PCR amplification, cloning and sequ

PCR amplification, cloning and sequencing

Initial screening of samples for phytoplasma infection was performed using the TaqMan real-time PCR assay of
Christensen et al. (2004).
PCR reactions were set up in a volume of 20 μL containing a final concentration of 1×
LightCycler 480 Probes Master (Roche Diagnostics, Mannheim,Germany), 300 nM of each primer, 120 nM of the
TaqMan probe, 0.4 mg/mL bovine serum albumin Fraction V (BSA) and 2 μL of DNA template. Real-time PCR
cycling was performed on a Rotorgene 3000 real-time rotary analyser (Qiagen, Valencia, CA, USA) or a CFX96
real-time PCR detection system (Bio-Rad, Hercules, CA,USA).
Cycling conditions were: an initial cycle at 95°C for 5 min, then 40 or 50 cycles of 95°C for 10 s and 60°C for
45 s. Real-time PCR results were analysed with the manufacturer’s software.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขยาย PCR โคลนลำดับและคัดกรองเบื้องต้นของตัวอย่างเชื้อ phytoplasma ถูกดำเนินการโดยใช้ TaqMan Real-time PCR ทดสอบของคริส, et al (2004). ปฏิกิริยา PCR ถูกตั้งขึ้นในปริมาณ 20 ไมโครลิตรที่มีความเข้มข้นสุดท้ายของ 1 × LightCycler 480 Probes โท (การวินิจฉัยโรชไฮม์เยอรมนี) 300 นิวตันเมตรแต่ละไพรเมอร์ 120 นาโนเมตรของการสอบสวน TaqMan 0.4 มิลลิกรัม / mL วัวซีรั่มอัลบูมิเศษส่วน V (BSA) และ 2 ไมโครลิตรของแม่แบบดีเอ็นเอ Real-time PCR ขี่จักรยานได้รับการดำเนินการบน Rotorgene 3000 เวลาจริงการวิเคราะห์แบบหมุน (Qiagen, วาเลนเซีย, CA, USA) หรือ CFX96 Real-time PCR ระบบตรวจจับ (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). สภาพการขี่จักรยานคือ: วงจรเริ่มต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีแล้ว 40 หรือ 50 รอบจาก 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 วินาทีและ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา45 วินาที แบบ Real-time PCR ผลที่ได้มาวิเคราะห์กับซอฟต์แวร์ของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การโคลนและการขยาย PCR ,การเริ่มต้นของตัวอย่างเชื้อไฟโตพลาสมาแสดงโดยใช้ taqman PCR assay ของเรียลไทม์คริสเตนเซน et al . ( 2004 )ปฏิกิริยา PCR ได้ถูกเซ็ตอัพในหมวดของ 20 μ L ที่มีความเข้มข้นสุดท้าย 1 ×lightcycler 480 ) ปริญญาโท ( โรชวินิจฉัย Mannheim , เยอรมัน ) , 300 nm ของแต่ละคู่ , 120 nm ของtaqman probe , 0.4 มก. / มล. ส่วนอัลบูมิน V ( BSA ) และ 2 μ L ของแม่แบบดีเอ็นเอ เรียลไทม์ พีซี ร์จักรยานถูกแสดงบน rotorgene 3000 แบบโรตารี่เครื่อง ( เพิ่ม , Valencia , CA , USA ) หรือ cfx96โดยระบบตรวจจับแบบเรียลไทม์ ( ไบโอ ราด , Hercules , CA , USA )เงื่อนไขการขี่จักรยานคือเริ่มต้นวัฏจักรที่ 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาทีแล้ว 40 หรือ 50 รอบ 95 องศา C 10 และ 60 ° C สำหรับ45 . เวลาจริงผล PCR วิเคราะห์ด้วยโปรแกรมของผู้ผลิต