาที เอากลาง bh3 กับการปิเปตปาสเตอร์ และแทนที่ ด้วย 12 – 15 หยดสด bh3
ปานกลาง ทำซ้ำขั้นตอนนี้ซัก 2 ครั้ง เสมอ
อย่างระมัดระวังหลีกเลี่ยงการสูญเสียของเอนไซม์ . หลังจากล้างน้ำสุดท้าย
, โปรโตพลาสต์สามารถเพาะเลี้ยงได้โดยตรงในฟิวชั่น
จานเพาะเชื้อทั้งในสระตื้น ( 8 – 12 หยดปานกลาง ) หรือ