Extraction of proteins from rubber

Extraction of proteins from rubber particles by SDS solution, enzymatic deproteinization and saponification reaction

The large and small rubber particles obtained from centrifugation were dispersed in 2% (w/v) SDS and stirred overnight at 4°C. Each mixture was then centrifuged at 19,000 rpm for 1 h at 20°C to remove rubber particles from the aqueous phase which contained soluble proteins.

The 30% dry rubber content (DRC) of large rubber particles in 0.2% (w/v) Triton®X-100 solution was incubated with 0.04% (w/v) proteolytic enzyme (KP 3939) at 37°C for 16 h followed by centrifugation at 14,000 rpm for 1 h (11). The cream fraction was redispersed in 0.2% (w/v) Triton®X-100 solution and recentrifuged under the same conditions. The deproteinized natural rubber (DPNR) latex was obtained from the dispersion of the cream fraction in a 0.2% (w/v) Triton®X-100 aqueous solution.

To decompose phospholipids deproteinized natural rubber latex was treated with 1% (w/v) NaOH at 70°C for 3 h in a saponification reaction (18) and then centrifuged at 19,000 rpm for 1 h at 20°C to separate the serum fraction.

Proteins precipitation with TCA in acetone

The serum fraction was prepared in the presence of 10% (w/v) trichoroacetic acid (TCA) in acetone with 0.07% (v/v) 2-mercaptoethanol. Proteins were subjected to precipitate for 45 min at − 20°C. Pellet proteins were collected by centrifugation and were further washed with cold acetone containing 0.07% (v/v) 2-mercaptoethanol. Residual acetone was removed by air-drying and the proteins were redissolved in lysis buffer, 8 M urea, 4% (v/v) CHAP, 60 mM DTT and 2% (v/v) PharmalyteTM.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การสกัดโปรตีนจากอนุภาคยางโดย SDS โซลูชัน deproteinization เอนไซม์ และปฏิกิริยาสะพอนิฟิอนุภาคยางมีขนาดใหญ่ และขนาดเล็กที่ได้จากการหมุนเหวี่ยงกระจายใน 2% (w/v) SDS และกวนข้ามคืนที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ส่วนผสมแต่ละถูกแล้วเหวี่ยงที่ 19,000 rpm สำหรับ h 1 ที่ 20° C เพื่อเอาอนุภาคยางจากอควีที่ประกอบด้วยโปรตีนละลายน้ำเนื้อหา 30% ยางแห้ง (DRC) ของอนุภาคยางขนาดใหญ่ในโซลูชัน Triton ® X-100 0.2% (w/v) ไม่ได้รับการกกกับ 0.04% (w/v) ได้เอนไซม์ (KP 3939) ที่ 37 ° C เป็นเวลา 16 ชม.ตาม ด้วยหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 rpm สำหรับ h 1 (11) ส่วนครีม redispersed 0.2% (w/v) Triton ® X-100 โซลูชัน และ recentrifuged ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน น้ำยางธรรมชาติ deproteinized (DPNR) ได้รับจากการกระจายตัวของเศษส่วนครีม 0.2% (w/v) Triton ® X-100 ละลายการสลายกำแพง deproteinized ยางรักษา ด้วย 1% (w/v) NaOH ที่อุณหภูมิ 70° C สำหรับ 3 ชม.ในปฏิกิริยาสะพอนิฟิ (18) และเหวี่ยงแล้ว ที่ 19,000 rpm สำหรับ h 1 ที่ 20° C เพื่อแยกเศษส่วนซีรั่มตกตะกอนโปรตีน ด้วย TCA ในอะซิโตนเศษส่วนเซรั่มถูกจัดเตรียมไว้ใน trichoroacetic 10% (w/v) กรด (TCA) อะซีโตนกับ 0.07% (v/v) 2-mercaptoethanol โปรตีนที่ผ่านการตกตะกอนสำหรับ 45 นาทีที่− 20 องศาเซลเซียส โปรตีนเม็ดถูกจัดเก็บ โดยหมุนเหวี่ยง และเพิ่มเติมถูกล้าง ด้วยอะซิโตนเย็นประกอบด้วย 0.07% (v/v) 2-mercaptoethanol ออกไปเหลือโตน air-drying และโปรตีนถูก redissolved ในบัฟเฟอร์ lysis ยูเรีย 8 เมตร 4% (v/v) CHAP, 60 mM DTT และ 2% (v/v) PharmalyteTM

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสกัดโปรตีนจากอนุภาคยางโดยวิธี SDS, การย่อยของเอนไซม์และปฏิกิริยาสะพอขนาดใหญ่และขนาดเล็กอนุภาคยางที่ได้รับจากการหมุนเหวี่ยงก็แยกย้ายกันใน 2% (w / v) SDS และกวนค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส แต่ละส่วนผสมที่ถูกปั่นแล้วที่ 19,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 20 ° C เพื่อเอาอนุภาคยางจากเฟสน้ำที่มีโปรตีนที่ละลายน้ำได้. เนื้อหายาง 30% แห้ง (DRC) ของอนุภาคยางขนาดใหญ่ใน 0.2% (w / v) ไทรทัน ®X-100 แก้ปัญหาที่ถูกบ่มกับ 0.04% เอนไซม์ (KP 3939) (v / w) ที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 16 ชั่วโมงตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 ชั่วโมง (11) ส่วนครีมถูก redispersed ใน 0.2% (w / v) Triton®X-100 วิธีการแก้ปัญหาและ recentrifuged ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน ยางธรรมชาติโปรตีนต่ำ (DPNR) น้ำยางที่ได้รับจากการกระจายตัวของส่วนครีมใน 0.2% (w / v) Triton®X-100 สารละลาย. ในการย่อยสลายโปรตีนต่ำ phospholipids น้ำยางธรรมชาติได้รับการรักษาด้วย 1% (w / v ) NaOH ที่ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 ชั่วโมงในการทำปฏิกิริยาสะพอ A (18) และจากนั้นหมุนเหวี่ยงที่ 19,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 20 ° C ที่จะแยกส่วนซีรั่ม. โปรตีนตกตะกอนกับ TCA ในอะซีโตนเศษซีรั่มถูกจัดทำขึ้นในการปรากฏตัวของ 10% (w / v) กรด trichoroacetic (TCA) ในอะซิโตนกับ 0.07% (v / v) 2-mercaptoethanol โปรตีนที่ถูกยัดเยียดให้ตกตะกอนเป็นเวลา 45 นาทีที่ - 20 ° C โปรตีนเม็ดที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงและถูกล้างต่อด้วยอะซิโตนเย็นที่มี 0.07% (v / v) 2-mercaptoethanol อะซิโตนที่เหลือจะถูกลบออกจากอากาศแห้งและโปรตีนที่ถูก redissolved ในบัฟเฟอร์สลาย 8 เมตรยูเรีย, 4% (v / v) CHAP 60 มิลลิ DTT และ 2% (v / v) PharmalyteTM

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดโปรตีนจากอนุภาคยางโดยเฉพาะโซลูชั่นที่มีเอนไซม์และปฏิกิริยาสปอนนิฟิเคชั่นขนาดอนุภาคยางขนาดเล็กที่ได้จากการปั่นเหวี่ยงการกระจายตัวใน 2% ( w / v ) SDS และคนค้างคืนที่ 4 องศา จากนั้นส่วนผสมแต่ละระดับที่ 19 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 20 ° C เพื่อเอาอนุภาคของยางจากเฟสน้ำ ซึ่งมีโปรตีนที่ละลายน้ำได้30 % ของเนื้อยางแห้ง ( DRC ) ของอนุภาคยางขนาดใหญ่ใน 0.2% ( w / v ) Triton X-100 ®โซลูชั่นถูกบ่มกับ 0.04 % ( w / v ) ต่อเอนไซม์ย่อยโปรตีน ( KP 3939 ) ที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 16 ชั่วโมง ตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 14000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ( 11 ) ครีม redispersed ในเศษส่วนเป็น 0.2% ( w / v ) Triton X-100 และโซลูชั่น® recentrifuged ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน การ deproteinized ยางธรรมชาติ ( ต่ำ ) น้ำยางที่ได้จากการกระจายของครีมส่วน 0.2% ( w / v ) ®สารละลาย Triton X-100 .ส่วนกลุ่มเป้าหมาย deproteinized น้ำยางธรรมชาติที่ได้รับการรักษาด้วย 1% ( w / v ) NaOH ที่ 70 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 ชม. ในปฏิกิริยาสปอนนิฟิเคชั่น ( 18 ) และระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 20 ° C เพื่อแยกซีรั่มเศษส่วนโปรตีนที่ตกตะกอนด้วย TCA )เซรั่มส่วนเตรียมในการปรากฏตัวของ 10% ( w / v ) trichoroacetic acid ( TCA ) ) กับ 0.07 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) อย่างเดียว . โปรตีนถูกตกตะกอนสำหรับ 45 นาทีที่ 20 องศา บริษัท เวสเทิร์น โปรตีนมีจำนวน 3 เม็ด และมีเพิ่มเติม ล้างด้วยอะซีโทนเย็นที่มี 0.07 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) อย่างเดียว . อะซิโตนที่เหลือออกด้วยอากาศแห้งและโปรตีนเป็น redissolved ในการสลายบัฟเฟอร์ 8 M ยูเรีย , 4 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) แบบ 60 มม. DTT และ 2% ( v / v ) pharmalytetm .